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,考纲,考情,三年,14,考高考指数：,1.,从生物材料中提取某些特定的成分,2.,蛋白质的提取和分离,3.PCR,技术的基本操作和应用,4.DNA,的粗提取与鉴定,三年,考题,2014,年,(3,考,),：山东,T34,，江苏,T16,、,T30,2013,年,(9,考,),：山东,T34,，江苏,T4,，江苏,T22,，广东,T28,，,北京,T5,，安徽,T31,，海南,T30,，四川,T4,，四川,T10,2012,年,(2,考,),：山东,T34,，江苏,T18,考情,播报,1.,考查内容：主要考查,DNA,的粗提取与鉴定、,PCR,技术的应用、蛋白质的提取和分离、植物有效成分的提取等知识。,2.,考查方式：通常以多知识点结合的方式考查综合分析问题的能力，如考查植物有效成分的提取时，会结合微生物的培养与应用、植物组织培养等知识，考查蛋白质的提取和分离时会结合微生物的培养与应用、酶的研究与应用等知识。,3.,考查题型：江苏生物单科卷中多以选择题的形式出现，广东、四川卷中以选择题的个别选项的形式出现，其他省份的理科综合卷多以一道非选择题的形式出现，属中低档题。,【,知识梳理,】,一、,DNA,和蛋白质技术,1.DNA,的粗提取与,鉴定：,(1),基本原理：利用,DNA,与,RNA,、蛋白质和脂质等在,_,方面的差异，提取,DNA,，去除其他成分。,(2)DNA,的粗提取原理。,DNA,和蛋白质等其他成分在不同浓度的,NaCl,溶液中,_,不同。,在,NaCl,溶液浓度为,_,时，,DNA,的溶解度最小。,DNA,不溶于,_,溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精溶液。,物理和化学性质,溶解度,0.14,mol/L,酒精,(3),主要步骤及注意事项：,实验材料的选取,破碎细胞,选用,DNA,含量相对较高的生物组织,动物材料更容易,加入蒸馏水可使,_,加入洗涤剂可,_,加入,NaCl,可,_,红细胞吸水破裂,瓦解细胞膜,溶解,DNA,获取含,DNA,的滤液过滤，取滤液,去除滤液中的杂质,DNA,的析出利用,DNA,不溶,于,_,的原理,，析出,DNA,。,DNA,的鉴定,控制,_,的浓度去除杂质,利用嫩肉粉中的,_,分解蛋白质,利用,_,使蛋白质变性,方法：,DNA,溶液中加入,_,试剂，沸水浴加热,5 min,现象：溶液变,_,NaCl,溶液,蛋白酶,高温,冷却的酒精溶液,二苯胺,蓝色,2.,多聚酶链式反应扩增,DNA,片段：,(1)PCR,原理。,DNA,的热变性：,PCR,环境：,一定的,_,中。,缓冲溶液,变性,冷却,PCR,条件,过程控制：控制,_,使,DNA,复制,在体外反复进行。,DNA,母链：,PCR,模板,酶：,_,引物：分别与,_,相结合,原料：四种,_,Taq DNA,聚合酶,两条模板链,脱氧核苷酸,温度,(2)PCR,过程：,变性,复性,延伸,(3)PCR,结果：两引物间固定长度的,DNA,序列呈,_,扩增,(,即,2n),。,条件：温度上升到,_,以上,实质：双链,DNA_,为单链,条件：温度下降到,_,左右,实质：两种,_,与两条单链,DNA,结合,条件：温度上升到,_,左右,实质：在,_,的作用下，合成子链,90,解聚,50,引物,72,Taq DNA,聚合酶,指数,3.,血红蛋白的提取和分离：,(1),常用方法,(2),实验步骤：样品处理,(,红细胞的洗涤,_,的释放分离血,红蛋白溶液,),粗分离,_,纯度鉴定。,_,法：依据,_,的大小分离蛋白质,_,法：依据,_,、分子本身大小、形状,的不同分离蛋白质,凝胶色谱,相对分子质量,电泳,带电性质差异,血红蛋白,纯化,二、植物有效成分的提取,1.,提取玫瑰精油实验：,(1),方法：,_,法。,(2),实验流程：,鲜玫瑰花,_,油水混合物,玫瑰油 除水 分离油层,水蒸气蒸馏,加入,_,NaCl,水蒸气蒸馏,2.,提取橘皮精油的实验：,(1),方法：一般采用,_,法。,(2),实验流程：,石灰水浸泡漂洗,_,过滤静置再次,_,橘皮油,压榨,压榨,过滤,3.,胡萝卜素的提取：,(1),胡萝卜素的性质,(2),胡萝卜素的提取,(3),胡萝卜素,的提取流程：,胡萝卜粉碎,_,萃取,_,浓缩胡萝卜素,(4),胡萝卜素的鉴定：,_,法。,不溶于,_,微溶于乙醇,易溶于,_,等有机溶剂,提取方法：,_,法,石油醚最适宜作,_,水,石油醚,萃取,萃取剂,干燥,过滤,纸层析,【,速记卡片,】,1.DNA,的粗提取与鉴定：,(1)DNA,的溶解性：,DNA,在,0.14 mol/L NaCl,溶液中的溶解度最小；,DNA,不溶于酒精溶液，而某些蛋白质则溶于酒精溶液，据此也可使,DNA,和蛋白质分离。,(2)DNA,的耐受性：,DNA,对酶、高温和洗涤剂都具有较好的耐受性。