中药制剂分析第五章各类成分分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章 中药制剂中各类化学成分分析,药物分析学科,掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。,熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。,了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。,【,目的要求,】,药物分析学科,第五章 中药制剂中各类化学成分分析,学习方法,结构 性质 分析方法,结构：母核、官能团、分子量等,物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、,旋光性、光谱特性等,分析方法：,总类成分：化学分析法、分光光度法,单一成分：各种色谱法（,GC,、,HPLC,、,HPCE,、,TLCS,、,SFC,等）,药物分析学科,一、概述,1,、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如,氨基酸、蛋白质和,B,族维生素等）之外的所有含氮有机化合,物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有,碱性,。,2,、含生物碱成分的常用中药：,第一节 生物碱类成分分析,中药名称,主要生物碱成分,中药名称,主要生物碱成分,山豆根,制川乌,马钱子,延胡索,苦参碱、氧化苦参碱、,槐果碱、金雀花碱,乌头碱,、,次乌头碱、,新乌头碱,马钱子碱、番木鳖碱,（士的宁）、,伪马钱子,碱、伪番木鳖碱,延胡索乙素、延胡索甲,素、,原阿片碱、黄连碱,苦 参,麻 黄,黄 连,黄 柏,防 己,苦参碱、,槐定碱、槐果碱、,氧化苦参碱,麻黄碱、伪麻黄碱、,去甲麻,黄碱、甲基麻黄碱,小檗碱、,巴马丁、药根碱、,黄连碱,小檗碱、药根碱、,木兰花碱,粉防己碱、,防己诺林碱、轮,环藤酚碱、木兰碱,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质,1,、,溶解性,大多数生物碱难溶于水，易溶于,氯仿,、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂；,与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；,季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水,液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；,含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质,2,、沉淀反应,大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。,生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸,马钱子散中生物碱成分的鉴别,取马钱子散,1g,，加浓氨试液数滴及氯仿,10ml,，浸泡数小时，,滤过，取滤液,1ml,蒸干，残渣加稀盐酸,1ml,使溶解，加碘化铋,钾试液,12,滴，即生成黄棕色沉淀。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质,3,、显色反应,生物碱在一定,pH,条件下可与一些,酸性染料,（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被,氯仿,等有机溶剂定量提出,结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与,异羟肟酸铁试剂,反应产生,紫红色,；,这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,二、理化性质,4,、紫外光谱特性,结构中具有,共轭体系,的生物碱均有紫外吸收,结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的,pH,有关,。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别,1,、一般理化鉴别,沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在,酸性水溶液,中进行,制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别,2,、薄层色谱法,吸附剂：,硅胶,、氧化铝；,展开剂：多以,氯仿,、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展,开剂的极性；,由于,硅胶显弱酸性，,强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成,盐，,使,Rf,值很小或拖尾、形成复斑等,。,显色剂：,常用改良碘化铋钾试剂,，有时喷,碘化铋钾,试剂之后,再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。