环境卫生学1.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第一章 概论,环境是人类赖以生存和发展的物质基础，内,分泌腺所分泌的激素对整个机体的生长、发育、,代谢和生殖起着调节作用，是机体健康的重要保,障。人类在漫长的进化过程中，形成了对生态环,境适应和依存的关系，环境与内分泌系统处于一,个动态平衡之中。然而，自18世纪以来，随着世,界人口剧增与科技革命，使人类文明具备了影响,全球环境的能力，人们对自然资源恣意掠夺，使,生态环境遭到了毁灭性的破坏；人类创造的对环,境的有害物质在数量上和潜在毒性上都大大超过,了自然的消解能力,这些有害物质被排入大气、,水体、土壤等环境,介质中，可直接作用于体，,或借助食物链不断富集，最终进入人体，对人,类健康包括内分泌系统产生潜在的危害。越来,越多的调查研究结果表明，全球性的、日益增,加的环境污染与人类多种疾病的发生及发展密,切相关。最新的研究显示，,排入环境的某些污,染物，即使在很低的水平，也能对人类及野生生物的内分泌系统产生灾难性的后果，且影响范围极为广泛，能在生命的全过程损伤内分泌系统结构及功能,.,人类的环境，包括化学、物理、生物因素等构,成的自然环境和经济、职业、文化、教育、行为,等构成的社会环境，其有害因素能够长期,地、综,合地作用于人体，干扰整个内分泌系统，危害人,体健康。越来越多的调查研究结果表明，长期接,触化学、物理污染因素可影响生殖机能，导致性,欲降低、不良妊娠结局、不孕不育、后代的畸形,与肿瘤等。,社会行为因素对人类内分泌系统功能,也起到重要的作用，,如 父母吸烟或酗酒可导致胎,儿出生缺陷和智力低下;长期精神紧张则可引起女性排卵异常或闭经，,第一节 环境化学污染物质对内分泌功能的影响,案例1-1,环境污染精子浓度降低 敲响人类“绝种”警钟,当时间进入2027年，人类不知何故丧失了生育,能力，已经18年没有一个新生儿出世了。人类社,会陷入了恐慌和混乱之中这就是美国科幻片,人类之子为我们描述的情景。提前敲响人类,“绝种浩劫”警钟的还有美国作家西奥科尔伯恩，,他在我们被窃走的未来一书中警告，不孕症,可能成为一种广泛的流行病，到21世纪中叶，男人有可能完全失去生育能力，使人类在一代人,的时间里灭绝。,问题,1.,这一切真的要发生吗？,2.造成人类在一代人的时间里灭绝的原因是什么?,一、环境中的内分泌干扰物,近年来科学家们研究发现一种称之为外源性内分泌干扰化学品（Endocrine Disruptors Chemical,EDCs）或环境内分泌干扰物（Environmental Endocrine Disruptors，EEDs）的化学物质正悄悄地侵蚀人类和一切生物体，干扰生物体内维持自稳及调节发育过程，引起生物逐渐雌性化、生殖能力降低，危及人类健康与生存。科学家们,发现,，在发达国家有20%左右的夫妇不育，资料显示90年代以来，男子的精子逐年减少，精液量在过去50年内减少了30%；此外，患隐睾、阴茎发育不良,或异常、,尿道下裂和睾丸癌的病人明显增加；患乳腺癌、,子宫癌及子宫内膜疾病的女性也明显增多，这一切均与,EDCs,有关。