,(3)DNA,的鉴定：,DNA,在沸水浴的条件下，遇二苯胺会被染成蓝色。,2.PCR,技术：,(1)PCR,原理：,PCR,反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供,DNA,模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的,DNA,聚合酶。,(2)PCR,过程：通过控制温度使,DNA,复制在体外反复进行，每一个循环包括变性复性延伸。,3.,血红蛋白的提取和分离：,(1),凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。,(2),电泳法：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。,4.,植物有效成分的提取：,(1),植物芳香油的提取方法：压榨法、蒸馏法和萃取法等。,(2),芳香油的性质：不溶于水，易溶于有机溶剂，因此可用有机溶剂作为提取剂来提取芳香油。,(3),胡萝卜素的性质：是橘黄色结晶，从胡萝卜中提取胡萝卜素，常用亲脂,(,水不溶,),性有机溶剂,(,或有机溶剂,),作萃取剂。,(4),胡萝卜素的提取方法：萃取法。,(5),胡萝卜素的鉴定：纸层析法，在鉴定过程中需要用标准样品对照。,考点一,DNA,和蛋白质技术,1.DNA,与蛋白质在物理化学性质方面的差异：,比较项目,DNA,蛋白质,溶解性,2 mol/L NaCl,溶液中,溶解,析出,0.14 mol/L,NaCl,溶液中,析出,溶解,酒精溶液中,析出,溶解,比较项目,DNA,蛋白质,耐受性,蛋白酶,无影响,水解,高温,80,以上,变性,不能忍受,60,80,的高温,鉴定方法,在沸水浴条件下与,二苯胺反应呈蓝色,与双缩脲试剂,反应呈紫色,2.,比较细胞内,DNA,复制与体外,DNA,扩增,(PCR),：,项目,DNA,复制,PCR,不,同,点,场所,细胞内,细胞外,能量,ATP,提供能量,不需,ATP,提供能量,酶,解旋酶、,DNA,聚合酶,耐高温的,TaqDNA,聚合酶,是否有,转录,伴有转录，产生引物,无转录，需加入,两种引物,项目,DNA,复制,PCR,不,同,点,特点,边解旋边复制，,半保留复制,体外迅速扩增,循环次数,受生物体自身控制,三十多次,缓冲溶液,不需要,需要人为控制,设备,无,严格控制温度变化,的温控设备,项目,DNA,复制,PCR,相,同,点,原料,四种脱氧核苷酸,复制原理,严格遵循碱基互补配对原则,模板,DNA,为模板,引物,都需要与模板相结合的引物,3.,血红蛋白的提取和分离：,(1),凝胶色谱法：,蛋白质,比较项目,移动位置,移动路程,移动速度,洗脱次序,相对分子质量大,凝胶颗粒外部,短,快,先,相对分子质量小,凝胶颗粒内部,长,慢,后,(2),主要实验步骤及意义：,红细胞的洗涤：去除杂蛋白等,样品处理 释放血红蛋白：红细胞吸水破裂,分离血红蛋白：离心处理，获得血红蛋白溶液,方法：透析,目的：除去样品中相对分子质量较小的杂质,粗分离,方法：凝胶色谱法,目的：根据蛋白质的相对分子质量大小去除杂蛋白,方法：,SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳,迁移率：取决于蛋白质分子的大小,纯度鉴定,纯化,【,提分技法,】,凝胶色谱法和电泳法分离蛋白质的方法分析,(1),凝胶色谱法：只看蛋白质的相对分子质量大小，先洗脱出来的相对分子质量大。,(2),电泳法。,特点：移动速度由多种因素共同决定，包括待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同。,常用方法：,SDS-,聚丙烯酰胺凝胶电泳，带电性质和电量主要取决于,SDS-,聚丙烯酰胺凝胶颗粒，分离效果只看蛋白质的相对分子质量大小。,【,考题回访,】,1.(2013,广东高考改编,),地中海贫血症属于常染色体遗传病。一对夫妇生有一位重型,地中海贫血症患儿，分析发现，患儿血红蛋白,链第,39,位氨基酸的编码序列发生了点突变,(CT),。用,PCR,扩增包含该位点的一段,DNA,片段,l,，突变序列的扩增片段可用一种限制酶酶切为大小不同的两个片段,m,和,s,；但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切，如图,a,。目前患儿母亲再次怀孕，并接受了产前基因诊断。家庭成员及胎儿的,PCR,扩增产物酶切电泳带型示意图见图,b,。,(,终止密码子为,UAA,、,UAG,、,UGA,。,),(1),在获得单链模板的方式上，,PCR,扩增与体内,DNA,复制不同，前者通,过,解开双链，后者通过,解开双链。,(2),据图分析，胎儿的基因型是,(,基因用,A,、,a,表示,),。