,如有荧光，不用显色,亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。,讨论：如何改进？,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,三、定性鉴别,3,、纸色谱法,可用于生物碱盐或游离碱的鉴别,4,、,HPLC,：,保留时间定性,5,、,GC,：,可用于小分子生物碱的鉴别,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（一）总生物碱的含量测定,1,、化学分析法,主要使用,酸碱滴定法,。,强碱滴定生物碱盐时，在,70%90%,的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱盐溶于,90%,乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。,若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行,要求：总生物碱的,纯度较高,，用于药味少成分简单制剂的测定,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（一）总生物碱的含量测定,2,、分光光度法,（,1,）直接测定法,不经过化学反应、利用生物碱物质,自身的光吸收,直接进行比色测定的方法。,一般用于,药味较少,、,干扰小,的中药制剂中总生物碱的含量测定。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（一）总生物碱的含量测定,（,2,）酸性染料比色法（例题,P,1,2,4,）,原理：,BH,+,+In,-,BH,+,In,-,（水相）,BH,+,In,-,（有机相）,关键：,酸性染料的选择,：甲基橙、,溴麝香草酚兰,（,BTB,）和溴甲酚绿等；,pH,值的选择：,与生物碱和酸性染料的性质有关。,有机溶剂的选择：,一般用,氯仿、二氯甲烷,水分的干扰及消除,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（一）总生物碱的含量测定,（,3,）雷氏盐比色法（注意事项,p126,）,原理：,BH,+,+,Cr(NH,3,),2,(SCN),4,-,BH,Cr(NH,3,),2,(SCN),4,测定方法：,（复盐沉淀）,复盐沉淀,溶于,丙酮（或甲醇）,直接比色测定,样品,定量过量的雷氏盐,过滤滤液比色测定,max,=520nm,（,4,）异羟肟酸铁比色法,用于含有酯键结构的生物碱的测定,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（二）单体生物碱成分含量测定,1,、,TLCS,生物碱不具有紫外吸收或挥发性时可用本法测定；,选用的吸附剂、展开剂及显色方法与鉴别相似；,使用改良,碘化铋钾等,作为显色剂时，必须完全挥干展开剂后（尤其在碱性环境下展开的）才可喷洒，否则背景深、反差小，影响测定。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（二）单体生物碱成分含量测定,2,、,HPLC(,例题,P,128,),以,反相高效液相,色谱应用较多；,在反相高效液相色谱中，由于硅胶表面残留硅醇基的影响，使生,物碱分析易产生保留时间延长、峰形变宽、拖尾；,可在流动相中加入,硅醇基抑制剂,、,离子对试剂等,措施以克服游离,硅醇基的影响，满足定量分析的要求；,中药制剂中生物碱成分进行高效液相色谱法测定时，使用较多的,是,紫外检测器。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,四、含量测定,（二）单体生物碱成分含量测定,3,、,GC,只适用于有挥发性的，遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔,碱、苦参碱和颠茄类生物碱等,制备供试品溶液时一般应采用,冷提取,，净化过程也要避免加热以,防成分的流失，最后需用氯仿等低极性有机溶剂为溶媒制备成供试,液。,药物分析学科,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,化合物名称,结构式,理化性质、结构及光谱特征,常用定量分析方法,小檗碱,（黄连素）,Berberine,(Umbellatine),（,C,20,H,18,NO,4,；,336.37,）,异喹啉类原小檗碱,型生物碱、季铵型,生物碱、有共轭体,系。,黄色结晶、碱性较,强，易溶于热水或,热乙醇，微溶或不,溶于苯、氯仿、丙,酮，其盐酸盐水中,溶解度小。,mp,：,1450,UV,：,225,，,270,，,331,。,重量法、滴定法,分光光度法,薄层扫描法,薄层荧光扫描法,高效液相色谱法,脉冲极谱法,流动色谱分析法,酶法,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,化合物名称,结构式,理化性质、结构及光谱特征,常用定量分析方法,士的宁,（番木鳖碱）,Strychnine,（,C,21,H,20,N,2,O,2,;334.40,）,单萜吲哚类生物,碱、环叔胺显碱,性、酰胺不显碱,性。,难溶于水，可溶于,乙醇，甲醇。易溶,于氯仿，微溶于乙,醚。,mp,：,268,290,。