第三章-生药的鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 生药鉴定的意义,生药的鉴定是综合利用传统的和现代的检测手段，依据国家药典、有关政策法规及有关专注、资料等对生药进行真实性、纯度及品质优良度的评价，最终达到确保生药的真实性、安全性和有效性。,生药鉴定的意义,1,发掘祖国药学遗产，整理生药品种,从如下几方面发掘整理祖国药学：,当今常用的生药约八百余种，其中绝大多数在历代本草中已有记载，但对有的品种，还需要非常仔细地考查地方志，历史杂书等。如历代本草著作中没有罗汉果的记载，但后来有人在清代的永宁州志和临桂县志两书中发现有罗汉果的形态、性味、效用等内容的简明记载,有些药材的来源，本草中有分歧和异议，,如唐本草首次记载了百合的特征，“一种叶大茎长，根粗花白者，宜入药”，应是正品。但宋代的本草衍义中却将一种具紫色珠芽的种类即卷丹作百合的正品。直到现在百合原植物还存在这样的分歧；,有的品种还需通过实际调查认真加以考证，,如虎掌和天南星，并非一物，虎掌实为掌叶半夏的块茎。总之，历代本草中有大量精华待发掘、整理提高，也有少数谬误和争议需纠正与澄清。这是发展现代药学有待解决的问题。,总之对生药品种的整理工作十分重要，要澄清混乱品种明确正品和主流，必须大量地调查、鉴定、考证和进行质量分析工作，力求达到一名一物，一物一名。但也应看到，由于地区用药历史习惯较长，生药品种复杂，此问题还很难迅速改变，尚需做大量艰巨工作才可能实现。,2鉴定生药真伪优劣，确保生药质量,生药品种的真伪是指生药品种的真假而言。当前生药的真伪问题十分突出，不少常用生药出现了伪品、混淆品，如半夏、茯苓、车前子、牛蒡子、金钱草等。究其原因：,无专业知识的人误种、误收、误售；,个别人有意掺伪、做假，如金钱白花蛇，有用银环蛇的成蛇纵剖成条，接上其他蛇头后盘成小盘；也有用其他带环纹的幼蛇或其他幼蛇在身上用白色油漆划出环纹等伪充正品。人参以往伪品较多，如商陆根、野豇豆根等；目前，有人从栽培的国产人参中选出类似西洋参外形者，加工成西洋参出售，这些伪品很难以肉眼鉴别出来。上面提到是品种的真伪问题。,多基源问题。,如防己的商品品种已达十余种，防己的原植物为防己科植物粉防己，广防己的原植物为。此外，有的地区使用木防己、川防己等，川防己为马兜铃科植物。,总之，要解决品种问题是一个长期的艰巨任务。它不但需要药学工作者通过研究、实验，努力做到生药的名称准确、品质可靠，而且还要求药材生产、经营者，特别是中医师学习、使用它们的名称和功效时规范化。,3寻找和扩大新药源,近年来我国医药卫生事业得到迅速发展，生药生产虽然成倍增长，仍然不能满足国内外的需要，且生药大多依靠野生资源，经逐年采集，有些品种的产量有所下降，造成常用生药材的紧缺，如杜仲、天麻、厚朴等；一些多年生的道地栽培药材，由于需要量很大，虽一再扩大种植面积，也不时形成缺货现象，如黄连、当归、怀牛膝等；有些药材如牛黄、麝香，本来产量就小，更显得供不应求。有些品种是国际、国内公布的珍稀濒危动、植物品种，必须保护和尽快寻找代用品，如羚羊角、人参（野生）等，要解决上述问题，除发展野生药材之外，必须家种家养，扩大栽培面积、增加圈养头数，以弥补产量，努力寻找新的药源。,通过普查，从生物的亲缘关系上寻找野生资源,。通过多次全国性药源普查，发现了不少野生生药资源，和某些进口药材的国产品资源，如新疆的阿魏、紫草、贝母；青海的枸杞、党参；西藏的胡黄连；云南的诃子、马钱；广西的安息香；海南的大风子、降香等。通过深入研究，从生物的亲缘关系上发现了丹参的同属植物云南鼠尾Salvia yunnanensis和甘西鼠尾Salvia przewalskii根中有效成分含量较丹参为高或较高；根据商品调查，作金银花的忍冬属植物有13种1变种，有效成分绿原酸的含量种间差别较大，如灰毡毛忍冬和菰腺忍冬的花蕾含量最高，比山东的正品金银花还高。,从有效成分筛选,：发现麝鼠香（麝鼠雄性腺内囊的分泌物）中含有麝香酮，与天然麝香的化学成分、药理作用相似，可能成为麝香的代用品：具抗肝炎作用的有效成分齐墩果酸在木犀科植物女贞的果实，龙胆科植物青叶胆和川西獐牙菜等的全草中均有分布，但现在工业生产的原料主要是五加科植物几种楤木和雪胆、中华雪胆等。,以药理筛选结合临床疗效寻找新药。