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全自动血液分析仪复检标准.ppt

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景,CBC和DC的复检review日益受到重视。,目前,尚无一个完善的权威性的并能供临床实验室参照执行的标准或指南即对CBC结果复检的标准、内容、方法及程序尚无明确的规定。,6,背 景,中华医学会检验分会制定三分群血细胞分析仪应用指南:,“三分群仪器结果只有在同时出现WBC、Hb、PLT及3种直方图均正常并仪器无报警才能向临床报告“分群结果而不需要镜检,即白细胞三分群的结果只适合在正常血象才有意义。,7,Each laboratory has developed its own criteria for action after an automated analysis of a blood sample.The objective is to reduce the number of samples unnecessarily requiring action such as smear review(false positives)to the greatest possible extent,while not endangering the patient by reporting false or misleading results(false negative results).,-,美国国际血液学实验室委员会,(LISH),主席,Elkin Simson,博士。,背 景,8,背 景,国际血液学复检专家组International Consensus Group for Hematology Review和美国临床实验室标准化协会Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI,自动血细胞计数和白细胞分类计数的复检规那么。,9,一、复检的现状,CBC和DC自动分析仪对WBC、RBC、PLT和对特征明显得成熟WBC分类优于人工。,人力本钱增加;高级技术人员缺乏,使得有减少手工操作的需求和趋势。,大多数情况下不需要人工CBC和DC,而人工DC主要用于鉴别幼稚细胞。,不同实验室对涂片要求不一,复检率为595,10,一、复检的现状,2002年,Dr.Houwen邀请了20专家讨论和制定了自动CBC和DC的复检标准,并在6个国家17个实验室试行。,2005年,国际血液复检专家组提出了自动CBC和DC的复检规那么,即41条。,11,二、复检的定义与范围,Consensus Guidelines:Combined Laboratories Truth Table Number Percentage,True Positive 1483 11.20%False Positive 2476 18.60%True Negative 8953 67.30%False Negative 386 2.90%Total number of samples 13298,Barnes等在15个实验室,13298份标本,4个厂商,7种机型包括CD-4000,LH-750,XE-2100和ADVIA等。,12,二、复检的定义与范围,目前,所有的血细胞分析仪只能作为CBC的过筛工具screening tool)。,13,二、复检的定义与范围,复检的定义:,自动CBC和DC复检是指自动血细胞分析仪的结果包括数据、直方图或散点图出现报警flag信号或与临床不符等情况下所采取得措施和行为。,14,二、复检的定义与范围,报警包括以下三类:,非形态学报警信号;如Hb测定所遇到的混浊turbidity、干扰interference、白细胞异常直方图abnormal scattergram、PLT聚集clumps、RBC凝集agglutination、超过仪器本身的检测线性范围。,15,二、复检的定义与范围,报警包括以下三类:,2.形态学报警信号;如原始细胞blast、有核红细胞NRBC、不成熟粒细胞immature granulocyte、变异或非典型的淋巴细胞variant 或 atypical lymphocyte、双型红细胞(dimorphic RBC、RBC碎片fragment及出现异常红细胞不能计数等。,3.仪器运行报警信号instrument function flags;如仪器运行状态不佳或堵孔等。,16,三、复检的内容和标准,复检不是通常所指的“人工分类以显微镜分类100200个有核细胞。