患儿,患病可能的原因是,的原始生殖细胞通过,过程产生配子时，发生了基因突变；从基因表达水平分析，其患病,是由于,_,_,。,【,解题指南,】,(1),题干关键信息：突变序列的扩增片段可用一种限制酶酶切为大小不同的两个片段,m,和,s,，但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切。,(2),题干隐含信息：不同片段经电泳后位置不同。,(3),图中隐含信息：胎儿既有正常序列，也有突变序列。,【,解析,】,(1)PCR,是体外扩增,DNA,的方式，通过高温使双链解开，体内,DNA,的复制则是通过解旋酶使,DNA,双链解开。,(2),由题意可知重型,地中海贫血症是隐性遗传病，突变后的序列可以被剪切成,m,和,s,两个片段，而正常序列无法被剪切，因此母亲、父亲、患儿和胎儿的基因型分别为,AA,、,Aa,、,aa,和,Aa,。母亲和父亲的基因型为,AA,和,Aa,，生下患儿可能是因为母亲的原始生殖细胞通过减数分裂产生配子时发生了基因突变。由图可知，该突变为由模板链上的,GTC,突变成,ATC,，,mRNA,上由,CAG,变成,UAG,，因此终止密码子提前出现，使翻译提前终止。,答案：,(1),高温解旋酶,(2)Aa,母亲减数分裂,mRNA,上编码第,39,位氨基酸的密码子变为终止密码子，,链的合成提前终止，,链变短而失去功能,【,延伸探究,】,电泳法只能分离蛋白质分子吗？试分析原因。,提示：,不是。电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，该方法除用于分离蛋白质外，也可用于分离大小不等的,DNA,片段等。,2.(2015,西安模拟,),血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中,O,2,和部分,CO,2,的运输。请根据血红蛋白的提取和分离回答问题：,(1),凝胶色谱法的基本原理是根据,_,分离蛋白质的有效方法。,(2),洗涤红细胞的目的是去除,，洗涤次数过少，无法除去,；离心速度过高和时间过长会使,等一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是,。释放血红蛋白的过程中起作用的是,。,(3),洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体,(,填,“,相同,”,或,“,不同,”,),，洗脱时，对洗脱液的流速要求是,。,(4),在洗脱过程中加入物质的量浓度为,20 mmol/L,的磷酸缓冲液,(pH,为,7.0),的目的是,，如果红色区带,，说明色谱柱制作成功。,【,解题指南,】,(1),关键词：,“,洗涤红细胞,”“,离心速度,”“,释放血红蛋白,”,。,(2),隐含信息：红色区带为血红蛋白。,【,解析,】,(1),凝胶色谱法是根据蛋白质的相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。,(2),洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白等杂蛋白，如果洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是离心后的上清液中没有黄色。释放血红蛋白的过程中起作用的是蒸馏水和甲苯，其中蒸馏水的作用是使红细胞吸水破裂，甲苯可溶解细胞膜，加入甲苯能加速红细胞破裂并释放血红蛋白。,(3),洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体相同，否则会影响洗脱液的,pH,，使蛋白质的结构受到破坏。洗脱时，洗脱液的流速要保持稳定，否则将影响蛋白质的分离效果。,(4),在洗脱过程中加入物质的量浓度为,20 mmol/L,的磷酸缓冲液,(pH,为,7.0),的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的,pH,和体内的一致，进而保持蛋白质的正常形态结构；洗脱时，血红蛋白的颜色可以指示血红蛋白的位置，因此当红色区带均匀一致地移动时，说明色谱柱制作成功。,答案：,(1),相对分子质量的大小,(2),杂蛋白,(,血浆蛋白,),血浆蛋白白细胞离心后的上清液中没有黄色蒸馏水和甲苯,(3),相同保持稳定,(4),准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的,pH,和体内的一致均匀一致地移动,【,延伸探究,】,在血红蛋白的提取过程中，哪些过程能影响血红蛋白提取的纯度？,提示：,细胞的洗涤次数：次数少，不能除去血浆蛋白。,离心速度和时间：离心速度过高和时间过长，会使白细胞等一同沉淀，得不到纯净的红细胞。,透析：透析不彻底，会含有小分子杂质。,色谱柱的装填：不能存在气泡，若存在气泡，则会降低分离效果。