,如在抗肿瘤药的药理筛选中发现唐松草新碱具有较好的抗肿瘤活性，后从10种东北产唐松草属植物里，找到展枝唐松草（Thalictrum Squarrosum），根中唐松草新碱含量最高，目前唐松草新碱的制剂已用于临床。,因此，开展生药的鉴定，在判断生药的真伪、评价生药质量的优劣、发掘新药源、保证生药的可持续利用以及药品应用的安全、有效等方面，具有十分重要的意义。,第二节生 药鉴定的依据,生药鉴定的依据是,国家药品标准。,生药标准是生药药的品质要求和检验方法所作的技术规定，是生药生产、供应、使用、检验部门遵循的法定依据。,1.中国药典,是国家药品的法典。先后出版了七版药典。现行版为2005年版(第七版)。,2局颁标准中华人民共和国国家食品监督管理局颁发的标准,。,3.地方药品标准,另可参考有关国家药典：日本药局方、英国药典。,第三节生药鉴定的一般程序,生药鉴定一般包括原植（动）物的确认，以及性状、显微、理化鉴定等项目，有条件则应与标准生药作对照比较，以判断商品生药或检品的真实性、纯度及品质的优良度。,1.检品登记,2.取样,3.鉴定,4.写出报告,一、检品登记,登记内容包括：,送检单位、送检日期、送检目的、供试品数量、包装样式等。,二、取样,1.取样前，应注意品名、产地、规格等级及包件式样是否一致，检查包装的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等，详细记录。凡有异常情况的包件，应单独检验。,2.从同批生药包件中抽取检定用样品原则如下：生药总包件数在100件以下的，取样5件；1001000件按5%取样：超过1000件的，超过部分按1%取样；不足5件的逐件取样；对于贵重生药，不论包件多少均逐件取样。,3.对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的生药，可用采样器（探子）抽取样品。,每一包件至少在不同部位抽取23份样品，包件少的抽取总量应不少于实验用量的3倍；包件多的，每一包件取样量一般规定：一般生药100500g；粉末状生药25g；贵重生药510g；个体大的生药，根据实际情况抽取代表性的样品。如个体较大时，可在包件不同部位（包件大的应从10cm以下的深处）分别抽取。,4.将所取样品混和拌匀，即为总样品。,对个体较小的生药，应摊成正方形，依对角线划字，使分为四等分，取用对角两份；再如上操作，反复数次至最后剩余的量足够完成必要的试验以及留样数为止，此为平均样品。个体大的生药，可用其他适当方法取平均样品。平均样品的量一般不得少于作真实性、纯度和品质优良等实验所需用量的3倍数，即1/3供实验室分析用，另1/3供复核用，其余1/3则为留样保存，保存期至少一年。,5.平均样品的数量不少于实验所需用量的3倍，即13供分析鉴定用，另13供复核用，其余13则为保存留样，保存期至少1年。,三、鉴定,1.来源,2.性状,3.鉴别,4.检查,5.,含量测定,四、写出报告,要求详细、真实,第四节 生药的鉴定方法,一、来源鉴定：,综合运用植物学、动物学或矿物形态学和分类学知识、对生药的来源进行鉴定，以确定其正确的学名。,步骤如下：1.观察植物形态,2.核对文献,3.核对标本,二、性状鉴定,主要利用感观（眼看、手摸、鼻闻、口尝等）进行宏观鉴定（鉴别药材的外观性状）。是生药鉴定必备的基本功。一般包括七个方面：,形状、大小、颜色、表面特征、质地、折断面、气味，,还有,水试、火试。,1.形状,形状与药用部位有关，每类药材的形状一般都有共同点，即具有一般形态规律。经验鉴别：党参根头多数疣状突起的茎痕和芽习称“狮子盘头”；防风的根茎部分称“蚯蚓头”；山参主要特征描述为“芦长碗密枣核艼，紧皮细纹珍珠须”；海马的外形为“马头蛇尾瓦楞身”；蕲蛇为“龙头虎口翘鼻头，方胜连珠指甲尾”。,白术,生半夏,南柴胡,大黄饮片,三七,川贝母,黄,芪,黄,芩,防风,防风,海马,丹参,当归,人参,天麻,何首乌,羌活,桔梗,怀牛膝,牛膝,葛,根,槲寄生,鸡血藤,大血藤,麻,黄,穿山甲,全蝎,羚羊角,马钱子,2.大小：指长短、粗细、厚薄。,3.色泽：观察生药色泽时，生药要干燥，在日光下观察。色泽描述包括表面和断面色泽的内容。,描写色泽时应注意大部分生药的色泽是复合的，或有的略有不同，一般把质量号的色泽放在前面，二种色调描写的应以后一种为主。,4.