,美国环保局,(Environmental Protection Agency,EPA),内分泌干扰物审查和试验咨询委员会（,Endocrine Disruptor Screening and Testing Advisor Committee EDSTAC,）将环境内分泌干扰物定义为：干扰生物体内维持自稳及调节发育过程中激素的产生、释放、代谢、结合、排泄、交互作用的外源性物质。这些物质能够模拟、强化或抑制激素作用，在某些情况下，可能引发组织或器官增生和肿瘤。简单的讲，内分泌干扰物是扰乱激素平衡而且能够对人或动,以及其后代产生有害作用的物质。,由于环境内分泌干扰物污染范围广,影响大,时,效长，直接威胁人类的生存，因此，它成为21世,纪的全球主要环境问题之一,。（,继臭氧层破坏、,温室效应之后,环境激素又是一严重的全球性环境,公害问题,属第三代环境污染物）,二、内分泌干扰产生的效应及机制,1、内分泌干扰产生的效应,人体的内分泌系统是一个复杂的系统，包括大,脑及体内有关的器官和组织。具体说包括人体的,脑垂体、松果体、下丘脑、肾上腺、卵巢、睾丸,胰岛、甲状腺、甲状旁腺等。所有这些器官和,组织都向血液中分泌各种激素。这些激素,的作用就是调节各种组织的生长、发育和调节,其功能，并协调各种代谢过程。人类可通过消,化道、呼吸道、皮肤接触等途径暴露于环境内,分泌干扰物。人工合成的脂溶性化合物大多具,有环境内分泌干扰物效应,它们能在人体脂肪组,织中长期滞留，每个人都可能由于以往的暴露,或正在摄入而承受一定的环境内分泌干扰物负,荷。当体内蓄积的环境内分泌干扰物在应激,（包括某些疾病）、妊娠及营养不良时，就从,脂肪组织中释放出来进入血液，并可能引相应,的生物学效应。目前大量的研究表明内分泌干,扰物在动物生殖和发育、神经、免疫、致癌和生,态等方面存在潜在的危害效应。,（,1,）生殖和发育效应：对人类而言，由于母亲,食用了被污染的鱼或其它食物产品，其婴儿在未,出世前就暴露于多氯联苯（,PCBs,）、,DDT,和其,他的污染物，导致新生儿体重降低和孕妇妊娠期,缩短，并且会并发智商和记忆缺陷问题。在日本,Yushoh,和中国台湾,Yu-Cheng,，出现了婴儿出生,前后意外接触到被,PCBs,和二恶英,(PCDFs),污染的,米糠油，导致他们出现了不同的发育缺陷。,此外动物实验研究显示实验动物在发育期间暴,露于不同浓度的某种内分泌干扰物（如滴滴涕、,甲氧氯、,PCBs,、二恶英、双酚,A,、辛基酚、等）,能产生生殖道的结构和功能异常。许多野生动物,研究显示，生殖和发育异常与暴露于环境中的污,染物有关。这些污染物中有些是内分泌干扰物。,通过观察那些暴露于污水处理厂和造纸厂排水以,及北美五大湖被污染水中的鱼也可以发现生殖和,发育上的异常。观察到的效应包括，暴露于,污水处理厂排水的虹鳟鱼出现雌雄同体现象；,五大湖区虹鳟鱼和鲑鱼的卵和鱼苗的死亡率增,加；五大湖区鲑鱼的甲状腺增生；苏必利尔湖中,暴露于周围造纸厂废水的鱼类其血浆中性类,固醇浓度发生改变，卵和生殖腺减小，性成熟期,延迟。实验室通过对那些从排水和被污染的水中,发现的特定内分泌干扰物进行实验，得到了与那,些野外观察的现象相一致的效应。,此外还有一些流行病学调查和研究也反映了内,分泌干扰物的生殖和发育效应。,Shanna,用多元线,形回归模型总结了,61,篇有关精子计数的报告，指,出在控制了年龄、地区平均精子密度、发表年,代、检测方法及志愿者体质等多种混杂因素后，,美国和欧洲的确存在精子数目明显下降的趋势。