生物选修1知识复习.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,1,酵母菌细胞呼吸,酵母菌进行,有氧呼吸,大量繁殖，表示式为：,C,6,H,12,O,6,+6O,2,6CO,2,+6H,2,O+,能量,酵母菌行,无氧呼吸,产生酒精和,CO,2,，为：,C,6,H,12,O,6,2C,2,H,5,OH+2CO,2,+,能量,2,酵母菌发酵,最正确环境,酵母菌在,有氧和无氧,条件下,都能生活,：在有氧时，酵母菌大量繁殖，不过不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，不过此时能够进行发酵。在利用酵母菌发酵时,最好是先通入足够无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵,。,20,左右最适合酵母,菌繁殖，酒精发酵最正确温度是在,18,25,，,pH,最好是弱酸性,。,3,醋酸菌,好氧性细菌,，当,缺乏糖源时和有氧条件,下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。表示式为：,2C,2,H,5,OH,4O,2,CH,3,COOH,6H,2,O,；,当,氧气、糖源都充分,时，醋酸菌将葡萄汁中糖分解成醋酸。,醋酸菌,生长最正确温度是在,30,35,课题,1,果酒和果醋制作,酶,酶,酶,一、试验原理,第1页,二、试验步骤,1.,对,发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁器皿等,试验用具,进行,清洗并消毒,。先用,温水重复冲洗几次,再用体积分数为,75%,酒精擦拭消毒,，晾干待用。,2.,取葡萄,500 g,，去除,枝梗和腐烂子粒,。,3.,用,清水冲洗葡萄,1,2,遍除去污物,，注意不要,重复屡次冲洗,。,4.,用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入发酵瓶中或将葡萄打成浆后，用洁净纱布过滤至发酵瓶中，盖好瓶盖。假如没有适当发酵装置，能够用,500 mL,塑料瓶替换，但,注入果汁量,不要超出塑料瓶总体积,2/3,。,5.,将发酵瓶置于,适宜温度,下发酵。,6.,因为发酵旺盛期,CO,2,产量非常大，所以需要,及时排气,，预防,发酵瓶爆裂,。假如使用简易发酵装置，如瓶子（最好选取塑料瓶），天天要拧松瓶盖,2,4,次，进行排气。,7.10 d,以后，能够开始进行取样检验工作。比如，能够检验酒味、酒精含量、进行酵母菌镜检等工作。,8.,当果酒制成以后，能够在发酵液中加入,醋酸菌或醋曲,，然后将装置转移至,30,35,条件下发酵，,适时,向发酵液中,充气,。假如找不到醋酸菌菌种或醋曲，可尝试自然接种，但效果不是很好。假如没有充气装置，能够将瓶盖打开，在瓶口盖上纱布，以降低空气中尘土等污染。,第2页,请分析此装置中充气口、排气口和出料口分别有哪些作用。为何排气口要经过一个长而弯曲胶管与瓶身连接？结合果酒、果醋制作原理，你认为应该怎样使用这个发酵装置？,答：,充气口,是,在醋酸发酵时连接充气泵,进行充气用；,排气口,是在酒精发酵时用来排出,CO,2,；,出料口,是用来取样。,排气口要经过一个长而弯曲胶管与瓶身连接，其目标是,预防空气中微生物污染,。,使用该装置制酒,时，,应,该,关闭充气口,；,制醋,时，应,将充气口连接气泵，输入氧气,。,第3页,必背相关概念和内容,1,、发酵：经过微生物培养技术,使微生物,生产大量代谢产物,过程。,2,、有氧发酵：,醋酸发酵,谷氨酸发酵,无氧发酵：,酒精发酵,乳酸发酵,3,、酵母菌是,兼性厌氧菌型,微生物,真菌,酵母菌生殖方式：,出芽生殖,(,主要,),分裂生殖,孢子生殖,4,、,有氧,条件下，酵母菌进行,有氧呼吸,，大量繁殖,C,6,H,12,O,6,+6O,2,6CO,2,+6H,2,O+,能量,5,、在,无氧,条件下，酵母菌能进行,酒精发,酵,C,6,H,12,O,6,2C,2,H,5,OH+2CO,2,+,能量,6,、,20,左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时普通将温度控制在,18,-25,7,、在,葡萄酒自然发酵,过程中,起主要作用是,附着在葡萄皮表面野生型酵母菌,。,在发酵过程中,伴随酒精浓度提升,红葡萄,皮色素,也进入发酵液,使葡萄酒展现,深红色,。,在,缺氧呈酸性发酵液,中，,酵母菌能够生长繁殖,，而绝大多数其它微生物都因无法适应这一环境而受到制约。,8,、醋酸菌是,单细胞细菌,(,原核生物,),代谢类型是,异养需氧型,生殖方式为,二分,裂,9,、当氧气、糖源都充分时，醋酸菌将葡萄汁中糖分解成醋酸；当缺乏糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。,2C,2,H,5,OH,4O,2,CH,3,COOH,6H,2,O,第4页,10,、控制发酵条件作用,醋酸菌,对氧气含量尤其敏感,，当进行深层发酵时，即使只是短时间中止通入氧气，也会引发醋酸菌死亡。