医学核酸和核苷类药物专题课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,核酸和核苷类药物,第一节 概述,一、核酸与核苷类药物,核酸与核苷类药物是指具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷或者碱基,天然的、类似物、衍生物及其聚合物,作用：,影响生物的蛋白质合成和脂肪、糖类的代谢,恢复正常代谢或干扰某些异常代谢,用途：放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎缩、肿瘤、病毒病,核酸类物质药物一般可分为两大类：,一类具天然结构的核酸类物质，,另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物。,前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、CTP、UTP、ATP、腺苷、辅酶I、辅酶等，多数是生物体自身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。,后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。,正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。,珍奥核酸,DNA药物,核苷类药物,恩替卡韦,二、核酸与核苷的一般理化性质,核糖（核糖脱氧核糖）,核苷 嘌呤（腺嘌呤、鸟嘌呤）,碱基,核酸,核苷酸,嘧啶（胞、尿、胸腺嘧啶）,（DNA、RNA）,磷酸,DNA和RNA是存在于细胞中的正常成分。,DNA主要存在于细胞核中，少量（2%）存在于线粒体和叶绿体中；,RNA主要存在于细胞质中，少量（10%）存在于核仁、核浆和染色体中。,核酸的含量与细胞大小无关，以生长旺盛的组织细胞中含量较多，如动物胰脏、脾脏、胸腺，植物的茎尖、根尖及各种分生组织等。,第二节 制备的一般过程与原理,一、RNA的提取与制备,工业用RNA的提取,（1）RNA及其工业来源：,从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。一些最常见的菌体含有丰富的核酸资源，如酵母、白地霉、多种抗菌素的菌丝体青霉素，制霉菌素等菌体。,通常在细菌中RNA占525，在酵母中占2.715，在霉菌中占0.7%28。,在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中关键是,铵离子浓度和磷酸盐浓度,。培养酵母菌体收率高，易于提取RNA。,很显然在许多酵母中，,早期细胞中的RNA含量高,，其确切数值取决于,碳、氮比例,和培养基组成等。,（,2）高RNA含量酵母菌株的筛选,可以从自然界,筛选,到RNA含量高的酵母菌株，也可用,诱变育种,的方法提高酵母菌的RNA含量。,稀碱法：,是用,氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变性,，使,核酸从细胞内释放出来,。需用酸中和,PH7,。然后,除去菌体,，将pH调至RNA的,等电点,（,pH2.5,），使,RNA沉淀,出来。上法的缺点是制得的RNA,M,r,较低,(,磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 保持34h破坏酶,)。,浓盐法：,是用,高浓度盐溶液（6%8%）,处理，同时,加热,，以,改变细胞壁的通透性,，使,核酸从细胞内释放出来。,要避免,分子降解,，可采用,苯酚法,制备,RNA,。用苯酚处理生物材料，使蛋白质变性，然后离心，上层水溶液内含有,全部RNA,，可用,乙醇沉淀,出来。,脱氧核糖核蛋白,溶于,浓盐溶液1mol/L,不溶于,0.14mol/,L,而,核糖核蛋白,溶于,0.14mol/L,盐溶液。,（3）RNA的提取实例：,啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。