,UV,：,282,。,重量法,滴定法,分光光度法,一阶导数分光光度法,薄层扫描法,高效液相色谱法,第一节 生物碱类成分分析,五、常见生物碱成分分析,化合物名称,结构式,理化性质、结构及光谱特征,常用定量分析方法,乌头碱,Aconitine,（,C,34,H,47,N O,11,;645.76,）,二萜类酯型生物,碱。,易溶于氯仿、苯、,无水乙醇和乙醚，,难溶于水、微溶石,油醚,mp,：,204,UV:281,273,230,202,滴定法,酸性染料比色法,一阶导数紫外分光光度法,薄层扫描法,高效液相色谱法,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,一、概述,1,、定义：黄酮类化合物是指基本母核为,2-,苯基色原酮（,2-phenyl,chromone,）类化合物，现在则是泛指两苯环通过中央三碳链相互,联结而成的一系列化合物。,2,、含黄酮类成分的常见中药,药物分析学科,中药名称,主要黄酮类成分,中药名称,主要黄酮类成分,黄芩,黄芩苷、黄芩素、,汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素,山柰,山柰酚、山柰素,槐米,芦丁、槲皮素,广藿香,商陆素、芹菜素,葛根,葛根素,、大豆苷、大豆苷元、,7-,木糖苷葛根素,白果,山奈酚、槲皮素、芦丁,枳实,橙皮苷,、川陈皮素、新橙皮苷、,5-,邻,-,去甲基川陈皮素,高良姜,高良姜素、山奈素、槲皮素,茵陈,茵陈黄酮,、芫花素、槲皮素,补骨脂,补骨脂查耳酮、异补骨脂查耳酮,山楂,槲皮素、金丝桃苷,金线草,槲皮素,、山奈酚,第二节 黄酮类成分分析,二、结构特征及理化性质,1,、,结构特征,苯甲酰基 桂皮酰基,240280nm 300400nm,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质,2,、,溶解度,黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、,双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。,游离苷元,难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚,等有机溶剂及稀碱液中；,黄酮苷,一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不,溶于苯、氯仿等。,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质,3,、,酸碱性,酸性：黄酮类化合物因分子中多有酚羟基，故,显酸性,，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性强弱：,7,4-,二羟基,7-,或,4-,羟基,一般酚,5-,羟基,碱性氧原子的性质,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,二、理化性质,4,、,显色反应,盐酸,-,镁粉（锌粉）反应,金属盐类试剂的配合反应,可用于鉴别，但要避免假阳性结果,5,、紫外光谱特征,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,三、定性鉴别,1,、理化鉴别,盐酸,-,镁粉（锌粉）反应,金属盐类试剂的配合反应,2,、色谱鉴别,吸附剂：硅胶、聚酰胺,硅胶色谱分离弱极性化合物较好；,聚酰胺色谱分离含游离酚羟基的黄酮及其苷为佳；,纤维素薄层则适用于分离多糖苷混合物。,显色反应：采用在紫外光下观察荧光和喷显色剂相配合的方法。,药物分析学科,第二节 黄酮类成分分析,四、含量测定,1,、总成分的含量测定,直接测定：常用芦丁作对照测定,显色测定：常用铝盐做显色剂,2,、,单体黄酮成分的含量测定,TLCS,HPLC,（,05,版药典全部使用此法）,五、常见黄酮类成分（略）,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,一、概述,1,、概念,2,、,含三萜皂苷类成分的常用中药,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,甘草酸,人参皂甙,(A,型,),1,、溶解度：,可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，,几不溶于或难溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂；,在含水丁醇或戊醇中溶解度较好,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,甘草酸,人参皂甙,(A,型,),1,、溶解度,皂甙元,能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等,皂甙,可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇,中溶解性较好。