,复检的内容:,复查retesting,人工对仪器报告的审核visual control of instrumental report,涂片镜检slide review,人工分类manual differential,标本确实认/鉴定verify sample integrity/identity,仪器运行状态的检查look at instrument output,17,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组制定的自动CBC和DC的41条复检规那么。,与复检规那么相关的因素,CBC,15,DC,7,仪器,7,WBC,10,Ret,2,总数,41,18,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,外周血涂片阳性的标准:,形态学异常 1RBC形态学改变,但任何时候发现疟疾时,均可认为RBC有阳性形态学改变;2PLT形态学改变;3PLT很少/偶尔聚集;4Dohle小体的出现;5中毒颗粒的出现;6空泡的出现。,细胞形态异常 1原始细胞1个;2早/中幼阶段细胞1个;3晚幼阶段细胞2个;4不典型淋巴细胞5个;5NRBC1个;6浆细胞1个。,19,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,明确研究应包含的标本数量1,000份标本/研究单位:,研究所纳入的标本一定要与所检测的临床标本一样,以符合所有的CBC和DC的复检规那么。,为满足“首次观察规那么,80的试验标本应为首次检测标本,而20的标本因为复检标本以符合Delta规那么。,所有的试验标本应保存5天,以消除仪器的变异。,20,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,在检测患者标本时,应以一样的检测模式进展检测,并打印所有检测结果。,对所有检测的标本进展涂片镜检。为保证结果的一致性,涂片镜检时应指定12名高年资技师进展。如遇特殊情况,如CBC计数无结果,有异常细胞报警等,应进展人工分类。,21,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,将所有收集的试验数据进展列表分析。各标本按以下栏目输入:,标本ID号,患者ID号,符合规那么的编号,符合规那么的总数,仪器疑心性报警信号名称,仪器报警信号总数,涂片镜检的阳性结果,涂片镜检的阳性结果总数,22,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,汇总并比较各标本检测结果与涂片镜检的符合规那么数,为最终结果和汇总表提供数据。,在“材料和方法局部清楚定义真阳性、假阳性、真阴性和假阴性。,确认“假阴性率小于5。专家组认为5是保证患者检测结果平安性的最大可承受的假阴性率。,23,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,当假阴性率大于5时应采取如下措施:,检查记录表格和打印结果是否有抄写错误;,重新检查表格中结果的真实性;,复审引起假阴性的规那么与表中结果的符合性;,判断规那么的正确性;,按照上述方式重新设置和执行最新规那么;,如需要,重复15的步骤。,24,三、复检的内容和标准,国际血液学复检专家组确定复检规那么的方法和步骤,当假阳性率高于复检专家组认可时,应采取如下措施:,确认仪器是否有对实验室无用的特殊报警形式;,与仪器生产厂商的工程师一起鉴别“假阳性是否由仪器所致,或是否可以对仪器的灵敏度予以调整;,关注是否因实验室选择了仪器没有认可的疑心性报警信号,这种情况下一定要记录清楚,因为这已经超越了厂商所推荐的报警范围。,25,四、复检的程序,为了使实验室技术人员对自动CBC和DC复检有更深刻的理解和清晰的行为标准,在有了标准或规那么后,还应该有一个科学的复检程序。,Buttarello将自动CBC和DC的复检规那么制成程序如下,供大家参考:,26,四、复检的程序,自动,CBC,、,DC,及,Ret,分析,规定的,报警限,阴性,报告,阳性,Delta,检查,阴性,报告,阳性,分析仪质,控/状态,确实认,阴性,样本重测,涂片镜检,报告注释,人工分类,标本检查,自动,CBC,和,DC,的复检流程图,阳性,27,五、国际血液学复检专家组推荐的41条自动CBC和DC复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,1,新生儿,首次结果,涂片镜检,2,WBC,RBC,HGB,PLT,Retics,超出检测线性范围,稀释标本后再测,3,WBC,PLT,低于实验室确认的线性范围,按照实验室的,SOP,进行处理,4,WBC,RBC,HGB,PLT,无结果或结果不全,检查标本是否凝固,重检标本,如果还是得不到完整的结果,以替代方式计数,操作指南:规那么,28,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