,洗脱：洗脱液的流速要保持稳定，否则将影响蛋白质的分离效果。,3.(2015,临沂模拟,),某生物兴趣小组开展,DNA,粗提取的相关探究活动。具体步骤如下：,材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各,2,份，每份,10 g,。剪碎后分成两组，一组置于,20,，另一组置于,-20,条件下，保存,24 h,。,DNA,粗提取：,第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入,15 mL,研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。,第二步：先向,6,只小烧杯中分别注入,10 mL,滤液，再加入,20 mL,体积分数为,95%,的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。,第三步：取,6,支试管，分别加入等量的,2 mol/L,的,NaCl,溶液溶解上述絮状物。,DNA,检测：在上述试管中各加入,4 mL,二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热,5 min,，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。,材料保存温度,花菜,辣椒,蒜黄,20,+,+,+,-20,+,+,+,(,注：“,+”,越多表示蓝色越深,),分析上述实验过程，回答下列问题：,(1),该探究性实验课题名称是,_,_,。,(2),第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少,_,。,(3),根据实验结果，得出结论并分析。,结论,1,：与,20,相比，相同实验材料在,-20,条件下保存，,DNA,的提取量较多。,结论,2,：,_,。,针对结论,1,，请提出合理的解释：,_,。,(4),氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和,DNA,均不相溶，且对,DNA,影响极小。为了进一步提高,DNA,纯度，依据氯仿的特性，在,DNA,粗提取,第三步,的基础上继续操作的步骤是：,。然后用体积分数为,95%,的冷酒精溶液使,DNA,析出。,【,解析,】,本题考查,DNA,粗提取技术的原理、操作过程及分析、判断能力，从题目,实验步骤看出，该实验的课题是探究不同材料和不同保存温度对,DNA,提取量的影响。在第二步中,，为了防止,DNA,断裂，要缓缓地搅拌；从表中结果看出，由于低温抑制了相关酶的活性，,DNA,降解慢，使得相同材料在低温保存下的,DNA,提取量大；在相同条件下，蒜黄蓝色最深，说明相同条件下从蒜黄中提取的,DNA,量最大；由于氯仿密度比水大，可使蛋白质变性沉淀，而与水、,DNA,不相溶，这样可将,第三步获得,的溶液与等量的氯仿混合，静置一段时间，吸取上清液。,答案：,(1),探究不同材料和不同保存温度对,DNA,提取量的影响,(2)DNA,断裂,(3),等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的,DNA,量最多,低温抑制了相关酶的活性，,DNA,降解速度慢,(4),将,第三步,获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置一段时间，吸取上清液,【,知识总结,】,DNA,粗提取实验的相关提醒,(1),制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固。,(2),涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。,(3),两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于,DNA,的析出。,(4),两次析出,DNA,的方法：第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，使,DNA,析出；第二次是加入冷酒精溶液，因为,DNA,不溶于酒精溶液。,【,加固训练,】,1.,凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术，对高分子物质有很好的分离效果，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。请据图回答问题：,(1)a,、,b,均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是,，原因是,_,。