取100g压榨啤酒酵母（含水份70%），加入230ml含,NaOH,3g的水，20以下缓慢搅拌30分钟。用6molL HCl调至pH7，搅拌15分钟，离心得清液255m1。冷至,10,以下，6molL HCl调,pH2.5,，置冷过夜，离心得RNA l.8g（纯度80）。,RNA提取实例：,提取 中和 HCl 酸化、沉淀HCl,酵母 提取液 上清液 RNA,NaOH、水 pH 7、离心 pH 2.5、离心,二、,DNA的提取与制备,工业用,DNA,的提取,取新鲜冷冻鱼精,20kg,，,用绞肉机粉碎,2,次成浆状，加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至,100,，保温,15,分钟，迅速冷却至,20,25,，离心除去鱼精蛋白等沉淀物，获得,35L,含热变性,DNA,的溶液，经精确测定,DNA,含量后直接可用于,酶法降解,生产脱氧核苷酸。如要制成固体状,DNA,，,在热变性,DNA,溶液中逐渐加入等体积,95,乙醇,，离心可获得纤维状,DNA,，,沉淀用乙醇、丙酮洗涤,，减压低温干燥得,DNA,粗品，产品,含热变性,DNA50,60,。,工业用DNA的提取,提取,热变性,沉淀,乙醇,鱼精 提取液 纤维状,DNA,水、,100,冷却、离心,70%-80%,（无生物活性）,15min,干燥,粗品,DNA,（,热变性后无活性）,具有生物活性,DNA,的制备,动物内脏（肝、脾、胸腺）加,4,倍重量生理盐水,经,组织捣碎机,捣碎,1,分钟，匀浆于,2500r,pm,离心,30,分钟，沉淀用同样体积的生理盐水洗涤,3,次，每次洗后离心，将沉淀悬浮于,20,倍重量的冷生理盐水中，再捣碎,3,分钟，,加入,2,倍量,5,的（用,45%,乙醇作溶剂）十二烷基磺酸钠,，并搅拌,2,3,小时，在,02500r,pm,离心，在上层液中加入等体积的,冷,95,乙醇,，离心即可得到纤维状,DNA,，,再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得粗品,DNA,。,粗品,DNA,溶于适量蒸馏水，加入,5,十二烷基磺酸钠,达,1,10,体积，,搅拌,1,小时,，经,5000r,pm,离心,1,小时，清液中,加入,NaCl,达,1mol,L,，,再缓慢加入,冷,95%,乙醇,，,DNA,析出，经乙醇、丙酮洗涤，真空干燥得具有生物活性的,DNA,（,活性,DNA,制备需在,0,3,操作）。,生物活性,DNA,的制备,提取,洗涤,3,次,5%,SDS,动物内脏 沉淀 沉淀 上层液,（肝、脾）,生理盐水 生理盐水,再捣碎,离心、,30min,沉淀,洗涤、干燥,提取,纤维状,DNA,粗品,DNA,上清液,95%,乙醇 冷乙醇、丙酮 水、,5%SDS,离心,沉淀,洗涤、干燥,DNA,沉淀 活性,DNA,NaCL,、,95%,乙醇 乙醇、丙酮,三、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸,1、酶解法及碱水解法制备核苷酸,酶解法制备脱氧核苷酸,桔青霉,产生,5-,磷酸二脂酶,红酵母,产生,3-,磷酸二脂酶,酶解法制备戊糖核苷酸,我国从,60,年代开始使用,核酸酶,P1,降解核糖核酸生产单核苷酸，日本年产,呈味核苷酸,（,肌苷酸和鸟苷酸,）,3000,吨，其中,60%,是使用酶解法生产的。,酶解法生产,5,单核苷酸工艺流程,双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（,I,G,）,呈味核苷酸,的主要品种是,肌苷酸钠和鸟苷酸钠,，商品名简称为,（,I,G,）,，,用,核酸酶,Pl,降解,RNA,可获得,GMP,和,AMP,，,其中,AMP,经,脱氨,生成,IMP,。,双酶法生产（,I,十,G,）,工艺。,菌体自溶法生产核苷酸,磷酸二酯酶,在合适的条件下降解细胞内的,RNA,可产生,5-,核苷酸,。