,5,WBC,30.0,和,首次结果,涂片镜检,6,WBC,30.0,和,差值检验败绩,和,三天之内,涂片镜检,7,PLT,1000,和,首次结果,涂片镜检,8,PLT,任何结果,和,差值检验败绩,涂片镜检,9,HGB,20g/L,超出相应年龄和性别的参考范围,和,首次结果,涂片镜检,如果有提示,确认样品的完整性,操作指南:规那么,29,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,10,MCV,105fl(,成人,),和,首次结果,和,24,小时之内的标本,涂片镜检,11,MCV,105fl,和,成人,和,24,小时之后的标本,涂片镜检 观察巨红细胞相关的变化,如果没有巨红细胞相关的变化,则要求重新检测新鲜标本,如果得不到新鲜标本,则报告结果并加以注释,12,MCV,任何结果,和,差值检验败绩,和,24,小时之内的标本,对标本进行确认和鉴定,操作指南:规那么,30,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,13,MCHC,20g/L,超过参考范围的上限,和,首次结果,和,24,小时内的标本,检查是否有脂血、溶血、红细胞凝集和球型红细胞,14,MCHC,22%,和,首次,涂片镜检,分类,(1622),16,无分类结果或分类不完全,人工分类和涂片镜检,17,Neut#,20.0,和,首次结果,涂片镜检,18,Lymph#,5.0(,成人,),或,7.0(1.5(,成人,),或,3.0(2.0,和,首次结果,涂片镜检,21,Baso#,0.5,和,首次结果,涂片镜检,22,NRBC#,任何结果,和,首次结果,涂片镜检,网织红细胞,(23),23,Retic Absolute#,0.100,和,首次结果,涂片镜检,可疑报警,(2441),24,图像可疑(不成熟细胞除外),报警,和,首次结果,和,成人,涂片镜检,25,图像可疑,报警,和,首次结果,和,儿童,涂片镜检,操作指南:规那么,33,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,26,WBC,图像不可靠,报警,所有,检查核对标本,重新做,,如果继续出现,应该检查仪器输出,如果需要,应该手工分类,27,RBC,图像异常,报警,所有,涂片镜检,28,双峰,RBC,图,报警,所有,首次结果,涂片镜检,29,难溶性,RBC,报警,所有,观察白细胞的散射图或者直方图。,以实验室,SOP,文件执行(考虑对计数进行校正),涂片镜检是否有异常,操作指南:规那么,34,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,30,PLT,团块报警,无论计数是多少,检查标本有无凝块,,涂片镜检估计,PLT,计数,如果继续聚集,执行实验室,SOP,31,血小板直方图异常,PLT&MPV,报警(,血小板聚集引起的除外),涂片镜检,32,未成熟粒细胞报警,报警,和,首次结果,涂片镜检,33,未成熟粒细胞报警,报警,和,以前已经证实的结果,和,WBC,差值检验败绩,涂片镜检,34,核左移,报警,执行实验室,SOP,操作指南:规那么,35,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,35,异型(变异)淋巴细胞,报警,和,首次,涂片镜检,36,异型(变异)淋巴细胞,报警,和,以前已经证实的结果,和,WBC,阳性差值检验败绩,涂片镜检,37,原始细胞,报警,和,首次结果,和,涂片镜检,38,原始细胞,报警,和,以前已经证实的结果,和,WBC,差值检验通过或呈阴性差值,和,3-7,天内检查,执行实验室,SOP,39,原始细胞,报警,和,以前已经证实的结果,和,WBC,阳性差值检验败绩,涂片镜检,操作指南:规那么,36,五、41条复检规那么,序号,相关参数,复检界定标准,1,和,/,或,复检界定标准,2,和,/,或,复检界定标准,3,和,/,或,复检界定标准,4,复检要求,1,复检要求,2,复检要求,3,40,NRBC,报警,涂片镜检,如果发现大量,NRBC,,应该对,WBC,进行校正,41,Retics,模式异常,检查仪器输出,如果是吸样问题应该重新检测观察,如果继续出现,应该涂片,操作指南:规那么,37,操作指南:差值Delta的定义,差值检验:是通过对照识别以前确认的异常结果来减少血液学检测的行为。,38,差值范围:本次实验结果比较前一次结果的差值超过了某一范围就必须用涂片或其他的方式来证实分析结果。那么这个范围就是这一特定实验的差值范围。,每个实验室应该考虑该特定工程的生理特性和实验室所用仪器的特性来建立适合本实验室的差值范围。