,醋酸菌最适生长温度为,30,35,，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又降低杂菌污染机会。,有两条路径生成醋酸：,直接氧化,和,以酒精为底物氧化,。,11,、试验流程：,挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒（醋酸发酵果醋）,12,、酒精检验：,果汁发酵后是否有酒精产生，能够用,重铬酸钾,来检验。在,酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应展现灰绿色,。,先在试管中加入发酵液,2,L,，再滴入物质量浓度为,3mol/L,H,2,SO,4,3,滴，振荡混匀，最终滴加常温下饱和重铬酸钾溶液,3,滴，振荡试管，观察颜色,第5页,疑难解答,（,1,）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为何？,应该先冲洗，然后再除去枝梗，以防止去去枝梗时引发葡萄破损，增加被杂菌污染机会。,（,2,）你认为应该从哪些方面预防发酵液被污染？,如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗洁净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。,（,3,）制葡萄酒时，为何要将温度控制在,18,25,？制葡萄醋时，为何要将温度控制在,30,35,？,温度是酵母菌生长和发酵主要条件。,20,左右最适合酵母菌繁殖。所以需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为,30,35,，所以要将温度控制在,30,35,。,菌种项目,酵母菌,醋酸菌,毛霉,乳酸菌,生物学分类,真核生物,原核生物,真核生物,原核生物,代谢类型,异养兼性厌氧,异养需氧,异养需氧,异养厌氧,繁殖方式,适宜条件下出芽生殖,二分裂生殖,孢子生殖,二分裂生殖,生产应用,酿酒,酿醋,制作腐乳,制作泡菜,发酵条件,前期需氧，后期不需氧,一直需氧,一直需氧,不需氧,几个惯用发酵菌种比较,第6页,制作内容,比较项目,果酒,果醋,腐乳,泡菜,所用菌种,酵母菌,醋酸菌,主要是为霉,乳酸菌,控制条件,O2有没有,无氧,有氧,有氧,无氧,最适温度,18,25,30,35,15,18,常温,时间控制,1012天,78天,腌制,8天左右,腌制,10天左右,其它条件,封闭充气口,适时充气,控制盐酒用量,控制盐水百分比,相关反应式,果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件比较,第7页,二、相关试题,1,（,北京理综，,1,）在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，正确操作是（）,A,让发酵装置接收光照,B,给发酵装置适时排气,C,向发酵装置通入空气,D,将发酵装置放在,45,处,2,以下关于腐乳制作过程说法，正确是（）,A,制作腐乳时只有毛霉发挥作用,B,豆腐表面长出青色物质则标志着腐乳制作完成,C,在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶微生物参加,D,制作腐乳时加盐是为了促进毛霉生长,3,以下关于病毒、醋酸菌、毛霉叙述，不正确是（）,A,病毒与后二者比较，没有细胞结构，遗传物质可能是,DNA,或是,RNA,B,醋酸菌是好氧菌，能够将葡萄糖分解成醋酸，其细胞结构中没有核膜和核仁,C,在腐乳制作过程中，毛霉能产生蛋白酶，分解豆腐中蛋白质为肽和氨基酸,D,三者在培养过程中，只要培养基中有水、碳源、氮源和无机盐，都能正常生长繁殖,4,（,江苏生物，,7,）下列图表示果酒和果醋制作过程中物质改变过程，以下叙述正确是（）,A,过程和都只能发生在缺氧条件下,B,过程和都发生在酵母细胞线粒体中,C,过程和都需要氧气参加,D,过程所需最适温度基本相同,B,C,D,C,第8页,1.,以下相关微生物培养或纯化叙述，错误是（）,A,微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种,B,培养液中溶氧量改变会影响酵母菌繁殖和代谢路径,C,分离自养型微生物方法是用纤维素作为唯一碳源培养基,D,分离纯化微生物惯用方法是平板划线法和稀释涂布平板法,C,2.,以下关于微生物叙述，错误是,(),A,硝化细菌即使不能进行光合作用，但属于自养生物,B,蓝藻即使无叶绿体，但在生态系统中属于生产者,C,酵母菌呼吸作用终产物可经过自由扩散运出细胞,D,大肠杆菌遗传信息在细胞核中转录，在细胞质中翻译,D,3.,在“果醋制作过程”中，取得较多醋酸杆菌菌种最简便方法是（）,A,从变酸葡萄酒表面取得菌膜，再培养、分离,B,无须人为加入菌种在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸杆菌,C,从泡菜坛盖边缘水槽中表面取得菌膜，再培养、分离,D,从土壤中分离提取,A,4.,对制葡萄酒和葡萄醋发酵条件控制中，错误是（）,A,葡萄汁装入发酵瓶时