,美国及欧洲一些国家的人群的生态学调查显示，,在过去,2050,年中，男性出生比例有不断下降的,趋势；另一生态学研究表明，隐睾症与杀虫剂使,用存在生态相关性。在西班牙的,Granada,省，隐睾,症的人群现患率以地中海沿岸农业密集地区为,高，且与有机氯农药使用程度及使用时间相关，,高暴露地区与无暴露地区的相对危险度为,OR=2.32,（,95%CI,：,1.256-4.29,）。在丹麦开展的,职业病例对照研究，调查了,6,177,名隐睾症病例和,23 273,名对照，结果发现从事养殖业的妇女其,儿子患隐睾症的危险显著高于对照（,OR=1.67,，,95%CI,：,1.142.47,）。此外，发育时期对内分泌,干扰物最为敏感：人类在发育过程中，机体对内,分泌环境改变的感受性特别灵敏，所以处于性分,化及性成熟过程中的动物常被选用作为实验对,象。在生殖分化过程中几乎同步或稍稍延后出现,中枢神经系统的性分化进程。虽然在整个生长发,育过程中生殖分化及中枢神经系统的性分化仅占,很小的时段，但对整个生命过程具有决定性意义,.,在整个性分化过程中，性激素起着决定性作,用。内分泌干扰理论认为，基于性分化过程中神,经内分泌器官对激素作用的高度敏感性，因此只,要有相对少量低效的外源性内分泌干扰活性物质,的存在，就可能作用于靶器官而影响性分化过程,.,这种微妙的影响同时机有很大的关系。,在最关键,的灵敏时段，往往微不足道的外源性内分泌干扰,物，就可引发永远的遗憾。,这种微妙的影响还可,能导致某些潜在效应，其后果可能要经历一个长,的潜伏期才会爆发出来，,如在个体成年期并进入功能表达阶段后才会显现,出来。这种迟发性毒性效应的典型例证就是已烯,雌酚引起的子代青春期发作的阴道腺癌。,环境暴露的不稳定性和人群的遗传学基础差,异，给环境暴露与生殖发育障碍之间的因果关系,的确证带来了非常大的难度。也有一定数量的研,究结果与上述结论不一致，引发争论在所难免。,但是已有的资料在很大程度上支持环境污染与人,类和野生动物生殖发育障碍密切相关，并已引起,了社会的广泛关注。,环境因素或外源性因子导致,的疾病，一般需要流行病学调查、动物实验（毒,性,.,毒理研究）和临床学三者共同确证才能最后,认定，最好还要有分子生物学方面的认证，从基,因遗传学上进行解释与阐明。,（,2,）外源性化学物质对性腺轴系统的干扰效,应：当前，对内分泌干扰的研究主要集中在外,源性化学物质对性激素的作用，以及对松果体,-,下丘脑,-,垂体,-,性腺轴调节功能的影响。在正常情,况下，男女性的性腺功能调节方式各有不同，女,性的性腺功能调节由于有月经和妊娠等生理现象,参与，因此调节的机制和过程更为复杂。,松果体,-,下丘脑,-,垂体,-,性腺轴的功能调节中，松果,体在性腺发育和青春期性腺活动中可能位居中枢,调控地位。在中枢神经的作用下，下丘脑可以分,泌约,10,多种下丘脑激素，而且多数为多肽类激素,.,例如促性腺激素释放激素,(GnRH),和垂体促性腺,激素,(LH,、,FSH),的合成与分泌可能受松果体激素,的调节,松果体的激素分泌细胞又受,-,肾上腺能,神经支配。松果体可合成和分泌褪黑素、吲哚类,生物胺、去甲肾上腺素、血清素、组织胺、生长,抑素,.,催产素与松果素等许多神经递质性活性物,质,.,在下丘脑和其他脑组织中广泛分布有促性腺激,素释放激素，,GnRH,可促进垂体的,FSH,和,LH,分,泌，是发挥性功能效应最重要的激素，严格而,言，许多影响中枢神经系统的药物，如巴比妥,类、苯二氮卓类、氯丙嗪、吗啡、普鲁卡因、咖,啡因、麻黄碱、多巴胺、芸香碱、毒扁豆碱、阿,托品等都会在不同程度上影响内分泌功能。