,操作指南:差值Delta的定义,39,操作指南:差值Delta的定义,差值检验通过和检验败绩:,检验通过是本次检验的结果与上次的差值不大于本实验室该工程的差值范围。,检验败绩是本次检验的结果与上次的差值大于本实验室该工程的差值范围,40,操作指南:差值Delta的定义,阳性差值和阴性差值:,阳性差值是本次检测的结果比较上次结果的差值是呈正性方向的,而不考虑差值是否超出了差值范围。例如,比上次的结果要大一些等。,阴性差值是本次检测的结果比较上次结果的差值是呈负性方向的。例如,比上次的结果要小一些等。.,41,操作指南:差值Delta的定义,与差值检验相关的事宜:,国际协作组并没有建立一个统一的差值范围,而是认为应该每一实验室要建立自己的“差值范围。,但检测的差值超过了实验室设定的差值范围时,协作组为各种情形都提出了相关的建议。,42,六、科室复检标准的制定及评价,暂定规那么的制定,利用自动血细胞分析仪的报警系统,根据仪器报警提示对白细胞、红细胞、血小板的数量异常和形态异常进展判断,参照“国际41条规那么,与临床医师讨论,结合我科室工作量大的具体情况,暂定出自动CBC和DC复检规那么。,43,暂定的26条规那么,规则序号,相关参数,复检界定标准,1,全血细胞分析,新生儿第一次样本超过线性范围,2,WBC,RBC,Hb,PLT,Ret,超出线性范围,3,WBC,PLT,低于实验室验证的仪器线性范围或检测结果为,0,4,WBC,RBC,Hb,PLT,无结果,5,WBC,首次结果,30.0E9/L,6,PLT,首次结果,100E9/L,7,HGB,50g/L,8,MCV,24H,内标本的首次结果,105fl(,成人,),9,MCHC,参考范围,20 g/L,10,RDW,RDW,CV 20%,11,WBC,DC,无,DC,结果或,DC,结果不全,12,Neu#,首次结果,20.0E9/L,13,Lym#,首次结果,1.5E9/L(,成人,),或,7.0E9/L(1.5E9/L,(成人)或,3.0E9/L,(,2.0E9/L,16,Baso#,首次结果,0.5E9/L,17,Ret#,首次结果,0.10E9/L,18,WBC,结果不可靠报警,阳性报警,19,原始细胞报警,首次结果出现阳性报警。,20,原始细胞报警,WBC,的,Delta,值超上限,有以前确认的阳性报警结果,21,不典型和变异淋巴细胞,首次结果出现阳性报警,22,RBC,碎片,阳性报警,23,难溶性,RBC,阳性报警,24,双峰,RBC,阳性报警,25,PLT,聚集报警,任何计数结果,26,Ret,散点,/,直方图异常,45,六、科室复检标准的制定及评价,复检规那么的评估,应用手工镜检的结果对复检规那么进展统计学评估,以镜检结果为金标准,评估暂定标准对标本判断的真阳性、假阳性、真阴性和假阴性,并对以上各条进展统计学评价。,真阳性,触发规则且镜检结果为阳性,假阳性,触发规则但镜检结果为阴性,真阴性,不触发规则且镜检结果为阴性,假阴性,不触发规则但镜检结果为阳性,46,六、科室复检标准的制定及评价,1677例标本复检暂定规那么的阳性率,规则号,真阳性,假阳性,真阴性,假阴性,真阳性,率,(),假阳性率,(),真阴性率,(),假阴性率,(),5,118,0,1559,0,7.05,92.95,0,6,133,0,1544,0,7.91,92.09,0,7,272,0,1405,0,16.21,83.78,0,8,58,0,1619,0,3.43,96.58,0,9,1,0,1670,0,0.07,99.94,0,10,118,0,1559,0,7.01,92.97,0,11,8,0,1669,0,0.50,99.51,0,12,121,1,1555,0,7.19,0.07,92.74,0,13,40,0,1637,0,2.36,97.64,0,14,34,2,1641,0,2.00,0.14,97.85,0,47,六、科室复检标准的制定及评价,1677例标本复检暂定规那么的阳性率,规则号,真阳性,假阳性,真阴性,假阴性,真阳性,率,(),假阳性率,(),真阴性率,(),假阴性率,(),15,21,6,1650,0,1.25,0.36,98.39,0,16,5,3,1699,0,0.32,0.18,99.50,0,17,8,0,472,0,1.75,0,98.25,0,18,206,0,1471,0,12.27,0,87.73,0,19,14,7,1653,4,0.82,0.39,98.57,0.21,20,31,80,1554,11,1.82,4.79,92.70,0.68,21,7,121,1537,12,0.43,7.19,91.66,0.72,22,8,0,1669,0,0.50,0,99.51,0,23,1,0,1676,0,0.04,0,99.96,0,24,2,0,1675,0,0.14,0,99.87,0,25,100,94,1483,0,5.94,5.61,88.45,0,48,六、科室复检标准的制定及评价,通过以上分析,并与临床医师沟通,结合我科室实际情况,对暂定规那么进展了一些调整,放宽了局部规那么的标准。