，要留有,1/3,空间,B,用清水冲洗葡萄除去污物，应重复屡次冲洗,C,制葡萄酒过程中，除在适宜条件下，时间应控制在,10,12d,D,制葡萄醋温度要比葡萄酒温度高些，但时间普通控制在,7,8d,左右,B,第9页,5,（,广州一模，,6,）以下关于生物技术说法不正确是（）,A,需借助胚胎移植技术才能取得克隆牛,B,单倍体育种过程包括脱分化和再分化,C,用本身干细胞培育器官，移植后普通不会产生免疫排斥反应,D,果酒与果醋制作过程需要保持缺氧状态,6,（,广东理综，,25,）小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌发酵装置中进行试验（见图），恰当做法是,（双选）,（）,A,加入适量酵母菌,B,一直打开阀,b,通气,C,一直关紧阀,a,，偶然打开阀,b,几秒钟,D,把发酵装置放到,4,冰箱中进行试验,7,下面是相关食醋和泡菜制作试验。请回答：,（,1,）食醋可用大米为原料经三步发酵来制作：,第一步：大米经蒸熟、冷却后加入淀粉酶，将原料中淀粉分解成,（填中间产物），然后深入分解成葡萄糖，这一过程可用,（填淀粉指示剂）来检测，因为该试剂遇淀粉呈蓝色，遇上述中间产物呈红色。,第二步：用,菌将葡萄糖转化成乙醇，这一发酵过程中，玻璃发酵瓶不应完全密闭主要原因是,。,第三步：用,菌将乙醇转化成乙酸，这一过程,氧气。,D,AC,糊精,碘液,酵母,发酵过程中会产生大量,CO,2,，使瓶内压力升高而可能引发爆裂,醋酸杆,需要消耗,第10页,（,1,）排气口胶管设计成长而弯曲目标是,。,（,2,）试验最初阶段，因为,、,、,，酵母菌种群数量呈“,J”,型增加。,（,3,）在上图所表示计数室中，假如一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应该采取办法是,。,（,4,）本试验没有另设置对照试验，原因是,。为提升试验准确性，试验时应进行,。,（,5,）请你设计表格统计试验数据。,8,（,广东肇庆一模，,29,）某生物兴趣小组为了“探究培养液中酵母菌种群数量改变”，按以下左图装置进行了试验，并使用如右图所表示血球计数板对培养液中酵母菌进行计数。请分析回答：,预防空气中杂菌污染,温度等条件适宜,营养物质充分,没有敌害和竞争,使酵母菌分布均匀，增加稀释倍数。,该试验时间上形成前后本身对照,重复试验（取样）,时间次数,1,2,3,4,5,6,7,1,2,3,第11页,（,1,）酵母菌与醋酸杆菌在结构上最大区分是后者,。从制酒和制醋两阶段对装置处理方式判断，酵母菌和醋酸杆菌异化作用类型依次是,。,（,2,）同学甲在制酒阶段，每隔,12h,左右就要将瓶盖拧松一次，但又不打开，这么做目标是,。用反应式表示出制酒过程刚开始时发生主要化学改变,。,（,3,）,B,装置中排气口要经过一个长而弯曲胶管与瓶身相连，这么做原因,。,（,4,）制葡萄酒时要将温度控制在,18,25,，而制葡萄醋时要将温度控制在,30,35,，原因是,。葡萄汁为酵母菌、醋酸杆菌等微生物生长提供营养成份是,。,（,5,）制作过程中普通不需要额外添加酵母菌和醋酸杆菌即可完成。为了提升果酒品质也可在果汁中加入人工培养酵母菌。利用,培养基可分离取得较为纯净酵母菌菌种，如在培养基中加入,能够从细菌和酵母菌混合液中分离出酵母菌。,（,6,）为提升水果出汁率，使果汁变得澄清，在果汁生产中惯用,。,9,低度果酒、果醋含有一定保健养生功效。下列图是两位同学制果酒和果醋时使用装置。同学甲用,A,（带盖瓶子）装置制葡萄糖，在瓶中加入适量葡萄汁，发酵温度控制在,18,25,，每隔,12h,左右将瓶盖拧松一次（注意不是打开瓶盖），之后再将瓶盖拧紧。当发酵产生酒精后，再将瓶盖打开，盖上一层纱布，温度控制在,30,35,，进行制果醋发酵。同学乙用,B,装置，温度控制与甲相同，不一样是制果酒阶段充气口用夹子夹紧外，排气橡胶管也用夹子夹住，而且每隔,12h,左右松一松夹子放出多出气体。制果醋阶段适时向充气口充气。经过,20,天左右，两位同学先后完成了自己发酵制作。据此回答相关问题：,没有由核膜包围细胞核,兼性厌氧型、需氧型,制酒阶段后期，酵母菌无氧呼吸会产生大量气体，如不及时放出会把瓶子或瓶盖胀破，不打开瓶盖是,预防,氧气和有害杂菌进入,C,6,H,12,O,6,6H,2,O,6O,2,酶,6CO,2,12H,2,O,能量,预防污染,18,25,是酵母菌生长和发酵适当温度，,30,35,是醋酸杆菌生长和发酵适当温度。,碳源、氮源、水、无机盐和生长因子,选择,青霉素（抗生素）,果胶酶,第12页,专题二 微生物培养与应用,课题一 微生物试验室培养,培养基,：人们按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质，是进行微生物培养物质基础。,培养基按照,物理性质,可分为,液体培养基,、,半固体培养基和固体培养基,。在液体培养基中加入凝固剂,琼脂,（是从红藻中提取一个多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，能够形成肉眼可见菌落。