喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析课件.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。,第一节 喹啉类药物的分析,基本结构和主要性质,鉴别实验,纯度检查,含量测定,一、基本结构,硫酸奎宁,二盐酸奎宁,磷酸哌喹,磷酸氯喹,磷酸咯萘啶,磷酸伯氨喹,喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的,喹啉杂环,，环上杂原子的反应性能基本与,吡啶,相同。,二、主要化学性质,奎宁为,二元生物碱,，其中,奎宁环上的氮原子,的碱性较强,(p,Ka,8.8),，与强酸形成稳定的盐，,奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；,喹啉环上的氮原子碱性较弱,(p,Ka,4.2),，不能与硫酸成盐。,磷酸氯喹和磷酸伯氨喹为三元生物碱；磷酸咯萘啶为五元生物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。,1.碱性,(,二,),主要化学性质,喹啉类抗疟药基本都具有,手性,，硫酸奎宁为,左旋体,，其比旋度为,-237,o,至,-224,o,；,二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为,-223,o,至,-229,o,。,磷酸哌喹和磷酸咯萘啶,不,具有手性。,2.旋光性,(,二,),主要化学性质,3.,荧光特性,硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸溶液中均显,蓝色荧光,。,4.,紫外吸收光谱特征,由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有,共轭体系,，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。,二、鉴别试验,(,一,),绿奎宁反应,(,二,),光谱特征,(,三,),无机酸盐,(,一,),绿奎宁反应,奎宁为,6-,位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应,(Thalleioquin reaction),。反应基本机制是,6-,位含氧喹啉,，经氯水,(,或溴水,),氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的,二醌基亚胺,的铵盐。,(,一,),绿奎宁反应,硫酸奎宁和二盐酸奎尼的绿奎宁反应机制同上。取其水溶液，加溴试液,0.2ml,和氨试液,1ml,，即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为紫红色。翠绿色可转溶于醇、三氯甲烷中而不溶于醚。因此,ChP2010,采用此反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎尼。,ChP2010,硫酸奎宁的绿奎宁反应鉴别：取本品约,5mg,，加水,5ml,溶解后，加溴试液,3,滴与氨试液,1ml,，即显翠绿色。,(,二,),光谱特征,1.,紫外吸收光谱特征,由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有共轭体系，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。,ChP2010,采用本法鉴别磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹。,(,二,),光谱特征,2.,荧光光谱特征,利用硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。,ChP2010,硫酸奎宁的荧光鉴别：取本品约,20mg,，加水,20ml,溶解后，分取溶液,10ml,，加稀硫酸使成酸性，即显蓝色荧光。,(,二,),光谱特征,3.,红外吸收光谱特征,硫酸奎宁、二盐酸奎宁、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在,ChP2010,中均采用红外光谱的方法进行鉴别。,ChP2010,磷酸氯喹的,IR,鉴别：取本品约,0.5g,，置分液漏斗中，加水,25ml,溶解后，加氢氧化钠试液,5ml,、乙醚,50ml,振摇提取，醚层用水洗涤后通过置有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用五氧化二磷为干燥剂减压干燥至析出结晶，其红外光吸收图谱应与氯喹的对照图谱一致。,(,三,),无机酸盐,1.硫酸盐的鉴别反应,硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。,取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。,取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。,取供试品溶液，加盐酸，,不,生成白色沉淀,(,与硫代硫酸盐区别,),。,(,三,),无机酸盐,2.氯化物的鉴别反应,二盐酸奎宁中具有盐酸根，即显氯化物的鉴别反应进行鉴别。,取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。,取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。,(,三,),无机酸盐,3.,磷酸盐的鉴别反应,磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹都具有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。