,放宽标准的目的是降低标本复检率,且各规那么的假阴性率均未发生变化,不会发生漏检。,调整后的复检率复检包括观察标本状态、镜检、光学法复查血小板等为29,镜检率为18。,49,全自动血细胞分析仪的复检标准,中南大学湘雅三医院检验科,根据中华医学会检验分会2006年8月12-13日在烟台举办的第三届中国国际血液学专家峰会的会议精神,以及国际血液学复检专家组和美国临床和实验室标协会(CLSI)最新提出的自动血细胞计数和白细胞分类计数的复检41条,结合我院具体情况及全自动血细胞分析仪的性能制定较为实际可行的外周血细胞分析的复检标准。,50,相关参数,复检条件,复检要求,全血细胞分析,新生儿第一次样本超过线性范围,涂片镜检,WBC,RBC,Hb,PLT,Ret,超出线性范围,稀释后重检,WBC,PLT,低于实验室验证的仪器线性范围或检测结果为,0,按,SOP,操作,WBC,RBC,Hb,PLT,无结果,1.,有凝块?,2.,重测;,3.,如果结果维持不变,用替代方法计数,WBC,首次结果,30.0E9/L,涂片镜检,PLT,首次结果,100E9/L,涂片镜检,HGB,50g/L,1.,涂片镜检;,2.,确认标本是否符合要求,MCV,24h,内标本的首次结果,105fl(,成人,),涂片镜检,MCHC,参考范围,20 g/L,寻找可能因静脉输液污染或其它标本原因,RDW,RDW,CV 20%,涂片镜检,WBC,DC,无,DC,结果或,DC,结果不全,涂片镜检和人工分类,51,相关参数,复检条件,复检要求,Neu,首次结果,20.0E9/L,涂片镜检,Lym,首次结果,1.5E9/L(,成人,),或,7.0E9/L(1.5E9/L,(成人)或,3.0E9/L,(,2.0E9/L,涂片镜检,Baso#,首次结果,0.5E9/L,涂片镜检,Ret#,首次结果,0.10E9/L,涂片镜检,WBC,结果不可靠报警,阳性报警,1.,确认标本是否合格并重测;,2.,如出现同样报警提示,检查仪器;,3.,如需要,进行人工分类,原始细胞报警,首次结果出现阳性报警,涂片镜检,原始细胞报警,WBC,的,Delta,值超上限,有以前确认的阳性报警结果,按,SOP,进行,52,相关参数,复检条件,复检要求,不典型和变异淋巴细胞,首次结果出现阳性报警,涂片镜检,RBC,碎片,阳性报警,涂片镜检,难溶性,RBC,阳性报警,1.,检查,WBC,直方图,/,散点图;,2.,根据,SOP,证实,Ret,是否正确;,3.,涂片镜检是否有异常形态红细胞,双峰,RBC,阳性报警,涂片镜检,PLT,聚集报警,任何计数结果,1.,标本有凝块?,2.,涂片镜检估计,PLT,;,3.,如,PLT,仍聚集,按,SOP,进行,Ret,散点,/,直方图异常,1.,检查仪器;,2.,如吸样有问题,重测;,3.,如结果维持不变,涂片镜检,与历史结果不符合的标本,无条件,1.,重测;,2.,如果结果维持不变,涂片镜检,血液科标本,无条件,涂片镜检,2007,年,7,月,53,七、国内最近的进展,?Sysmex XE-2100自动血细胞分析和白细胞分类的复检规那么探讨?,-XE-2100血细胞分析复检标准制定协作组,?国际血细胞复检规那么在Beckman-Coulter系列血细胞分析仪上的应用及改进方案?,-北京和睦家医院血细胞分析复检规那么制定组,?Siemens Advia2120血细胞分析仪复检规那么的制定及应用?,-北京协和医院血细胞分析复检规那么制定组,54,55,56,57,58,59,60,61,62,63,64,65,66,67,68,69,70,复检率,=,真阳性率,=,假阳性率,漏检率,=,假阴性率,符合率,=,血细胞分析仪检测结果与图片镜检结果的一致性。,71,Siemens Advia 2120血细胞分析仪复检规那么的假阴性和假阳性分析,血细胞分析仪的检测原理和报警信息不同,致使不同仪器对细胞形态和识别能力存在差异,如Siemens Advia 2120血细胞分析仪的异常红细胞报警提示明显多于Sysmex XE 2100和Beckman Coulter系列血细胞分析仪。所以,尽管采用一样的“41条规那么,Siemens Advia2120血细胞分析仪的复检率和漏检率与其它系列的仪器的结果也不尽一样。,由于Siemens Advia 2120的报警提示多于其他仪器,使得该分析仪的检测能力很强,错误报告率很低,但也会因此而增加复检率。,72,73,74,谢 谢!,75,谢谢,
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