DB62∕T 2986-2019 春小麦花药培养技术规程(甘肃省).pdf

ICS 67.060 B 21 甘DB62 肃省地万析、准DB62/T 2986-2019 春小麦花药培养技术规程2019一03一 07发布2019一04一01实施甘肃省市场监督管理局发布0862/T 2986-2019 目;欠前言II I 范围. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规范性引用文件- . . . . . . . 1 3 术语和定义1 4 试剂5 仪器设备. . . . 2 6 培养基成分、配制及灭菌. . . . . . . . . . . 2 7 春小麦花药培养技术流程2 I 0862/T 2986-2019 II 目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由甘肃省农业科学院提出。本标准由甘肃省粮食作物栽培标准化技术委员会归口。本标准起草单位甘肃省农业科学院生物技术研究所。本标准主要起草人:王炜、罗俊杰、叶春雷、陈王军、杨随庄、欧巧明、裴怀弟、李忠日王、李淑洁。0862/T 2986-2019 春小麦花药培养技术规程1 范围本标准规定了春小麦花药培养本标准适用于春小麦的2 规范性引用文件下列文件对于凡是不注日期的引GB/T 3. 1 3.2 3.3 3.4 单倍体体细胞中愈伤组织在植物的组织培养愈伤组织诱导率植物组织培养中用来衡量愈伤3. 5 绿茵生产率11、培养技术、炼、苗移栽等技术。11人工培养基上，从圆无分化的薄壁分化的组织，这种组织具有成期。植物组织培养中用来衡量愈伤组织诱导与分化两个过程中获得绿茵效率的指标。4试剂4. 1 超纯水应符合GB/T6682-2008中规定的三级超纯水。1 0862/T 2986-2019 4. 2 试剂消毒试剂:乙醇(75%)。无机试剂:硝酸续、硝酸惆、二水氯化钙、七水硫酸镇、磷酸二氢押、确化押、棚酸、四水硫酸锤、七水硫酸钟、铝酸纳、五水硫酸铜、氯化钻、硫酸亚铁、EDTA二纳盐。有机试剂:肌醇、烟酸、盐酸毗哆醇、盐酸硫胶素、甘氨酸、生物素、谷氨眈肢。生长调节剂2, 4-D、6-BA、IAA、激动素。其他试剂:秋水1ilJ素、琼脂、庶糖。所有试剂等级均为分析纯。5 仪器设备电子分析天平(精确度。01町、纯水仪、pHr十、恒温培养箱(温度范围50C650C)、超净工作台、高压灭菌锅、电炉(220V)或电磁炉。量筒(OmL 1000mL)、烧杯(50mL2000mL)、容量瓶(50mL1000mL)、pH试纸、移液管。6培养基成分、配制及灾菌6. 1 愈伤组织、诱导培养基成分每升培养基中含有20mg硝酸押、380mg磷酸二氢续、200mg七水硫酸镇、700mg硫酸仰、140mg二水氯化钙、6.06mg囚水硫酸锤、3mg囚水硫酸钟、3.0mg棚酸、005mg典化甲、0.025mg五水硫酸铜、0.025mg六水氯化钻、0.05mg二水饲酸纳、800mg谷氨酸胶、0.5mg盐酸Prt哆醇、0.5mg盐酸硫胶素、1.5mg生物素、2mg甘氨酸、5500mg琼脂、驭。OOmgl在糖、27.8mg硫酸亚铁、37.8mgEDTA二纳盐、2mg2，4-D、0.5mg激动素。6. 2 愈伤组织分化培养基成分每升培养基中含1650mg硝酸绞、1900mg硝酸押、440mg氯化钙、370mg七水硫酸镇、170mg磷酸二氢仰、083mg典化押、6.2mg棚酸、22.3mg囚水硫酸锤、8.6mg七水硫酸钟、0.25mg饲酸纳、0.025mg硫酸铜、0.025mg氯化钻、27.8mg硫酸亚铁、37.8mgEDTA二纳盐、100mg肌醇、0.5mg烟酸、0.5mg盐酸口比哆醇、。1mg盐酸硫胶素、2.0mg甘氨酸、5500mg琼脂粉、30000mg在糖、2.0mg激动素、o15mgIAA。6. 3 自己制按照上述培养基成分含量i窑解子超纯水后混合，配制后将pH值调节至5.86.2。6. 4 灾菌将上述配制好的培养基置于高压灭菌锅中120-C、1.06kg/cm2条件下灭菌20mm。7 春小麦花药培养技术流程7. 1 采穗2 0862/T 2986-2019 选择生长健壮、无病虫害、处于孕穗期的植株，在上午9hllha才取花药中大部分小J包子细胞处于单核靠边期的麦穗，装子塑料袋中在冰箱中4C预处理24h48h。7.2 消毒接种前在超净工作台上用75%的酒精对麦穗进行表面消毒约30s60s。7.3 接种在超净工作台上将麦穗中部的问、接手中材料名。7.4 愈伤组织诱导培养7.6. 1 炼苗沙按3，2, 7.6.2 移栽取幼苗根尖，株。7. 8 主要技术指标愈伤组织诱导率达到5%以上，组织诱导率与绿茵生产率按如下公式计养基表面，在培养瓶上标注接种时，再于24C下暗培养，上，将培养M目为21条的为单倍体植可视为春小麦花药培养获得成功。愈伤率(%)二产生的愈伤组织块数/接种花药数xlOO%;绿茵生产率(%)二分化绿茵数/接种花药数xlOO%。3