表面特征,常是性状鉴别的主要依据，指药材表面光滑或粗糙；有无纹、皱、槽、沟、连珠；表面常可见节、根痕、叶痕、皮孔或毛茸等。如白花前胡根头部有叶鞘残存的纤维毛状物，是区别紫花前胡根的重要特征。暹罗角有“天沟”、“地岗”,5.质地,指药材的软硬、坚韧、疏松、致密、轻重、弹柔以及粉性、黏性、绵性、柴性、角质、油润等特征。有时反映其显微特征及质量。经验鉴别：南沙参“松泡”（质轻松，断面多裂隙）；山药“粉性”（富含淀粉，折断时有粉尘散落）；当归“油润”（质地柔软，含油而润泽）；郁金“角质”（质地坚硬，断面半透明状或有光泽）。道地黄芪质柔韧、粉性质优，江苏引种品质坚硬、柴性质劣。,6.折断面,A.折断时的现象：,易折断或不易折断，有无粉尘散落（甘草）、胶丝相连（杜仲）等。,B.折断时的断面特征：,平坦（牡丹皮），有亮星（厚朴），呈纤维性（黄柏）、颗粒性（肉桂）或裂片状（苦楝皮）。,C.横断面特征：,断面纹理；皮木比例；维管束的排列方式、射线的分布；棕色油点有无等。经验鉴别：黄芪“菊花心”；粉防已“车轮纹”；大黄“星点”、何首乌“云锦纹”、商陆“罗盘纹”（异常维管束）；茅苍术“朱砂点”（油室）、“起霜”(析出白毛状结晶)，白术不“起霜”；牡丹皮“亮星”（丹皮酚结晶）等。,7.气味,气味与药材所含成分及含量有关，不但是药材品种鉴别的重要依据，也是衡量药材质量的标准之一。如檀香、麝香（麝香酮）、肉桂、丁香（丁香酚）等有特殊的香气，阿魏有特异的臭气；乌梅、木瓜、山楂味酸，黄连、黄柏味极苦（小檗碱）；甘草味甜（甘草甜素）等等。若药材的气味改变，就要考虑其品质问题。（尝味时舌尖部只对甜味敏感，近舌根部对苦味敏感，所以口尝时要咀嚼片刻，使舌头的各部分都接触到药液。对剧毒药材，不宜口尝。）,8.水试,水试法是利用药材在水中或遇水发生沉浮、溶解、颜色变化及透明度、膨胀性、旋转性、黏性、酸碱性变化等特殊现象进行鉴别。如西红花水液染成金黄色；秦皮水浸液在日光下显碧蓝色荧光；苏木投热水中，水显鲜艳的桃红色。葶苈子、车前子等加水浸泡，种子变黏滑，体积膨胀；熊胆投入清水中即在水面旋转并呈现黄线下沉而不扩散。这些现象与内含成分或组织构造有关。,9.火试,用火烧之，能产生特殊的气味、颜色、烟雾、闪光和响声等现象，来鉴别药材。如降香微有香气，点燃则香气浓烈，有油流出，烧后留有白灰；麝香用火烧时有轻微爆鸣声，起油点如珠，似烧毛发但无臭气，灰为白色；海金沙易点燃而产生爆鸣声及闪光。,三、显微鉴定,显微鉴定：,是借助显微镜观察药材的组织构造、细胞形态以及后含物的特征，用以鉴定生药品种和质量的重要手段之一。,适用对象：1.2.3.4（P18）,（一）显微制片,1.横切片或纵切片制片：徒手或滑走切片法,（1）徒手切片法：是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。徒手切片的优点是简单、方便，不需要复杂的设备，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。,（2）滑走切片法：是利用滑走切片机切新鲜的或保存的材料，亦可以切经由石蜡制片法包埋的材料。此法切出的切片厚薄均匀、结构完整，适用于一些比较坚硬的材料,2.表面制片,3.粉末制片,4.解离组织制片,氢氧化钾法,硝铬酸法,氯酸钾法,5.花粉粒与孢子制片,6.磨片制片,（二）显微制片常用试液及其特点,1.水或稀甘油：物理性透明剂,2.甘油醋酸试剂：多用于观察淀粉粒,3.水合氯醛：常用的透明剂。,（三）细胞内含物性质的鉴别,内含物,所加试剂,反应现象,淀粉粒,碘,蓝色或紫色,糊粉粒,碘,棕色或黄棕色,硝酸汞,砖红色,脂肪油、挥发油、树脂,苏丹,90%乙醇,橘红、红色、紫红色,脂肪油、树脂不溶解（蓖麻油、巴豆油除外），挥发油溶解。,菊糖,10%a-奈芬乙醇、硫酸,显紫色并溶解,黏液,钌红试液,红色,草酸钙结晶,稀醋酸,稀盐酸,硫酸,不溶解,溶解无气泡,溶解后析出针状就、硫酸钙结晶,碳酸钙结晶,稀盐酸,溶解，有气泡产生,硅质,硫酸,不溶解,（四）显微测量,应用显微尺在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小。,测量常用的工具：目镜测微尺与载物台测微尺。