,取供试品的中性溶液，加硝酸银试液，即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。,取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。,取供试品溶液，加钼酸铵试液与硝酸后，加热即生成黄色沉淀；分离，沉淀能在氨试液中溶解。,三、纯度检查,理化特性：,硫酸奎宁为白色细微的针状结晶，轻柔，易压缩；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显中性反应。在氯仿,-,无水乙醇,(2:1),的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。,有关物质,根据硫酸奎宁的制备工艺，产品中有关物质主要是生产过程中产生的中间体以及副反应产物。通过检查以下项加以控制：,酸度,三氯甲烷,-,乙醇中不溶物质,其他金鸡纳碱等,(,一,),硫酸奎宁的检查,(,一,),硫酸奎宁的检查,1,.,酸度 主要是在,成盐过程,中引入。,检查法：取本品,0.20g,，加水,20ml,溶解后，用酸度计进行测定，,pH,值应为,5.7,6.6,。,2,.,三氯甲烷,-,乙醇中不溶物质,本项检查主要控制药物在制备过程中,引入的醇中不溶性杂质或无机盐,类等。,检查法：取本品,2.0g,，加三氯甲烷,-,无水乙醇,(2:1),混合溶液,15ml,，在,50,加热,10,分钟后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合溶液分,5,次洗涤，每次,10ml,，在,105,干燥至恒重，遗留残渣不得过,2mg,。,(,一,),硫酸奎宁的检查,3.,其他金鸡纳碱,本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用,HPLC,或,TLC,中,的主成分,自身对照法或杂质对照品对照法,进行检查。,(,二,),磷酸咯萘啶的纯度检查,1.,酸度,主要是在,成盐过程,中引入。本品水溶液的,pH,值如小于,2.4,，刺激性较大。,检查法：取本品,1.0g,，加水,25ml,溶解后，用酸度计进行测定，,pH,值应大于,2.4,。,2.,水中不溶物,本品加水溶解后，稍放置即有黄色不溶物产生，影响质量。故质量标准按给药途径不同，规定其不同限量以控制质量。,检查法：取本品,2.0g,，加水,25ml,振摇使溶解，放置,30,分钟，用置,105,恒重的,4,号垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀用水,15ml,分次洗涤，在,105,干燥,4,小时，遗留残渣不得过,4mg(,供注射用,),或,7mg(,供口服用,),。,(,二,),磷酸咯萘啶的纯度检查,3.,氯化物,系生产工艺中带入。检查时为了避免溶液颜色的干扰，先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再对滤液进行检查。,检查法 取本品,0.10g,，加水,4ml,使溶解，加,20,碳酸钠溶液,5ml,，摇匀，使沉淀完全，用,5,号垂熔玻璃漏斗滤过，容器用水,15ml,分次洗涤、滤过，合并滤液，加水使成,25ml,，依氯化物法检查，与标准氯化钠溶液,3.0ml,制成的对照液比较，不得更浓,(0.03,),。,(,二,),磷酸咯萘啶的纯度检查,4.,甲醛,在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了甲醛进行缩合，甲醛具有毒性，应对产品中可能剩余的甲醛进行检查。,检查法：取本品,50.0mg,，加水,2ml,使溶解，加,5%,碳酸钠溶液,4ml,，搅匀，滤过，滤液加硫酸溶液,(12)3ml,，冷却后加品红亚硫酸试液,5ml,，在,20,30,保温,30,分钟，如显色，与新制的甲醛溶液,(,每,1ml,含甲醛,0.10mg,的水溶液,)1.0ml,用同一方法制成的对照液比较，不得更深,(0.2%),。,5.,四氢吡咯,在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了四氢吡咯进行缩合，四氢吡咯具有毒性，应对产品中可能剩余的四氢吡咯进行检查。,检查法：取本品,10mg,，加水,2ml,溶解后，加,5,碳酸钠溶液,2ml,，搅拌，滤过，滤液加新制的,亚硝基铁氰化钠乙醛,试液,1ml,，摇匀，,5,分钟内不得显蓝紫色。,四、含量测定,硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接滴定。而在,非水酸性介质中，碱性显著增强,，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。,由于硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质中，只能解离为,HSO,4,，所以生物碱的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐。,(BH,+,),2,SO,4,2-,+HClO,4,BH,+,ClO,4,-,+BH,+,HSO,4,测定时还应注意生物碱分子结构中氮原子碱性的强弱，正确判断反应的摩尔比，以准确计算结果。,(,一,),硫酸奎宁的含量测定,(,一,),硫酸奎宁的含量测定,取本品约,0.2g,，精密称定，加冰醋酸,10ml,溶解后，加醋酐,5ml,与结晶紫指示液,1,2,滴，用高氯酸滴定液,(0.1mol/L),滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每,1ml,高氯酸滴定液,(0.1mol/L),相当于,24.90mg,的,(C,20,H,24,N,2,O,2,),2,H,2,SO,4,。