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产,5-,核苷酸。,（,1,）菌体自溶法生产核苷酸工艺流程：,碱水解法生产,2,，,3,-,混合核苷酸,RNA,结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定，很容易生成,2,，,3,-,环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更不稳定，很易加水分解生成,2,，,3,-,混合核苷酸。,取,RNA,配成,3,3.5%,的水溶液，加氢氧化钠达,0.3mol,L,浓度，升温至,38,，保温,16,20,小时,，用,6mol,L,盐酸中和至,pH7.0,，从,RNA,水解成,2,，,3,-,核苷酸的降解率达,95,以上,，将,2,，,3,-,混合核苷酸制成每片含,50,100mg,的片剂,，经临床使用，对非特异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和放疗后的升白血球均有较好疗效。,发酵法生产核苷酸,1、发酵法生产肌苷酸（IMP）,肌苷酸钠是一种高效增鲜剂，在谷氨酸钠（味精）中加2%，鲜度可增加3倍。因此，在味精中添加肌苷酸钠（或鸟苷酸钠）后成为第二代特鲜味精。,产氨短杆菌嘌呤核苷酸生物合成途径、代谢调控和肌苷酸发酵机制:,积累IMP的主要前提：,（1）阻断SAMP合成酶:,即选育缺该酶的菌株（嘌呤缺陷型），发酵前期提供适量腺嘌呤，以满足菌体生长；,（2）保持 PRA 合成畅通，即后期没有多余腺嘌呤阻遏该步反应；,（3）要使IMP渗出胞外，选育对Mn,+,不敏感菌株；,（4）生成的IMP不被降解，恰好原菌株该酶活力低。,2、混合培养法发酵生产鸟苷酸（GMP）:,直接发酵法生产GMP必需满足以下条件,（1）解除GMP的反馈抑制（与GMP积累相勃）;,（2）改变细胞对GMP的透性;,（3）不分解生成GMP,只能先合成XMP，后转化为GMP：,方法如下：,选育鸟嘌呤、腺嘌呤缺陷型菌株，同时解除PRPP转酰胺酶及XMP合成酶的阻遏，积累大量XMP(GMP合成酶及SAMP合成酶缺失）。,XMP转化为GMP菌株的条件:,(1)GMP不被分解,(2)GMP合成酶活力要强化(抗生素激动剂),(3)增加细胞通透性,半合成法制备核苷酸,由于,发酵法生产核苷,的产率很高，,核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化，从核苷生成,5-,核苷酸收率可达,90%,。,例一：肌苷,2mmol,L,悬浮于,5ml,磷酸三乙酯中，温度控制,0,，添加氯化氧磷,6mmol,L,，,水,2mmol,L,，,反应,2h,，,5,-IMP,摩尔产率达,91,。,例二：鸟苷,2mmol,L,悬浮于,5ml,磷酸三甲酯中，温度控制,0,，添加氯化氧磷,6mmol,L,，,水,2mmo/L,，,反应,6h,，,5,-GMP,摩尔产率达,90%,。,四、核苷的制备,核苷是多种核苷类药物的原料，在核酸类药物中占主导地位。,（1）以核苷及其结构类似物、衍生物为主药物多达几十种；,（2）核苷类药物在抗病毒、抗肿瘤、增强免疫方面占重要地位；,（3）核苷的发酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者的前体物质。,1、RNA化学水解法制备核苷,：,2、发酵法生产核苷,产率高、周期短、控制容易、产量大。,共同特点：,（1）使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌或短小芽孢杆菌为诱变出发菌株；,（2）具有特定标记的有变株；,（3）发酵培养时需提供限量生长因素。,原菌株：,（1）AMP强烈抑制PRPP转酰胺酶的活性，控制总代谢途径；,（2）AMP抑制SAMP合成酶；,（3）GMP抑制IMP脱氢酶,生产菌株：,（1）酶6、7缺失（为腺嘌呤缺陷型）积累IMP-肌,苷（肝炎辅助药）；,（2）酶4缺失（为鸟嘌呤缺陷型）积累XMP-黄苷；,（3）酶5缺失积累鸟苷。