,氯丙嗪作为中枢神经系统的强安定药，可以通,过阻断下丘脑下部的多巴胺受体而干扰内分泌功,能，它会减少催乳素抑制释放因子、卵泡刺激素,释放因子及黄体生成素释放因子的分泌，导致催,乳素分泌增加，,使促性腺激素分泌减少。另外，它还抑制促肾上,腺皮质激素的释放，减少肾上腺皮质激素的分,泌。,（,3,）免疫学效应：一些内分泌干扰物会影响实验,动物免疫系统。暴露于有机氯（多为,PCBs,）,的来自五大湖的鸟成为内分泌干扰物抑制免疫系,统的证据。而且食用了受到,PCBs,污染的海鱼的海,豹会出现先天性和获得性,免疫反应的抑制,。这些,免疫抑制被认为是在类似污染的水里海豹发生细,菌性和病毒性传染病增加的原因。而对于人类，,内分泌干扰物对免疫系统影响的数据还不能充分,的支持明确的结论,.,那些认为受到内分泌干扰物,影响的人群的,自身免疫,问题需要被研究，特别是,那些母亲在怀孕期间暴露于内分泌干扰物的子女,们更要被重视。包括不同寿命阶段的群体研究应,该使用与临床相关的免疫学测试，以此说明内分,泌干扰物暴露和免疫系统损伤之间的关系。,4,）致癌效应：老鼠除了在胚胎期暴露于,DDT,的,一些生物测试外，在哺乳期和断奶之后并没有发,现明显的致癌效应，围产期暴露于内分泌干扰物,的致癌效应并没有在其它实验动物或人类实验中,被评估。,虽然一些内分泌干扰物（例如毒杀酚、,DDT,、四,氯二苯并,-,p,-,二恶英和异狄氏剂）与某些特别的实,验动物物种的甲状腺、脑垂体或者肾上腺肿瘤有,关，但是通常出生之后内分泌干扰物暴露没有显,示会引起生殖或者其它内分泌器官的肿瘤。当然,动物模型的适用性可能还存在问题。对目前可获,得的研究进行的评估不能支持乳腺癌与暴露于,DDT,、,TCDD,和,PCBs,有联系。需要恰当设计并,进行病例对照和回顾性的群体研究，以此证明内,分泌干扰物和人类各种癌症之间存在或者缺乏关系,.,（,5,）生态效应：环境中的内分泌干扰物或许已,经导致一些野生动物在数量方面的下降，其中包,括五大湖的鱼和鸟、,Apopka,湖的幼短吻鳄，并,且也可能是导致包括美国的貂、欧洲的河獭和欧,洲水域的海上哺乳动物在内的疾病和畸形的原,因。带有这样污染物的动物，与近亲交配在一,起，可能使濒危的佛罗里达豹的繁殖率变得更,低，使五大湖海龟的胚胎死亡率增加。在五大湖,区的全部生物学群落，从浮游生物到最高级的食,肉动物，在过去,100,年中已经经历了非常大的变,化。变化起因于外来物种的侵入、污染、捕鱼以,及其它因素。内分泌干扰物已经影响到个体种,群数量的大小，而且可能也已经导致在种群结构,方面的变化，但是很难从量上把握各种不同的因,果关系。有流行病学和实验证据表明一些持久,的、有生物蓄积性的内分泌干扰物,也即POPs）,会对野生动物的数量产生不利的影响，但是其主,要效应是否是由于激素行为改变引起的还需进一,步证明。,我们仍然需要长期研究受到内分泌干扰物暴露,影响的种群，以评估这些化学品在改变种群大小,.,年龄结构和动态平衡方面的影响。观测和实验应,该联系在一起，研究化学暴露和生物行为与节律,的重要改变，从而理解化学暴露是怎样长期的影,响自然体系的生态属性。