依据菌落特征能够判断是哪一个菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物分离和判定，半固体培养基则惯用于观察微生物运动及菌种保藏等。,按照,成份,培养基可分为,人工合成培养基和天然培养基,。合成培养基是用成份已知化学物质配制而成，其中成份种类百分比明确，惯用于微生物分离判定。天然培养基是用化学成份不明天然物质配制而成，惯用于实际工业生产。,按照培养基,用途,，可将培养基分为,选择培养基和判定培养基,。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长。判别培养基是依据微生物特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以判别不一样类别微生物。,第13页,培养基化学成份,包含,水,、,无机盐,、,碳源,、,氮源,、,特殊营养物质如,生长因子等。,碳源：能为微生物代谢提供碳元素物质。如,CO,2,、,NaHCO,3,等,无机碳源,；糖类、石油、花生粉饼等,有机碳源,。,异养微生物只能利用有机碳源,。,单质碳不能作为碳源,。,氮源：能为微生物代谢提供氮元素物质。如,N,2,、,NH,3,、,NO,3,-,、,NH,4,+,（,无机氮源,）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（,有机氮源,）等。,只有固氮微生物才能利用,N,2,。,培养基还要满足,微生物生长对,pH,、特殊营养物质以及氧气要求,。,比如，,培养,乳酸杆菌,时需要在培养基中添加,维生素,，,培养,霉菌,时须将培养基,pH,调至酸性,，,培养,细菌,是需要将,pH,调至中性或微碱性,，,培养,厌氧型微生物,是则需要提供,无氧,条件,第14页,培养基分类和应用,归纳：,划分标准,培养基种类,特 点,用,途,物理性质,液体培养基,不加凝固剂,工业生产,半固体培养基,加凝固剂，如琼脂,观察微生物运动、分类、判定,固体培养基,加凝固剂，如琼脂,微生物分离、判定、活菌计数,化学组成,天然培养基,含化学成份不明确天然物质,工业生产,合成培养基,培养基成份明确（用化学成份已知化学物质配成）,分类、判定,目标用途,选择培养基,培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需要微生物生长,培养、分离出特定微生物,判别培养基,依据微生物代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品,判别不一样种类微生物,第15页,无菌技术,取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵，要注意以下几个方面：,对试验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒。,将用于微生物培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。,为防止周围环境中微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰附近进行。,试验操作时应防止已经灭菌处理材料用具与周围物品相接触。,无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？,答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。,消毒与灭菌区分,消毒,指使用较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物（不包含芽孢和孢子）。消毒方法惯用,煮沸消毒法,，巴氏消毒法（对于一些不耐高温液体）还有,化学药剂,（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。,灭菌则是指使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子。灭菌方法有,灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,。,第16页,灭菌方法：,接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；,玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；,培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。,表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。