,发酵法生产肌苷,（,1,）肌苷生产工艺,（,2,）发酵工艺条件：,碳源为葡萄糖,保证充足的氮源,磷酸盐的影响,Mg+,、,Ca+,有促进作用,生长因子腺嘌呤或酵母粉要亚适量,最适发酵温度为,30-34,，,pH6.06.2,需大风量,高溶氧和低,CO,2,发酵法生产鸟苷和黄苷,鸟苷产生菌的特征：,（,1,）嘌呤核苷酸分解酶活力强；,（,2,）,SAMP,合成酶，,GMP,还原酶缺失；,（,3,）解除,AMP,、,GMP,对,PRPP,转酰胺酶，肌苷酸脱氢酶和,GMP,合成酶的反馈抑制；,发酵法生产腺苷,以肌苷生产菌（枯草杆菌）为诱变基础菌株。,诱变结果：,（,1,）腺嘌呤回复，腺嘌呤酶缺失；,（,2,）黄嘌呤缺陷型，,GMP,还原酶缺失；,（,3,）抗,8,杂氮黄嘌呤解除对,PRPP,转酰胺酶的抑制；,（,4,）发酵不稳定的原因：黄嘌呤缺陷及腺嘌呤酶缺失与回复（菌种传代中）。,第三节 核酸与核苷类药物的制备举例,（一）叠氮胸苷（Azidothymidine，AZT）,1、结构与性质,AZT是1987美国FDA批准的治疗,艾滋病,的新药,。,AZT的药理作用是人体内经,磷酸化,后生成了3-叠氮-2-脱氧胸腺嘧啶核苷酸，后者,取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸参与病毒DNA的合成，含有AZT成份的DNA不能继续复制，从而达到阻止病毒增殖的目的,。,2、生产工艺,此合成路线的起始,原料是胸苷,，目前主要是从,DNA水解法,制备，由于原料来源少，合成路线较复杂，成本很高。,已见报道的胸苷合成方法还有两条途径：,从2-脱氧胞苷或2-脱氧鸟苷或2-脱氧腺苷与,胸腺嘧啶,反应，经大肠杆菌产生的,磷酸化酶,催化生成,胸苷,。,从鸟苷（300mmolL）与胸腺嘧啶（300mmolL）反应，在欧文氏菌AJZ992所产生的,嘌呤核苷磷酸化酶,和,嘧啶核苷磷酸化酶,的催化下生成5-甲基尿苷，然后经化学法合成胸苷。,（二）阿糖腺苷（Adenine arabinoside）,1、结构与性质,阿糖腺苷,的化学名称为9-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或称,腺嘌呤阿拉伯糖苷,。,早在1960年就在实验室合成了阿糖腺苷，1969年美国用,Streptomyces antibioticus,NRRL3238菌株，1972年日本用,Streptomyces hebacecus,4334菌株,发酵法分别制备了阿糖腺苷,。,1979年用从EColi中分离得到的,尿嘧啶磷酸化酶,和,嘌呤核苷磷酸化酶,，以,固相酶,的方法,将阿糖脲苷转化为阿糖腺苷,。,2、生产工艺,酶,-,化学合成法,最新的,阿糖腺苷,的合成法是,酶,-,化学合成法,：,用尿苷,为原料经,氧氯化磷,和,二甲基甲酰胺,反应，生成,氧桥化合物,，在碱性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的,阿拉伯糖,经,酶法,转化成,阿糖腺苷,。,经选育从阿糖尿苷酶法合成阿糖腺苷的优秀菌株是,产气肠杆菌,（,Enterbacteraerogens,），,这株菌能产生,尿苷磷酸化酶,（,Upase,）,和,嘌呤核苷磷酸化酶,（,Pynpase,），,用这个菌株的,休止细胞,作为酶源，从阿糖尿苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷，菌体也可制成固定化细胞进行连续生产。,以,5-AMP,为原料的化学合成,3、作用与用途,阿糖腺苷,是近年来引人注目的,广谱DNA病毒抑制剂,，对单纯,疱疹、型，带状疱疹，巨细，牛痘等DNA病毒，在体内外都有明显抑制作用,。目前认为，阿糖腺苷是治疗单纯疱疹脑炎最好的抗病毒药物。,阿糖腺苷在体内受激酶作用生成的,阿糖腺三磷，是脱氧腺三磷（dATP）的拮抗物,，,从而阻抑了以dATP为底物的病毒DNA聚合酶的活力,。而且阿糖腺三磷对于病毒DNA聚合酶的亲和性比宿主细胞的同一个酶的亲和性高。