,(2),自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部,d,位置相当于多孔板的,结构可由,替代。,(3),装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是,_,。,(4),若选用,Sephadex G-75,，则“,G”,表示,，,75,表示,。,【,解析,】,(1),用凝胶色谱技术分离各种不同蛋白质时，相对分子质量较大的物质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，所以向下移动的速度较快。相对分子质量较小的物质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，所以大分子物质先洗脱出来。,(2),制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部,d,位置相当于多孔板的结构可由尼龙网和尼龙纱替代。,(3),在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。一是在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干、露出凝胶颗粒的现象。一旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。,(4)Sephadex G-75,中,“,G,”,表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围；,75,表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水,7.5 g,。,答案：,(1)a,a,相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快,(2),尼龙网和尼龙纱,(3),气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果,(4),凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水,7.5 g,2.,科学家发现家蝇体内存在着一种抗菌活性蛋白。这种蛋白具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。,(1),分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的,、大小及形状不同，在电场中的,不同而实现分离。,(2),可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验,所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供,_,和,。,(3),分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的,，确定该蛋白质的抗菌效果。,(4),细菌培养常用的接种方法有,和,。实验结束后，对使用过的培养基应进行,处理。,【,解析,】,(1),电泳法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子的电荷,(,带电情况,),、大小及形状不同，在电场中的迁移速度不同而实现分离。,(2),牛肉膏和蛋白胨均为天然成分，含有丰富的营养物质，主要为细菌生长提供碳源和氮源。,(3),由于抗菌蛋白能够抑制微生物的生长，因此在加入该抗菌蛋白的培养基上长出的菌落少，通过比较菌落数量即可确定该抗菌蛋白的抗菌效果。,(4),细菌培养常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，实验结束后，为避免有害菌污染环境，对使用过的培养基应进行灭菌处理。,答案：,(1),电荷,(,带电情况,),迁移速度,(2),碳源氮源,(3),数量,(4),平板划线法稀释涂布平板法灭菌,考点二,植物有效成分的提取,1.,植物有效成分的提取的三种方法比较：,提取,方法,水蒸气,蒸馏法,压榨法,有机溶剂,萃取法,实验,原理,利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来,通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油,使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂获得芳香油,方法,步骤,水蒸气蒸馏,分离油层,除水过滤,石灰水浸泡、漂洗,压榨、过滤、静置,再次过滤,粉碎、干燥,萃取、过滤,浓缩,提取,方法,水蒸气,蒸馏法,压榨法,有机溶剂,萃取法,适用,范围,适