,激素或内分泌干扰物的适时作用对生物发育,是决定性的。在发育早期生物性器官和大脑特定,的中 枢受性激素控制。EDCs的干扰会导致器官,永久性缺陷和功能障碍。,在成熟的生物体内，激素参与了精液形成和雌,性性周期的调节，内分泌干扰物刺激 或阻碍器,官的功能。这些效应与动物暴露于内分泌干扰,物期间所处的发育期有重要关系。另外,，,地球,生物并不是暴露在单一的环境化学品中,，,对于,内分泌干扰化学品而言，它们的混合效应还不,清楚。,4环境内分泌干扰物对内分泌系统的作用的机,制,外源性物质对激素受体正常结合作用的协同,和拮抗是内分泌干扰物作用的基本机制。,正常的激素从特定的靶组织通过与细胞内受体,或膜受体的直接反应表现其对外界的反应。与,受体的自然配位是激素功能中关键的一步。细,胞内激素的核受体如性类固醇、肾上腺类固醇,.,甲状腺激素、维生素D和视黄醇的受体，通过与,特异DNA序列的反应，调节基因的转译，合成,新的信使RNA，加工、翻译以产生新的蛋白质,.,如图1-,2,、1-,3,内分泌干扰物对雌激素效应的影响,机制所示，内分泌干扰物通过模拟天然激素与,受体结合或通过抑制自然的结合而改变这一过,程,.,其基本机制主要包括以下几种：,（,1,）与受体直接结合：内分泌干扰物模仿天然,激素，与激素结合位点结合，形成配体,-,受体复,合物，配体,-,受体复合物再结合在,DNA,结合区的,DNA,反应元件上，从而影响人和动物的生殖能,力。,（,2,）与生物体内激素竞争靶细胞上的受体：通,过竞争的结果，内分泌干扰物与靶细胞上的受,体结合，减少受体对天然激素的吸附或阻碍天,然激素,与受体结合，从而减少了天然激素的作,用。,（,3,）阻碍天然激素与受体的结合：天然激素与,受体的结合受内分泌干扰物的阻碍，进而影响激,素信号在细胞、器官、组织的传递，导致机体功,能失调。,（,4,）影响内分泌系统与其他系统的调控作用：内分泌系统紊乱使其他系统受到伤害，从而引,发致癌性、免疫毒性、神经毒性以及生殖毒性等,.,（,5,）协同作用：内分泌干扰物的种类繁多，存,在各种化学物质的协同作用，内分泌干扰物联合,作用的强度远远高于单独作用的强度，且它们之,间的协同作用因组合的不同而不同，致毒机理十,分复杂。,5.,环境内分泌干扰物的作用特点：,（,1,）化学合成物对胚胎、胎体和新生幼儿的影,响,与其对成体的影响可能是完全不同的，发育,和成长中的胚胎与幼体非常脆弱，对环境内分泌,干扰物高度敏感；,（,2,）化学合成物产生的内分泌干扰效应，常常,出现在下一代身上，而不一定表现在直接受污染,的当代动物身上；,（,3,）对正处在发育期阶段的生物体而言，化学,合成物的作用时机是决定性的，它决定着生物体,的特性和未来的发展潜能；,（4）虽然受到化学合成物的关键性污染发生在,胚胎发育期，但明显的效应可能要到成年以后才,会表现出来。,第二节 环境物理因素对内分泌功能的影响,一、电离辐射,物理因素对男性生育力影响较大的首推电离,辐射的危害,.,性腺对电离辐射非常敏感，小剂量,直接照射性腺，能引起遗传性损伤，出现功能性,改变。一定强度的电离辐射会损害睾丸的生精功,能，造成精少甚至无精。妇女则出现月经机能障,碍，月经周期延长，血量减少。小剂量长期作用,可引起生殖细胞的基因突变。大较剂量照射,（,600CGY800CGY,）则可出现不可逆的损伤，,影响卵子的正常发育，甚至失去生殖能力，导致,不孕或胎儿畸形。