,四、理化鉴定,利用物理或化学的方法，对生药及其制剂中所含主要化学成分或有效成分进行定性和定量分析，来鉴定生药真伪和品质优良度的一种方法。,（二）一般理化鉴别方法,1.呈色反应：,利用生药的化学成分能与某些试剂产生特殊的颜色反应来鉴别。,2.沉淀反应：利用生药某些化学成分能与某些试剂产生特殊的沉淀反应来鉴别。,3显微化学反应,显微化学反应是将生药粉末、切片或浸出液，置于载玻片上，滴加某些化学试剂，显微镜下观察其产生的沉淀、结晶或特殊颜色。如黄连粉末滴加稀盐酸，可见针簇状盐酸小檗碱结晶；,4.微量升华：是利用中药中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，在显微镜下观察其结晶形状、颜色及化学反应作为鉴别特征。,茶叶,的升华物，为白色针状结晶（咖啡碱）。加浓盐酸1滴溶解升华物，再加氯化金试液，得黄色针状结晶（咖啡碱氯化金络盐）。,大黄,的升华物为黄色针状或羽状结晶（蒽醌化合物），加碱液溶解并显红色。,微量升华的方法：取金属片，安放在有圆孔（直径约2cm）的石棉板上，金属片上放一小金属圈（高度约0.8cm），对准石棉板上的圆孔，圈内加入生药粉末一薄层，圈上放一载玻片。在石棉板下圆孔处用酒精灯徐徐加热（火焰距板约4cm）数分钟，至粉末开始变焦，并有气化物发生，去火待冷，则有结晶状升华物凝集于玻片上。将玻片取下反转，在显微镜下观察结晶形状，并可加化学试剂观察其反应。必要时可用显微熔点测定器测定结晶的熔点。,5.荧光分析,利用生药中所含的某些化学成分，在紫外光或自然光下能产生一定颜色的荧光性质进行鉴别。,例如,黄连饮片显黄色荧光；,浙贝母粉末显亮淡绿色荧光；,大黄粉末显深棕色荧光,。,6泡沫反应和溶血指数的测定,利用皂苷的水溶液振摇后能产生持久性的泡沫和溶解红细胞的性质，可测定含皂苷类成分药材的泡沫指数或溶血指数作为质量指标。,（三）色谱法,常用以下三种色谱法：,薄层色谱法(TLC),气相色谱法(GC),高效液相色谱法(HPLC),（四）分光光度法,1.紫外-可见分光光度计法,2.红外分光光度计法,3.原子吸收分光光度计法,（五）杂质检查,1.杂质包括：,2.检查方法：挑拣杂质,杂质称重，计算在供试品中,的含量。,（六）灰分测定,生药中灰分的来源，包括生药本身经过灰化后遗留的不挥发性无机盐，以及生药表面附着的不挥发性无机盐类，即总灰分。同一种生药，在无外来掺杂物时，一般都有一定的总灰分含量范围。规定生药的总灰分限度，对于保证生药的品质和纯净程度，有一定的意义。,1）.总灰分测定法,供测定样品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，称取样品23g（如需测定酸不溶性灰分，可取35g），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全碳化时，逐渐升高温度至500600，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含总灰分的百分数。如样品不易灰化，可将坩埚放冷，加热蒸馏水或10%硝酸铵溶液2ml，使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法灼炽，至坩埚内容物完全灰化。,2）.酸不溶性灰分测定法,取上项所得的灰分，在坩埚中加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热蒸馏水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用蒸馏水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的百分数。,（七）水分测定：,是为了保证生物不因所含水分超过限度而发霉变质。水分测定的方法常用的有烘干法和甲苯法。对于贵重的生药，又含有挥发性成分，则采用减压干燥法。,1.烘干法,适用于不含或少含挥发性成分的生药。取样品25g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含有水分的百分数。,2.甲苯法,适用于含挥发性成分的生药，用化学纯甲苯直接测定，必要时甲苯可先加少量蒸馏水，充分振摇后放置，将水层分离弃去，经蒸馏后使用。