,2,、紫外光谱特征,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,二、结构及理化性质,3,、显色反应,醋酐,-,浓硫酸反应,冰醋酸,-,乙酰氯反应,氯仿,-,硫酸反应,金属盐类反应：,+,铅、钡、铜盐沉淀,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,三、定性鉴别,1,、理化鉴别,泡沫反应：多用于检验含有皂苷的原料药；,化学显色反应：仅在组成药物较少的中药制剂中使用。,2,、,TLC,吸附剂：硅胶，氧化铝、硅藻土等。,展开剂：氯仿,-,甲醇,-,水（,13,：,7,：,2,）（,10,以下放置，下层）,氯仿,-,醋酸乙酯,-,甲醇,-,水（,15,：,40,：,22,：,10,）（同上）,显色剂：不同浓度的,硫酸乙醇,液最常用。,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,四、定量分析,（一）总成分分析,1,、重量法,该法主要用于含皂苷的原料药质量控制。,在中药制剂中，当处方中药味含皂苷类成分较多时，常用正,丁醇作溶剂，测定,正丁醇浸出物,。,2,、比色法：,常用显色剂有：香草醛,-,硫酸、,香草醛,-,高氯酸,、醋酐,-,硫酸、,高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等。,注意测定单体皂苷（或皂苷元）与总皂苷的关系,药物分析学科,第三节 三萜皂苷类成分分析,四、定量分析,（二）单体成分分析,1,、,TLC,薄层洗脱,-,比色法,薄层扫描法,2,、,HPLC,HPLC-UV,：人参皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外区的末端；,有紫外吸收的甘草酸、远志皂苷，灵敏度高。,HPLC-ELSD,：检测三萜皂苷类成分的应用日渐广泛,五、常见三萜皂苷类成分,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,一、概述,1,、概念：中药中醌类化合物主要有苯醌,、萘醌、菲醌和,蒽醌,四种类,型,可游离存在，也可与糖结合成苷，称为蒽苷。,2,、含醌类成分的常用中药,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,二、结构及理化性质,丹参醌,IIA,大黄素,1,、物理性质：,存在的形态，升华性，光不稳定性,2,、溶解性：,游离醌类多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，微溶于或不溶于水。,结合成苷后极性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在热水中也可溶解，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非极性溶剂中。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,二、结构及理化性质,3,、酸性：,酚羟基的酸性,碱提酸沉法,4,、显色反应,羟基蒽醌,+,碱,橙，红，紫红，蓝,+Pb,2+,/Mg,2+,配合物,9,、,10,位未取代的,羟基蒽酮化合物,+,对亚硝基二甲基苯胺,紫，绿，蓝，灰,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,三、定性鉴别,1,、显色反应,2,、升华法,3,、,TLC,吸附剂：硅胶,展开剂：,乙酸乙酯,-,甲醇,-,水（,10016.513.5,）适于分离蒽醌苷,元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒适合于分离蒽醌类的苷元。,显色方法：,喷,碱性试剂,，喷,醋酸镁甲醇,液、氨,气熏,及在,紫外灯,下观,察荧光，可见光下直接观察色斑。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,四、含量测定,1,、,游离蒽醌的测定：弱极性溶剂提取后，加碱比色,2,、结合蒽醌的测定：,极性溶剂提取，水解测苷元,先酸水解后，非,极性溶剂提取苷元后测定,3,、单体成分的含量测定,TLCS,HPLC-UV,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,四、含量测定,例,1,、,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定,混合碱液比色法,对照品溶液测定,：以,1,，,8-,二羟基蒽醌,为对照品，精密称取,10mg,于,100mL,量,瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（,100g/mL,）。取,1mL,对照品液于,10mL,量,瓶中，在水浴上蒸干，加,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱,溶解并稀释至刻,度，,放置,1,小时,，以,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱液为空白，在,510nm,波,长处测定。,样品测定：,游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片,10,片，刮去糖衣，精密称定,重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入,氯仿,100mL,，称,重，水浴上,回流,4,小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，,滤过，吸取滤液,50mL,于分液漏斗中，用,蒸馏水,20mL,洗涤,数次，至水层无,色，弃去水液。