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油,适用于柑橘芳香油、柠檬芳香油等原料易焦糊芳香油的提取,适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中,优点,简单易行，便于分离,生产成本低，易保持原料原有的结构和功能,出油率高，易分离,局限,性,水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题,分离较为困难，出油率相对较低,使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量,2.,增加植物有效成分提取量的关键措施：,(1),蒸馏法提取植物芳香油。,提取量主要取决于植物材料中芳香油的含量。,由于植物芳香油易挥发，因此用水蒸气蒸馏法提取植物芳香油时应选择新鲜的植物材料,(,干燥后植物芳香油挥发,),。,(2),压榨法提取植物芳香油：植物材料中的果胶、果蜡会影响压榨和出油率，压榨前通常采用石灰水浸泡的方法除去果胶、果蜡，以提高出油率。,(3),影响胡萝卜素萃取的因素及解决措施：,影响因素,解决措施,萃取剂的性质,用水不溶性有机溶剂,原料的颗粒大小、紧密程度,粉碎,材料的含水量,干燥,萃取温度,探索最佳萃取温度，严格控制温度,萃取时间,适当延长萃取时间,【,高考警示,】,(1),植物有效成分的提取方法不同。,根据不同的植物精油的性质，选择合适的方法进行提取。,能够利用蒸馏法提取的物质应该具有热稳定性，否则会发生植物有效成分的分解。,不适于蒸馏法的可以考虑压榨法，但是需要原料中植物芳香油的含量较大，否则不易压榨出来。,(2),用萃取法提取植物有效成分应注意的问题。,萃取温度和时间都会影响萃取的效果，萃取效率与萃取温度呈正相关，通常采用加热的方法提高萃取效率。,萃取温度过高会影响植物有效成分的品质，因此萃取时应严格控制温度，适当延长萃取时间。,【,考题回访,】,1.(2013,海南高考改编,),根据相关知识，回答胡萝卜素提取和鉴定,方面的问题：,(1),从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和,，以提高萃取效率。,(2),水蒸气蒸馏法,(,填,“,适合,”,或,“,不适合,”,),胡萝卜素的,提取，原因是,_,_,。,(3),为了提高萃取效果，萃取时应,。,(4),除去萃取液中的有机溶剂，可以采用,法。,(5),鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用,法，并以,样品作为对照。,【,解题指南,】,解答本题需注意：提取不同植物的有效成分所用的方法不一定相同，需要根据原料的特点进行选择。,【,解析,】,本题考查胡萝卜素的提取和鉴定的有关知识。,(1),从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和干燥。干燥是为了去水，以提高萃取效率。,(2),水蒸气蒸馏法不适合胡萝卜素的提取，因为水蒸气蒸馏法适用于分离挥发性物质，而胡萝卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸馏出。,(3),由于萃取温度和萃取时间会影响萃取效果，提高温度有利于胡萝卜素溶于有机溶剂，但是如果温度过高会破坏胡萝卜素，因此为了提高萃取效果，应严格控制萃取温度并延长萃取时间。,(4),由于有机溶剂易挥发，而胡萝卜素不易挥发，因此除去萃取液中的有机溶剂可采用蒸馏法。有机溶剂可经冷凝回收再利用。,(5),胡萝卜素的鉴定通常采用纸层析法。胡萝卜素能够溶解在层析液中，并随层析液在滤纸上的扩散而扩散，且扩散速度与溶解度呈正相关。可以用标准样品,(,胡萝卜素,),作为对照，分析萃取样品是否含胡萝卜素和杂质。,答案：,(1),干燥,(2),不适合水蒸气蒸馏法适用于分离挥发性物质，而胡萝卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸馏出,(3),严格控制萃取温度并延长萃取时间,(4),蒸馏,(5),纸层析标准的胡萝卜素,2.(2015,大连模拟,),下面是与植物芳香油的提取有关的问题，请回答：,(1),玫瑰精油的提取可使用图一所示装置，这种方法叫,蒸馏法。蒸馏时收集的蒸馏液,(,填,“,是,”,或,“,不是,”,),纯的玫瑰精油。,(2),胡萝卜素是,色的结晶。从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的是,法，采用,加热。一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量呈,相关。,(3),经萃取、过滤得到的液体是,，之后还需上述装置进行浓缩处理，该装置所起作用是,。