,测定时取样品适量（约相当于含水量24ml），精密称定，置500ml的短颈烧瓶中，加甲苯约200ml，必要时加入玻璃珠数粒。将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分，将短颈烧瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少许，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，改算成供试品中含有水分的百分数。,3.减压干燥法：,取培养皿（直径约12cm），加入新鲜的五氧化二磷干燥剂，铺成0.51cm厚度，放入减压干燥器中。测定时取样品24g，混合均匀。分取0.51g,置已在供试品同样条件下干燥并称重的称瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至2.67kPa（20mmHg）以下持续半小时，室温放置24小时。在减压干燥器出口连接新鲜无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称瓶迅速精密称定重量，计算供试品中含有水分的百分数。,（八）浸出物的测定,对于有效成分尚不明确或尚无精确定量方法的生药，一般可根据已知成分的溶解性质，选用水或其它适当溶剂为溶媒，测定一药中可溶性物质的含量，以示生药的品质。通常选用水，一定浓度的乙醇（或甲醇）、乙醚作浸出物测定。供测定的生药样品须粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。,（1）水溶性浸出物测定,A冷浸法：取样品约4g，称定重量（准确至0.01g），置250300ml的锥形瓶中，精密加入水100ml，塞紧，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中含水溶性浸出物的百分数。,热浸法：,取样品约24g，称定重量（准确至0.01g），置250300ml的锥形瓶中，精密加入水50100ml，塞紧，称定重量，静止1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，塞紧，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中含水溶性浸出物的百分数。,（2）醇溶性浸出物测定,取适当浓度的乙醇或甲醇代替水为溶媒。照水溶性浸出物测定法进行（热浸法须在水浴上加热）。,3.醚溶性浸出物测定,取样品24g，称定重量（准确至0.01g），置于已恒重烧瓶的脂肪油抽出器中，用乙醚作溶剂，水浴加热46小时，放冷，以少量乙醚冲洗回流器，洗液接入蒸馏瓶中，低温蒸去乙醚，于105干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，以干燥品计算供试品中含醚溶性浸出物的百分数。,（九）挥发油测定,适用于含较多量挥发油的生药。测定用的样品，一般须粉碎使能通过二号至三号筛，并混合均匀，仪器装置如图3-2。,甲法：适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油。取样品适量（约相当于含挥发油0.51.0ml），稳定重量（准确至0.01g），置1000ml的烧瓶中，加水300500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器（有0.1ml的刻度）的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中含挥发油的百分数,乙法：适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水便充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度，30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积。然后照甲法自取样品适量起，依法测定，自油层量中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品含有挥发油的百分数。,