氯仿层用,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱液振摇萃取,数,次，直至混合碱液无色，合并碱液，用,20mL,氯仿洗涤,数次，至氯仿层无,色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上,加热数分钟至氯仿挥尽,，冷却，移,入,100mL,量瓶中，并稀释至刻度，放置,1,小时，以,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵,混合碱液为空白，在,510nm,处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于,1,，,8-,二,羟基蒽醌含量）。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,四、含量测定,例,1,、,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定,混合碱液比色法,总蒽醌的测定,：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于,150mL,烧瓶中，加,2.5mol/L,硫酸,30mL,直火回流,4,小时,，放冷，加入,氯仿,20mL,，水浴,回流,0.5,小时,，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反,复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用,蒸馏水洗涤,数次，至水,层无色，弃去水液。氯仿液用,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵,混合碱液振,摇萃取数次，至碱液无色，合并，用,20mL,氯仿洗涤数次，至氯仿层,无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入,50mL,量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置,1,小时，以,5%,氢氧化,钠,-2%,氢氧化铵液为空白，在,510nm,处测定，计算游离蒽醌的含量,（相当于,1,，,8-,二羟基蒽醌含量）。,结合蒽醌的计算：,每片含结合蒽醌量,=,每片含总蒽醌量,每片含游离蒽醌量,。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,四、含量测定,例,2,、,复方丹参片中丹参酮,A,含量测定,高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验,：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇,-,水,（,73,：,27,）为流动相；检测波长为,270nm,。,对照品溶液的制备,：精密称取丹参酮,A,对照品,10mg,，置,50mL,棕色量瓶,中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取,5mL,，置,25mL,棕色量瓶中，加,甲醇至刻度，摇匀，即得（每,1mL,中含丹参酮,A40g,）,供试品溶液的制备,：取本品,10,片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取,1g,，精密称定，精密加入甲醇,25mL,，称定重量，超声处理,15,分钟，放冷，,再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。,测定法：,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各,10,L,，注入液相色谱,仪，测定，即得。,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,化合物名称,结构式,理化特征,常用定量方法,大黄酸,(Rhein),（,C,15,H,8,O,6,，,284.21,）,为黄色针状结晶（升化法），,mp321,322,，,330,分解。几乎不溶于水，溶于碱和吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。,UV,max,MeOH,nm(),：,229(36800),258(20100),435(11100),。,高效液相色谱法,薄层扫描法,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,化合物名称,结构式,理化特征,常用定量方法,大黄素,(Emodin),（,C,15,H,10,O,5,，,270.23,）,为橙色针状结晶，,mp265,267,。几乎不溶于水，溶于乙醇及氢氧化钠、碳酸钠、氨水等碱液中。,25,时溶于（,g/100mL,）,:,乙醚,0.140,、氯仿,0.071,、四氯化碳,0.010,、二硫化碳,0.009,。