,比较项目,消毒,灭菌,条件,使用较为温和理化方法,使用强烈理化原因,结果,杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物（不包含芽孢和孢子）,杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子,适用,试验操作空间、操作者衣服和手,微生物培养器皿、接种用具和培养基等,惯用方法,煮沸消毒法（如在,100,，煮沸,56 min）、巴氏消毒法（如在80,，煮,15 min）；使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒,灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌,消毒与灭菌区分,灭菌方法,灭菌条件,灭菌时间,适用材料或用具,灼烧灭菌,酒精灯火焰充分燃烧层,直至烧红,接种环、接种针或其它金属工具,干热灭菌,干热灭菌箱内，,160170,12 h,玻璃器皿（吸管、培养皿）,和金属用具等,高压蒸汽灭菌,100kPa，121,1530 min,培养基等,三种惯用灭菌方法比较,第17页,制作牛肉膏蛋白胨固体培养基,（,1,）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。,（,2,）倒平板操作步骤：,将灭过菌培养皿放在火焰旁桌面上，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拔出棉塞。,右手拿锥形瓶，将瓶口快速经过火焰。,用左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口缝隙，右手将锥形瓶中培养基（约,10,20mL,）倒入培养皿，左手马上盖上培养皿皿盖。,等候平板冷却凝固，大约需,5,10min,。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。,第18页,倒平板操作讨论,：,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,提醒：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。,2.,为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。,3.,平板冷凝后，为何要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。,4.,在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。,第19页,纯化大肠杆菌,（,1,）微生物接种方法最惯用是,平板划线法,和,稀释涂布平板法,。,（,2,）平板划线法是经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作。将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体，这就是菌落。,（,3,）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不一样稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。,（,4,）用平板划线法和稀释涂布平板法接种目标是：使聚集在一起微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，方便于纯化菌种。,（,5,）平板划线法操作步骤：,将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。,将试管口经过火焰。将已冷却接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。,将试管经过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第,一区域划线末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最,后一区划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。,第20页,平板划线操作讨论,1.,为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？,答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。,2.,在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.,在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,第21页,（,6,）涂布平板操作步骤：,将涂布器浸在盛有酒精烧杯中。取少许菌液，滴加到培养基表面。,将沾有少许酒精涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却,8,10s,。,用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。,涂布平板操作讨论,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第,2,步应怎样进行无菌操作？