常见畸形有发育迟缓、小头,.,小眼球症、脑积水，智力低下。放射性物质如进,入体内，可通过乳汁排出，进入婴儿体内。,此外辐射的剂量决定了雄性生精功能受损的程,度，以及恢复需要的时间。接受次小剂量辐,射（,200CGY300CGY,）后即可造成生精障,碍，而较大剂量则可使造生精功能完全丧失,。,二、电磁辐射,近年来，国内外媒体对电磁辐射对机体的,有害的报道一直未断：意大利每年有,400,多名儿,童患白血病，专家认为病因是受到严重的电磁,污染；美国一癌症医疗基金会对一些遭电磁辐,射损伤的病人抽样化验，,结果表明在高压线附近工作的人，其癌细胞生长,速度比一般人快,24,倍；我国每年出生的,2000,万儿,童中，有,35,万为缺陷儿，其中,25,万为智力残缺，,有专家认为，电磁辐射是影响因素之一。,经实验研究和调查观察结果表明，电磁辐射对,健康的危害是多方面的，复杂的，主要危害表现,如下：,1.,对中枢神经系统的危害,2.,对机体免疫功能的危害,3.,对心血管系统的影响,4.,对血液系统的影响,5.,对生殖系统和遗传的影响,6.,对视觉系统的影响,7.,致癌作用,三、热辐射,精子成熟所需要的环境比体内温度低,3-4,度。,因此，任何一种持续的热暴露都将对精液质量,造成负面影响。有报道在夏季人类精子的数量,和质量都比冬季要差，仅精子的密度就较冬季,减少,30%,左右，这可能也与温度的影响有关。,此外，职业性的热辐射，如锅炉工和烤面包师等,长期坐办公室和驾驶交通工具的人，裤子和内裤,的款式、松紧程度及面料等均可通过影响阴囊温,度和阴囊周围空气流通而影响到睾丸激素的分,泌、生精功能和精子的质量。,第三节 其他环境因素对内分泌功能的影响,一、吸烟、酗酒、吸毒,有研究表明香烟焦油成分中的苯并芘，能引,起人体内染色体畸变和基因突变，从而造成遗传,物质的退化，,在小鼠试验中，苯并芘和二甲基苯并蒽能影响,黄体的生成，并引起卵细胞破损。在烟草中的,重金属，镉的含量较高，它能在卵巢组织中蓄,积，在大鼠试验中，镉能影响卵母细胞的减,数分裂,，,也是一种致畸物。烟雾中的多环芳烃,对卵巢具有较大的毒性，研究发现它在颗粒层,黄体细胞中作为一,种,DNA,加合物，导致,DNA,损,伤。,另外，吸烟能使母体雌二醇、雌三醇和促,性腺激素的,水平下降，影响胎儿的正常的激素,调节，导致胎儿的发育障碍。,对男性而言，烟草中的某些毒物会干扰生殖,内分泌功能，影响精子的数目、活动力和形态。,也有研究表明吸烟或被动吸烟能降低血液中睾酮,的水平,.,现代医学证明，酒精能导致人体多种激,素功能紊乱，如促性腺激素、睾酮等。大量饮酒,后，男子的睾酮合成减少，精子的生成发生障碍,.,另外，酒精可以使血液中的儿茶酚胺增加，影响,血流量，而,血流对睾丸温度起重要的调节作用；,同时血流量减少还可导致睾丸生精细胞的结构发,生改变，曲细精管变细,甚至纤维化，,最后发生睾丸萎缩，外形变小，并可有胡须及阴,毛脱落，或乳房增大、嗓音变细等第二性征女性,化的改变。,此外有报道男性吸毒可出现阳痿、血中睾酮,水平下降、生精抑制、射精无能等症。,二、营养因素,蛋白质和维生素缺乏：将可以导致男性生育,功能肯定性影响。维生素,A,缺乏可以导致精子生,成能力减弱，维生素,E,缺乏可以导致睾丸损害。,三、精神因素,精神紧张是通过对神经内分泌系统的作用而,影响其他内分泌腺体的功能。