,UV,max,EtOH,nm(Log),：,220,（,4.55,），,252,（,4.26,），,265,（,4.34,），,289,（,4.34,），,437,（,4.10,）。,高效液相色谱法,薄层扫描法,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,药物分析学科,第四节 醌类成分分析,五、常见醌类成分,药物分析学科,第五节 挥发性成分分析,一、概述,挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分，其化学组,成复杂，主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合,物。,萜类化合物,芳香族化合物,脂肪族化合物,含挥发油成分的常用中药,药物分析学科,中药,名称,挥发油中主要成分,中药名称,挥发油中主要成分,厚朴,辛夷,肉桂,陈皮,川芎,薄荷,广霍香,-,桉油醇、,-,蒎烯、柠檬烯、醋酸龙脑酯,柠檬烯、丁香酚、桉油精、,-,蒎烯,桂皮醛、桂皮酸、乙酸苯丙酯,柠檬烯、柠檬醛,藁本内酯、,3-,丁叉苯酞、香桧烯,薄荷酮、薄荷脑、乙酸薄荷酯,广霍香醇、苯甲醛、丁香酚、桂皮醛,羌活,细辛,豆蔻,丁香,-,蒎烯、,-,蒎烯、柠檬烯、萜品烯醇,-4,、,甲基丁香酚、黄樟醚、细辛醚优香芹酮、,-,蒎烯、,-,蒎烯,桉油精、龙脑、樟脑、草烯松油烯、蒎烯,丁香酚、水杨酸甲酯、,-,蒎烯、,-,蒎烯、乙酰丁香酚,第五节 挥发性成分分析,二、结构及理化性质,薄荷醇,桂皮醛,柠檬烯,1,、溶解性：易溶于有机溶剂,2,、显色反应：,酚类,+,三氯化铁蓝，蓝紫，绿,羰基,+,苯肼、羟胺结晶体,醛类,+,硝酸银胺银镜,内酯类,+,亚硝酰铁氰化钠,+NaOH,红色并逐渐消失,药物分析学科,第五节 挥发性成分分析,三、,定性鉴别,TLC,吸附剂：硅胶、氧化铝,展开剂：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯）,显色剂：茴香醛,-,浓硫酸试剂（通用型），,若干扰较多，选用专属性强的显色剂,GC,：对照品对照法定性,GC-MS,GC-FTIR,药物分析学科,第五节 挥发性成分分析,四、,定量分析,总成分分析：蒸馏法,单体成分分析：,GC,（首选）,HPLC,TLCS,GC-MS,GC-FTIR,药物分析学科,第六节 木脂素成分分析,一、,概述,木脂素是一类在生物体内由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。,含木脂素类成分的常用中药：,中药名称,主要成分,中药名称,主要成分,五味子,牛蒡子,连翘,远志,五味子甲素 五味子乙素 五味子醇甲 五味子醇乙,牛蒡子苷 牛蒡子苷元,拉帕酚,连翘脂素 连翘脂苷,中国远志脂酚,厚朴,细辛,杜仲,黑芝麻,厚朴酚,和厚朴酚,细辛脂素,芝麻脂素,（,+,）,-1-,羟基松脂素葡萄糖苷,芝麻脂素,药物分析学科,第六节 木脂素成分分析,二、,结构及理化性质,C,H,3,C,H,3,O,C,H,3,O,C,H,3,H,3,C,O,H,3,C,O,H,3,C,O,H,3,C,O,牛蒡子苷,(,元,),五味子甲素,1,、溶解性,游离,易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等,成苷时,可溶于甲醇、乙醇等,药物分析学科,第六节 木脂素成分分析,二、,结构及理化性质,2,、紫外光谱特征,max,=,250-350nm,3,、显色反应,通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇,Labat,反应：,+,硫酸,+,没食子酸蓝绿,Ecgrine,反应：,+,硫酸,+,变色酸蓝紫,药物分析学科,第六节 木脂素成分分析,三、,定性分析,TLC,吸附剂：硅胶,展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等）,显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏,四、含量测定,总成分：变色酸比色法,单体成分：,TLCS,HPLC,药物分析学科,第六节 木脂素成分分析,五、常见木脂素类成分,药物分析学科,第七节 其他成分分析,一、香豆素类成分,香豆素是具有苯骈吡喃酮母核的内酯类衍生物广泛存在于芸香科和,伞形科的植物中。,1,、主要结构及理化性质,补骨脂素,茵陈内酯,异羟肟酸铁反应：,酚羟基,-,三氯化铁显色反应：,紫外光谱特性：,max,=300nm,，,母核有供电子基团取代可产生荧光,药物分析学科,第七节 其他成分分析,一、香豆素类成分,2,、定性鉴别,荧光法,薄层荧光鉴别,七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别,取本品,10g,，研细，加醋酸乙酯,20ml,、盐酸,0.5ml,，超声处,理,20,分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯,0.5ml,使溶解，,作为供试品溶液。,薄层条件：硅胶,G,薄层板，展开剂正已烷,醋酸乙酯（,4:1,），,显色剂为,10%,氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯,365nm,下检视。