,提醒：应从操作各个细节确保,“,无菌,”,。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。,第22页,菌种保留,（,1,）对于频繁使用菌种，能够采取,暂时保藏,方法。,暂时保藏方法,将菌种接种到试管固体斜面培养基上，在适当温度下培养。当菌落长成后，将试管放入,4,冰箱中保藏。以后每,3,6,个月，都要重新将菌种从旧培养基上转移到新鲜培养基上。,缺点,：这种方法保留时间不长，菌种轻易被污染或产生变异。,（,2,）对于需要长久保留菌种，能够采取,甘油管藏,方法。,在,3mL,甘油瓶中，装入,1mL,甘油后灭菌。将,1mL,培养菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在,20,冷冻箱中保留。,疑难解答,（,1,）生物营养,营养是指生物摄取、利用营养物质过程。营养物质是指维持机体生命活动，确保发育、生殖所需外源物质。,人及动物营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。,植物营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。,微生物营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。,（,2,）确定培养基制作是否合格方法,将未接种培养基在恒温箱中保温,1,2,天，无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。,第23页,课题二 土壤中分解尿素细菌分离与计数,尿素,是一个主要农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶,尿素最初是从人尿液中发觉,筛选菌株,（,1,）试验室中微生物筛选应用原理,人为提供有利于目标菌株生长条件（包含营养、温度、,pH,等），同时抑制或阻止其它微生物生长。,（,2,）选择性培养基,在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基，称作,选择培养基,。,（,3,）配制选择培养基依据,依据选择培养菌种生理代谢特点加入某种物质以到达选择目标。比如，培养基中不加入有机物能够选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，能够选择培养能固氮微生物；加入高浓度食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。,第24页,统计菌落数目,（,1,）测定微生物数量惯用方法有,稀释涂布平板法,和,显微镜直接计数,。,（,2,）稀释涂布平板法统计样品中活菌数目标原理,当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌。经过统计平板上菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了确保结果准确，普通设置,3,5,个平板，选择菌落数在,30,300,平板进行计数，并,取平均值,。统计菌落数往往比活菌实际数目低，所以，统计结果普通用菌落数而不是活菌数来表示。,采取此方法注意事项：,1.,普通选取菌落数在,30300,之间平板进行计数,2.,为了预防菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入,TTC 3.,本法仅限于形成菌落微生物,。,设置对照,设置对照主要目标是排除试验组中非测试原因对试验结果影响，提升试验结果可信度。对照试验是指除了被测试条件以外，其它条件都相同试验，其作用是比照试验组，排除任何其它可能原因干扰，证实确实是所测试条件引发对应结果。,第25页,试验设计,试验设计包含试验方案，所需仪器、材料、用具和药品，详细实施步骤以及时间安排等综合考虑和安排。,（,1,）土壤取样：同其它生物环境相比，土壤中微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质土壤表层，有更多微生物生长。从富含有机物、潮湿、,pH,7,土壤中取样。铲去表层土，在距地表约,3,8cm,土壤层取样。,（,2,）样品稀释：样品稀释程度将直接影响平板上生长菌落数目。在实际操作中，通常选取一定稀释范围样品液进行培养，以确保取得菌落数在,30300,之间、适于计数平板。,测定土壤中细菌数量，普通选取,10,4,10,5,10,6,测定放线菌数量，普通选取,10,3,10,4,10,5,测定真菌数量，普通选取,10,2,10,3,10,4,（,3,）微生物培养与观察,不一样种类微生物，往往需要不一样培养温度和培养时间。细菌,3037,12,天,放线菌,2528,57,天 霉菌,2528,34,天,每隔,24,小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时统计作为结果，这么能够预防因培养时间不足而造成一楼菌落数目。