由于神经内分泌,系统在调控其他内分泌腺体功能过程中起着重,要的作用，故对神经内分泌平衡的任何干扰均,可能对其他内分泌腺体功能产生不利影响。,如：情绪低落、精神状不佳等，男性睪丸的生,产精子功能会发生混乱，精子数量可能因此锐,减，严重者，有不孕的隐患。,第四节 内分泌干扰物的研究方法及发展方向,目前，研究人员把注意力集中在那些已被报,道可以引起生殖改变、发育缺陷、神经行为异,常、免疫缺损、致癌和对生态有影响的化合物,上。为了评估它们对内分泌系统干扰的效应，需,要运用适当的研究方法筛选并确定有激素或抗激,素活性的化学物质，研究与这些化学物质相关的,对脊椎动物（人类、实验室动物和野生动物）的,成体和器官的作用，考虑这些作用是否能归因于,这些化学物质的内分泌干扰特性和在环境中的暴,露。,美国环境保护局内分泌干,扰物筛选测试咨询委员会（,endocrine disruptor screening and testing advisor committee,EDSTAC,）对环境内分泌干扰物识别与评价方法,提出了如下建议。,第一阶段 筛选（,screening,）推荐方法,:,（,1,）体外实验 雌激素受体结合,/,报告基因实,验,;,雄激素受体结合,/,报告基因实验；组织碎,片的类固醇激素合成实验。,（,2,）体内实验 啮齿类动物,3,天子宫增重试验；,20,天青春期雌性啮齿类动物实验；,啮齿类动物,57,天,Hershberger,实验；（鼠体,Hershberger,分析试验是一项通过测定经阉割的,幼体雄性大鼠的五种副性器官和组织的暴露反应,来检测雄性激素激动剂或拮抗剂的体内试验方,法）蛙蜕变实验；鱼性腺复发实验。,2.,替代方法,（,1,）体外实验 胎盘芳香化酶实验,(2,）体内实验 改良啮齿类动物,3,天子宫增重实,验；,14,天雄性成年啮齿类动物实验；,20,天雄,性青春期啮齿类动物实验,.,（第二阶段 测试（,testing,）,推荐方法 两代哺乳动物生殖毒性实验；鸟生,殖实验；鱼生命周期实验；糖虾生命周期实,验；两栖类动物发育与生殖实验。,3,、基本研究方法,确定化学品的内分泌干扰影响的研究方法主要,包括体内法（,in vivo,）和体外法（,in vitro,）两大,类。前者是在不破坏生物体条件下对化学品的内分,泌作用进行测定，而后者是对这种作用在细胞和分,子水平上的分析。体内方法大多数是以哺乳动物为,对象进行的，为了研究性激素作用，,通常就研究它们对老鼠生殖道的影响。一般可以,检测到因雌激素引起子宫重量的增加。抗雌激素,或雄激素的影响可以通过检测对正常诱发效应的,抑制。此外，也可以进行专门的性激素实验和各,种标准测试方法如生殖性和发育性研究等。因为,激素对生殖发育的作用特别显著，因此任何由化,学品引起的与性激素相似的干扰都可以检测到。,对产卵脊椎动物如鸟、鱼、爬行动物和两栖动物,等，可以通过卵黄蛋白前体,物,-,卵黄蛋白素的存,在来确定内分泌作用。,正常情况下，,只有性成熟（成体）雌性动物在雌二醇（强,力求偶素）控制下才能产生卵黄素。它由肝产生，,分泌到血液中，最后被卵细胞吸收。而具有雌激素,效应的化学品可以在未成熟的雌性或雄性动物个体,内产生卵黄素。目前，引入卵黄素合成是对鱼和两,栖动物普遍采用的实验方法。另外，激素状况、对,内分泌自我调节的影响也是体内方法需要考虑的因,素。