,药物分析学科,第七节 其他成分分析,一、香豆素类成分,3,、含量测定,可见,-,紫外分光光度法：,荧光光度法：专属性强,TLCS,：薄层荧光扫描,HPLC,：,C18,，甲醇,-,水，,UVD or FD,GC,：分子量小，具有挥发性,药物分析学科,第七节 其他成分分析,一、香豆素类成分,乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量测定,色谱条件,固定相：,OV-1,，,2m3mmID,玻璃柱；气体流速：,N,2,30ml/min,，,H,2,50ml/min,，,Air 500ml/min,；柱温：,200,；进样器和检测器温度：,260,。,供试品溶液和对照品溶液的制备,精密称取内标物正廿三烷适量，加氯仿溶解，制成每,1ml,约含,6mg,的溶液，作为内标溶液。取乌蛇止痒丸适量，研成细粉，精密称取约,5g,，置索氏提取器中，精密加入内标溶液,5.0ml,，加氯仿,80ml,，回流至近无色。将提取液浓缩至数毫升，通过,3g,小型硅胶柱，用氯仿洗脱至,10ml,量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。称取蛇床子素约,25mg,，加入内标溶液,5.0ml,，振摇使溶解，摇匀，作为对照品溶液。,校正因子的测定,精密吸取对照品溶液，连续进样,3,5,次，每次,2l,，按峰面积计算校正因子。,样品测定,精密吸取供试品溶液，连续进样,3,5,次，每次,2,l,，用校正因子计算样品含量。,药物分析学科,第七节 其他成分分析,二、有机酸类成分,1,、定性鉴别,吸附色谱,分配色谱,2,、含量测定,酸碱滴定法总有机酸,分光光度法,高效液相色谱法,薄层色谱法,其他方法,药物分析学科,第七节 其他成分分析,三、环烯醚萜类成分,特殊的单萜,物理性状（存在的形态；多苦味；稳定性差，易聚合）,溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇,薄层定性鉴别,吸附剂：硅胶、聚酰胺,显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯,甲醛硫酸试液,龙胆苦苷,药物分析学科,第七节 其他成分分析,三、环烯醚萜类成分,含量测定,高效液相色谱法,薄层扫描法,荧光分光光度法,分光光度法,复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定,精密称取本品,3g,，置索氏提取器内，加甲醇回流提取,6,小时，,回收甲醇至干，加水,10ml,溶解，用水饱和正丁醇提取，提取,液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭,-,中性氧化铝柱，,用甲醇,100ml,洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用,2ml,甲醇溶,解，作为供试品溶液。,薄层条件：硅胶,GF,254,薄层板，展开剂氯仿,甲醇,25%,氨,水（,4:1:0.1,），检测波长,247nm,，参比波长,370nm,。,药物分析学科,第七节 其他成分分析,四、单萜及二萜类成分,1,、含芍药甙中药制剂的分析,薄层色谱,高效液相色谱,2,、含穿心莲内酯中药制剂的分析,薄层色谱,回滴法,比色法,总内酯,薄层扫描或高效液相色谱法,单体成分,穿心莲内酯,药物分析学科,第七节 其他成分分析,五、多糖,1,、鉴别,TLC,：,硅胶、纤维素、硅藻土,PC,：,展开剂：正丁醇、水混合体系,显色剂：苯胺,-,邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等,CE,：,滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳,HPLC,：,氨基柱,GC-MS,：,酸水解中和柱前衍生,GC-MS,2,、提取分离：,水提醇沉,防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响,药物分析学科,第七节 其他成分分析,五、多糖,3,、含量测定,1,）总多糖的测定,（例题,P153,）,3,5-,二硝基水杨酸比色法棕红色（,550nm,）,苯酚,-,硫酸法蓝绿色（,480-490nm,）,蒽酮,-,硫酸法黄绿色（,620nm,）,2,）单体多糖的含量测定,高效凝胶液相色谱法确定分子量,高效液相色谱法确定组成,色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱,检测器：示差折光检测器,药物分析学科,习 题,1,、当采用硅胶薄层色谱法鉴别生物碱成分时，为什么常有斑点,Rf,值较小或斑点明显拖尾的现象？可采用哪些方法克服？,2,、酸性染料比色法测定中药制剂中生物碱成分时，关键是什么？,3,、简述聚酰胺薄层色谱分离黄酮类化合物的原理和特点。,4,、简述,HPLC-ELSD,检测人参皂苷等成分的优点。,5,、总多糖的主要含量测定方法有哪些？,6,、设计：止喘灵注射液处方组成为麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘，,请设计用薄层色谱法鉴别其中洋金花的方法。（样品供试液制备可,根据方法原理用流程表示，薄层色谱法请注明选用的吸附剂及薄层,原理、展开剂特点及显色剂名称）,药物分析学科,