普通来说，在一定培养条件下（相同培养基、唯独及培养时间），同种微生物表现出稳定菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色,第26页,疑难解答,（,1,）怎样从平板上菌落数推测出每克样品中菌落数？,统计某一稀释度下平板上菌落数，最好能统计,3,个平板，计算出平板菌落数平均值,每克样品中菌落数,=,（,C/V,）,*M,其中，,C,代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数，,V,代表涂布平板时所用稀释液体积（,ml,），,M,代表稀释倍数,第27页,二、相关试题,1,（,安徽理综，,6,）以下是关于“检测土壤中细菌总数”试验操作叙述，其中错误是,（）,A,用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板,B,取,10,4,、,10,5,、,10,6,倍土壤稀释液和无菌水各,0.1mL,，分别涂布于各组平板上,C,将试验组和对照组平板倒置，,37,恒温培养,24,48,小时,D,确定对照组无菌后，选择菌落数在,300,以上试验组平板进行计数,2,以下对四种微生物相关叙述，错误是（）,A,CO,2,和,NH,3,分别是硝化细菌碳源和氮源，该生物所需能源来自,NH,3,氧化,B,CO,2,和硝酸盐分别是褐藻碳源和氮源，该生物所需能源来自太阳能,C,糖类和,N,2,是乳酸菌碳源和氮源，该生物所需能源来自乳酸氧化分解,D,葡萄糖既是酵母菌碳源也是其能源，但,CO,2,一定不是酵母菌碳源,3,酵母菌培养最好使用以下哪种培养基（）,A,牛肉膏蛋白胨培养基,B,麦芽汁琼脂培养基,C,蛋白胨酵母膏培养基,D,MS,培养基,D,C,B,第28页,4,以下关于微生物培养和利用叙述，错误是（）,A,经过消毒不能杀死物体内全部微生物,B,利用平板划线法能够统计样品中活菌数目,C,平板划线法和稀释涂布法惯用于微生物接种,D,微生物所用培养基成份和植物组织培养用培养基成份不一样,5,以下相关微生物培养或纯化叙述，错误是（）,A,微生物在培养前要先对培养基进行灭菌处理再接种,B,培养液中溶氧量改变会影响酵母菌繁殖和代谢路径,C,分离纯化微生物惯用方法是平板划线法和稀释涂布平板法,D,分离自养型微生物方法是用纤维素作为唯一碳源培养基,6,在做分离“分解尿素细菌”试验时，,A,同学从对应,10,-6,培养基中筛选出大约,150,个菌落，而其它同学只选择出大约,50,个菌落。以下相关叙述正确是,（双选）,（）,A,A,同学出现这种结果原因是土样不一样,B,能够将,A,同学配制培养基在不加土样情况下进行培养作为空白对照，以证实培养基是否受到污染,C,让其它同学用与,A,同学一样土壤进行试验，假如结果与,A,同学一样，则可证实,A,同学无误,D,B,、,C,选项试验思绪都遵照了试验对照标准,B,D,BC,第29页,7,（,宁夏理综，,40,）（,1,）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑,、,和渗透压等条件。因为该细菌含有体积小、结构简单、变异类型轻易选择、,、,等优点，所以常作为遗传学研究试验材料。,（,2,）在微生物培养操作过程中，为预防杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌处理，其中对培养皿进行灭菌惯用方法是,；操作者双手需要进行清洗和,；静止空气中细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能,。,（,3,）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌个数，要想使所得预计值更靠近实际值，除应严格操作、屡次重复外，还应确保待测样品稀释,。,（,4,）通常，对取得纯菌种还能够依据菌落形状、大小等菌落特征对细菌进行初步,。,（,5,）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采取检测方法是,。,（,6,）若用大肠杆菌进行试验，使用过培养基及其培养物必须经过,处理后才能丢弃，以预防培养物扩散。,温度,pH,易培养,生活周期短,干热灭菌法,消毒,损伤,DNA,结构,百分比适当,判定（或分类）,将未接种培养基在适宜温度下放置适宜时间，观察培养基上是否有菌落产生,灭菌,第30页,8,（,山东理综，,34,）生物柴油是一个可再生清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料消耗。科学家发觉，在微生物,M,产生脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（以下列图）。,（,1,）筛选产脂肪酶微生物,M,时，选择培养基中添加植物油为微生物生长提供,，培养基灭菌采取最适方法是,法。,（,2,）测定培养液中微生物数量，可选取,法直接计数；从微生物,M,分离提取脂肪酶通常需要检测,，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用,技术使脂肪酶能够重复使用。