,(4),图二为鉴定结果示意图，请据图回答。,A,、,B,、,C,、,D,四点中，属于标准样品的样点是,。甲代表的物质是,，乙代表的物质是,。,【,解题指南,】,(1),图中关键信息：图一为蒸馏装置。图二中甲中色素,A,、,B,、,C,、,D,点均有，乙中只,B,、,D,点有，,A,、,C,点没有。,(2),必备知识：水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油的原理。,胡萝卜素的理化性质和提取方法。,纸层析法鉴定胡萝卜素的原理与方法。,【,解析,】,(1),图中装置为蒸馏装置，提取玫瑰精油可用水蒸气蒸馏法。蒸馏时，玫瑰精油和水蒸气一起蒸馏出来，经冷凝后得到的是油水混合物，不是纯的玫瑰精油。,(2),胡萝卜素是橘黄色的结晶。由于胡萝卜素易溶于有机溶剂，因此提取胡萝卜素常用萃取法。由于有机溶剂易燃易爆，因此为了加快胡萝卜素的溶解，常采用水浴加热。由于原料的含水量影响提取效率，因此提取效率与原料颗粒的含水量呈负相关。,(3),萃取、过滤得到的液体是溶有胡萝卜素的萃取剂，由于胡萝卜素不易挥发，而萃取剂易挥发，因此可以利用蒸馏装置蒸发掉萃取剂。,(4),由于标准的胡萝卜素只有一种色素，而提取样品中会含有其他色素和杂质，根据层析的结果可知，,A,、,C,扩散的结果只有一种色素，应为标准样品样点，而,B,、,D,层析的结果有两种物质，应为提取样品样点，其中与,A,、,C,层析结果相同的是物质甲，为胡萝卜素，乙为其他色素和杂质。,答案：,(1),水蒸气不是,(2),橘黄萃取水浴负,(3),溶有胡萝卜素的萃取剂去除萃取剂,(4)A,和,C,胡萝卜素其他色素和杂质,【,加固训练,】,1.,胡萝卜因含多种营养成分而受人们青睐。请回答下列有关胡萝卜的实验问题：,(1),选取胡萝卜进行植物组织培养所用的,MS,培养基与微生物培养基的主要区别是：前者含大量无机营养成分，而后者以有机营养成分为主；前者一般含有,。,(2),为了更容易地榨取胡萝卜汁，提高澄清度，需要加入,_,酶，但该酶的成本较高，为了降低成本可通过,_,等技术手段对产酶微生物进行改造，以提高该酶的产量。,(3),从功能看，筛选该酶的高产微生物时所用培养基为,_,培养基。,(4),从该酶高产微生物的发酵液中提取此酶时，常采用,_,法将不同相对分子质量的酶进行分离。,(5),某科研所通过人工改造获得了胡萝卜素的高产酵母菌,R,，培养酵母菌,R,时，要通入灭菌空气，目的是,。,【,解析,】,(1),与微生物的培养基相比，植物组织培养的,MS,培养基除营养物质不同外，通常还要添加植物激素。,(2),影响榨取胡萝卜汁的出汁率和澄清度的因素是果胶，因此加入果胶酶可以更容易地榨取胡萝卜汁，提高澄清度。要对产酶微生物进行改造以提高该酶的产量，需要改变产酶微生物的遗传特性，人工诱变和基因工程均能实现对产酶微生物的改造。,(3),从功能看，筛选微生物所用培养基为选择性培养基。,(4),根据酶的相对分子质量不同分离酶的方法为凝胶色谱法,(,分配色谱法,),。,(5),酵母菌为兼性厌氧型微生物，因此培养酵母菌,R,时通入灭菌空气的目的是使酵母菌,R,大量繁殖。,答案：,(1),植物激素,(2),果胶人工诱变,(,答,“,基因工程,”,也可,),(3),选择性,(4),凝胶,(,或分配,),色谱,(5),使酵母菌,R,大量繁殖,2.(2013,山东高考节选,),胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得，流程如下：,(1),采用平板划线法接种时需要先灼烧接种环，其目的是,。,(2),培养酵母菌,R,时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可以分别为酵母菌,R,提供,和,。,(3),从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和,，以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用,方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是,。,【,解析,】,本题考查微生物的实验室培养、植物有效成分的提取。,(1),接种过程为了避免其他杂菌的污染，要进行无菌操作，所以接种前需对接种环灼烧灭菌。,(2),蔗糖主要提供碳源，也可以作为能源物质，硝酸盐含氮元素，可提供氮源。,(3),温度过高、干燥时间过长会导致胡萝卜素分解；由于萃取剂往往有挥发性，直接加热时挥发出来的有机溶剂遇明火易爆炸；萃取后需将原料中的固体物滤去。,答案：,(1),灭菌,(,或防止杂菌污染,),(2),碳源氮源,(3),时间水浴滤去不溶物,
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