,ChP2010,硫酸奎宁的含量测定法：,奎宁为二元碱，喹核氮可与硫酸成盐，喹啉环氮不与硫酸成盐，但在冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。即：,因此，,1 mol,硫酸奎宁消耗,3 mol,高氯酸滴定液,。即,1 mol,奎宁可以结合,4 mol,质子，其中,1 mol,质子是硫酸提供的，其它,3 mol,质子是由高氯酸提供的。,USP,与本法相同。,(,二,),磷酸氯喹制剂的含量测定,取本品,10,片，精密称定，研细，精密称取适量,(,约相当于磷酸氯喹,0.13g),，置,200ml,量瓶中，加,0.lmol/L,盐酸溶液适量，充分振摇使磷酸氯喹溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液,2ml,，置,100ml,量瓶中，用,0.lmol/L,盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，在,343nm,的波长处测定吸光度；另取磷酸氯喹对照品适量，精密称定，加,0.lmol/L,盐酸溶液溶解并定是稀释制成每,lml,中约含,13g,的溶液，同法测定，计算，即得。,本品含磷酸氯喹,(C,18,H,26,ClN,3,2H,3,PO,4,),应为标示量的,93.0%,107.0%,。,ChP2010,中磷酸氯喹片的,紫外,-,可见分光光度,含量测定法：,(,二,),磷酸氯喹制剂的含量测定,ChP2010,中磷酸氯喹,注射液,(,本品含磷酸氯喹的灭菌水溶液。含磷酸氯喹,(C,18,H,26,ClN,3,2H,3,PO,4,),应为标示量的,95.0%,105.0%,。,),的含量的,提取酸量测定法,：,精密量取本品适量,(,约相当于磷酸氯喹,0.3g),，用水稀释至,30ml,，加,20%,氢氧化钠溶液,3ml,，摇匀，用乙醚提取,4,次，每次,20ml,，合并乙醚液，用,10ml,水洗涤，水洗涤液再用,15ml,乙醚提取,1,次，合并前后两次的乙醚液，蒸发至近,2,3ml,时，精密加盐酸滴定液,(0.lmol/L)25ml,，温热蒸去乙醚并使残渣溶解，冷却，加,溴甲酚绿,指示液数滴，用氢氧化钠滴定液,(0.lmol/L),滴定。每,lml,盐酸滴定液,(0.lmol/L),相当于,25.79mg C,18,H,26,ClN,3,2H,3,PO,4,。,USP,采用提取后,HPLC,测定磷酸氯喹注射液的含量。,第二节 青蒿素类药物的分析,基本结构与主要性质,鉴别试验,纯度检查,含量测定,一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质,青蒿素,双氢青蒿素,青蒿琥酯,蒿甲醚,UV,吸收特性,由于青蒿素类药物分子结构中母核，,不具有,共轭体系，其紫,外吸收光谱的主要是,末端吸收,。但,C-10,由于取代基的不同,具,有一定,吸收特征,。,氧化性,由于青蒿素类是具有过氧桥的,倍半萜内酯类化合物,，这类化合物具有氧化性。,旋光性,青蒿素类药物都均有旋光性，均为,右旋体药物,。青蒿素其比旋度为,+75o,+78o,。蒿甲醚其比旋度为,+168o,+173o,。,水解反应,青蒿素结构中由于,有内酯,，在碱性条件下，发生水解，但其 他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。,二、鉴别试验,(,一,),、呈色反应,(,二,),、吸收光谱特征,(,三,),、色谱法,(,一,),呈色反应,由于青蒿素类是具有,过氧桥的倍半萜内酯类化合物,，这类化合物具有,氧化性,。在酸性条件能将,I,-,氧化成,I,2,与淀粉指示液，生成,蓝紫色,。,1.,碘化钾试液,-,淀粉反应,(,过氧桥的氧化反应,),2.,羟肟酸铁反应,含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟胺作用，生成,羟肟酸,；在,稀酸中与高铁离子,呈色。,ChP2010,收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。,3.,香草醛,-,硫酸反应,硫酸香草醛溶液显色原理,:,使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。,(,二,),吸收光谱特征,青蒿素类抗疟原料药在,ChP2010,中均采用,红外光谱,的方法进行鉴别。,1.,红外吸收光谱特征,但是,制剂,的红外光吸收图谱鉴别须,经提取分离,，残渣干燥后，进行红外光吸收图谱与对照的图谱比较。,要求所得的红外光吸收图谱应与对照的,图谱一致,。,2.,紫外吸收光谱特征,由于青蒿素类药物分子结构中,母核,，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端吸收。但,C-10,由于取代基,的不同具有一定吸收特征。,ChP2010,均未采用本法鉴别所收载青蒿素类药物。,利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的,保留时间,(,t,R,),是否一致或比较供试品溶液所显,主斑点的位置和颜色,与对照品溶液主斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。,HPLC,法,一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。,青蒿素类抗疟,原料药,在,ChP2010,中均采用,HPLC,的方法进行鉴别。,但,制剂,中也有采用,TLC,法,进行鉴别。,(,三,),色谱法,三、检查,目前青蒿素的制备仍以天然药材分离提取为主，并用于其衍生药物的生产，所以药品中通常都存在结构类似的有关物质，主要通过,TLC,和,HPLC,进行检查控制,。,四、含量测定,目前,青蒿素类原料药物,ChP2010,中均采用,HPLC,法,进行含量测定，,双氢青蒿素片中,采用,水解后用,UV,测定法。,