但是传统技术在区分内分泌干扰和其他毒性作,用方面还很困难。,体外方法包括细胞、细胞提取物和细胞重组体,系的研究。化学品对激素受体的亲和力通过受体键合研究来确定。对受体中介的雌激素效应而言，,键合到适当的受体是必须的。如果某种物质与激素,受体键合，受体也就被占据，阻断体内自身激素与,受体的键合，导致抗激素效应。在这种方法中，非,受体中介的化学品相互作用不能被检测到。某些性,激素敏感细胞（例如在,E-,筛选实验中用到的人体乳,腺癌细胞,WCF-7,）受到雌激素效应的化学品干扰,作用，加速了细胞增殖。这一现象可以被检测到。,此外，在激素敏感细胞内特殊蛋白质在激素影响下,的合成也是检测手段之一。在这方面使用新的分子,生物学技术开发了指示基因系统,它被插入人体、,动物或酵母细胞中，再被键合到激素受体上的化学,物质激活，指示基因的产物很容易检测。为了确定,鱼体内雌激素干扰化学品，常采用其原生肝细胞，,同体内方法一样。也要测定卵黄素。,一些实验方法和体系已经发展到可以测试外源,性和天然产生物质的潜在激素活性。,二、环境内分泌干扰物的研究特点和发展方向,根据对,USEPA,网上登记的环境内分泌干扰物相,关 研究项目的统计分析，可以看出目前国际上在,内分泌干扰物研究方面的几个特点：涉及的内分,泌干扰物主要包括杀虫剂、雌激素,/,抗雌激素、烷,基酚、有机氯化合物、二恶英、植物雌激素、,酞酸酯、雄激素,/,抗雄激素、重金属（汞、铅、,镉,),、除草剂、杀真菌剂、,PCBs,和,PAHs,；研究,的终端包括生殖系统、致癌性、神经系统和免疫,学；研究的激素包括性类固醇、生长素、缩氨酸,激素、垂体激素、肾上腺激素和甲状腺激素；,受试生物体包括人类、鱼类、啮齿动物、无脊椎,动物、鸟类、哺乳动物、两栖动物和爬行动物；,受试生物体生长阶段包括成年、胚胎、幼体、青,春期和多代；,研究范畴包括模拟研究、分析测试研究、方法学,研究；（具体涉及的研究内容包括毒物鉴定、暴露鉴定、暴露与风险模型、多学科研究、,指示物种和数据库开发等；研究方法包括体内法、,体外法、实验室研究、现场研究、流行病学研究,和计算机研究等；研究目的主要在于人类健康影,响、生态影响和暴露评价；研究层次涉及生理,学、生物化学、基因表达、组织病理学、流行病,学、行为学、酶学、转基因模拟和计算机模拟。,上述情况表明，对内分泌干扰物的研究正在蓬勃,开展。目前尚没有普遍有效的实验系统和方法，研,究的重点仍然是环境内分泌干扰物的鉴定、内分泌,干扰影响的定性和风险评估。未来要进一步研究影,响内分泌干扰的参数，研究的对象要扩展到更多的,物种。至于对人和动物的风险评估，有必要了解整,体的污染状况、内分泌干扰物的环境行为以及对人,和动物的影响，而且干扰机理以及各种干扰物的相,互作用必须研究清楚。目前，对单一污染物的风险,评估模型已经建立，但还需要研究新的模型和评价,概念解决多种污染物的复合效应。另外对环境内分,泌干扰物的处置和处理问题也迫在眉睫。毫无疑,问，在这些研究领域中，环境化学研究有着相当重,要的地位，并将发挥基础与关键性的作用。,对导致重大出生畸形和残疾的环境因素及其致畸机,制的研究。许多环境污染物具有生殖毒性，环境,污染物的生殖毒性问题是人类急待解决的重大课,题。今后将加强研究生殖毒性的生物标志物，研究,生殖毒性的危险度评定，识别具有生殖毒性的环境,污染物质。,