,（,3,）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热,DNA,聚合酶催化,技术。,碳源,高压蒸汽灭菌,显微镜直接计数,酶活性（或：酶活力）,固定化酶（或：固定化细胞）,PCR,第31页,9,从自然菌样筛选较理想生产菌种普通步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。,（,1,）不一样微生物生存环境不一样，取得理想微生物第一步是从适合环境采集菌样，然后再按一定方法分离、纯化。培养嗜盐菌菌样应从,环境采集。,（,2,）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长特定环境条件，使其在群落中数量大大增加，从而分离出所需微生物培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物富集培养应选择,培养基，并在,条件下培养。,（,3,）下面两图是采取纯化微生物培养两种接种方法接种后培养效果图解，请分析接种详细方法。,取得图,A,效果接种方法是,，取得图,B,效果接种方法是,。,（,4,）配制培养基时各种成份在溶化后分装前必须进行,，接种前要进行,，在整个微生物分离和培养中，一定要注意在,条件下进行。,海滩等高盐,以淀粉为唯一碳源,高温,稀释涂布平板法,平板划线法,pH,调整,高压蒸汽灭菌,无菌,第32页,10,（,广东汕头一模，,26,）有机磷农药杀虫能力强，在粮食增产、传染病防治等方面作用显著，但污染环境并危害人体健康。在众多有机磷农药残留物降解技术中，生物降解有高效、彻底、无二次污染优势，其中，微生物因为含有较复杂多样代谢路径，是有机磷农药降解主力军。,（,1,）在富含有机磷农药残留成份土壤中，更轻易分离到能降解农药微生物。依据达尔文理论，这是因为有机磷农药对于这类微生物含有,作用。,（,2,）微生物含有复杂多样代谢路径，从根本上说，是由微生物,所决定。,（,3,）微生物主要经过酶促反应，将有机磷农药分解为无毒或者低毒化合物。研究发觉，利用有机磷农药降解酶净化农药比利用微生物菌体更有效。,微生物群体中，最初降解酶基因是因为,而产生。从微生物中提取到一个降解酶后，需要确定在何种环境中该酶活性高，检测酶活性高低指标能够是,。,从天然菌株中提取降解酶含量低，成本高，难以大量应用，科学家经过基因工程处理了这一难题。他们在取得降解酶基因后，经过,技术对该基因进行大量扩增，再利用,酶、,酶和运载体等作为基本工具，经过一定伎俩构建,，并将其导入大肠杆菌体内，从而实现了高效表示。,天然降解酶对有机磷农药降解率比较低，不能到达预期效果，科学家对降解酶特定部位氨基酸序列进行重新设计、改造，显著提升了其降解能力，这项技术称为,。,选择（或者保留）,基因多样性（或者遗传多样性）,基因突变,单位时间中反应物降低许（或者单位时间中产物增加量、有机磷农药降解速率）,PCR,限制酶）,DNA,连接酶,目标基因表示载体,蛋白质工程,第33页,1.,从几千年前到现在，酶制剂就安全地在被使用在工业、美容和口腔护理产品、纺织品、食品（如酸奶酪）以及芝士、啤酒和白酒等发酵生产过程中。以下各项中，不属于酶制剂是（,）,A,蛋白酶,B,脂肪酶,C,淀粉酶,D,麦芽糖酶,4,下表是某种生物活性洗衣粉成份及使用方法说明，以下对资料表明信息了解不正确是（,）,A,这种洗衣粉较易去除衣服上蛋清污渍,B,该蛋白酶在,60,以上将会失去活性,C,这种洗衣粉可除去衣料上各种污渍,D,这种洗衣粉不能用于洗涤真丝织物,D,C,第34页,将果胶酶与苹果泥分装于不一样试管，在,10,水浴中恒温处理,l0min(,如图,A),。,将步骤处理后果胶酶和苹果泥混合，再次在,10,水浴中恒温处理,l0min(,如图,B),将步骤处理后混合物过滤，搜集滤液，测量汁量,(,如图,C),。,在不一样温度条件下重复以上试验步骤，并统计果汁量以下：,依据上述试验，请分析回答以下问题：,(1),果胶酶能破除细胞壁，是因为果胶酶能够促进细胞壁中,水解。,(2),试验结果表明，当温度为,时果汁量最多，此时果胶酶活性,。当温度再升高时，果汁量降低，说明,。,(3),试验步骤目标是,。,温度,/,10,20,30,40,50,60,70,80,果汁量,/ml,8,13,15,25,15,12,ll,10,工业生产果汁时，经常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提升出果汁率。为研究温度对果胶酶活性影响，某学生设计了以下试验：,果胶,40,最高,酶活性降低,防止果汁和果胶酶混合时影响混合物温度，从而影响果胶酶活性,第35页,10,某化工厂最新产生了一个高效加酶洗衣粉，准备投放市场，其包装印有以下部分说明。成份：含最新高效碱性蛋白酶。,特点：洗涤奶渍、血渍等效率是普通洗衣粉数倍。,使用方法：洗涤前先将衣物浸于含有该洗衣粉水内数小时，使用温水效果更佳。,注意：切勿用于丝质及羊毛衣料。用后彻底清洗双手。,该地域质检部门为证实该洗衣粉是否有功效，从化工厂提取部分洗衣粉样品做了以下试验：,以下说法中，不正确是（,