因此这个药物对于抑制病毒具有较高选择性。,（,三）三氮唑核苷,1、结构与性质,三氮唑核苷商品名,病毒唑,，对DNA病毒，RNA病毒都有广泛作用。本品为白色结晶，熔点174176，易溶于水。,这个化合物经,X线解析,，它的立体结构与腺苷、鸟苷非常类似，,在体内被磷酸化成三氮唑核苷酸,，抑制肌苷酸脱氢酶,阻断鸟苷酸的生物合成,，从而抑制病毒DNA合成。它的另一特点是对病毒作用点多，不易使病毒产生抗药性。,2、生产工艺,酶合成法,使用,产气肠杆菌,，以（,尿苷,）,肌苷和TCA,为底物可以用酶法简易地合成三氮唑核苷。,采用前段与后段由两个不同的酶催化，即前段使用,嘧啶核苷磷酸化酶,，后段使用,嘌呤核苷磷酸化酶,。,（四）阿糖胞苷,（Cytarabine，Cytosine arabinoside，Arabinosyl Cytosine，Aracytidine）,1、结构与性质,阿糖胞苷,又称,胞嘧啶阿拉伯糖苷,，糖的组成部分是,阿拉伯糖,。白色或类自色结晶性粉末，无臭，易溶于水，略溶于甲醇、乙醇中，乙醚中极微溶。,阿糖胞苷进入体内转变为阿糖胞苷酸，抑制DNA聚合酶，,阻止胞二磷转变为脱氧胞二磷从而抑制DNA的合成,，干扰DNA病毒繁殖和肿瘤细胞增殖。,只能注射,。,2、生产工艺,以,5,CMP,为原料的合成法,（,1,）工艺路线：,（2）工艺过程：,水解,：,并加入处理好的6.5L 氢氧化镧凝胶，总体积为7.5L，升温至90，在不断搅拌下，于pH9下进行水解。在不同的反应时间内，均匀取出2mL凝胶溶液，离心分离，取上清液5至10l，pH9.2电泳分析，检查水解程度。,氧桥化,：,氧桥化后总OD光谱高峰位置移至264nm（pH2）,氨解,：,使氧桥断裂3，5-乙酰基脱落。,成盐,：,2盐酸-甲醇,以葡萄糖酸钙为原料的合成路线,（五）聚肌胞苷酸（聚肌胞,）（Poyinosinic，Polycytidylic Acid，Poly1：C）,1、结构与性质,1967年美国人Field发现,聚肌胞,是,干扰素诱导物,，而且具有广谱抗病毒作用。本品是,人工合成的干扰素诱导剂,，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸组成的双股多聚核苷酸。本品可,溶于0.85氯化钠,溶液。,2、生产工艺,70年代中期我国开始研制聚肌胞，其生产工艺如下：,底物,5-,核苷二磷酸吡啶盐的制备,（3）固定化,多核苷酸磷酸化酶,，将分离纯化的酶液滴加入冰浴中的载体，得到共价结合的固定化多核苷酸磷酸化。,3、Poly I：C制备,（1）底物预处理：,CDP吡啶盐转成锂盐，IDP转成钠盐。,（2）酶促反应：,（每毫升反应液含molL数）IDP或CDP 15；Tris 150；MgC1,2,6；EDTA 1；聚合酶5单位，pH9.0，37，34小时。用盐酸调pH1.52.0，使PolyI（或Poly C）沉淀，立即离心。此后在磷酸液冲液中溶解，等摩尔Poly I与Poly C混合，生成产品。,3、作用与用途,本品具有抗病毒，抗肿瘤，增强淋巴细胞免疫功能和抑制核酸代谢等作用,。本品注入人体,诱导产生干扰素。,临床已试用于肿瘤、血液病、病毒性肝炎及痘类毒性感染等多种疾患。,胞二磷胆碱（,CDP-,胆碱）,1,、结构与性质,胞二磷胆碱其化学名称为胞嘧啶核苷,-5,-,二磷酸胆碱钠盐本品为白色无定形粉末，,易吸湿,，,易溶于水，几不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多数有机溶剂,。,1,水溶液,pH2.5,3.5,，,注射液,pH7.0,。,2、生产工艺,酶合成法,胞二磷胆碱由微生物菌体所提供的酶系催化,胞苷酸,和,磷酸胆碱,而合成，国内使用啤酒生产中,废弃的酵母,，反应体系为：,磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液（,pH8.0,）,200mol,ml,，,CMP,20mol,ml,，,磷酰胆碱,30mol,ml,，,葡萄糖,1000mol,ml,，,MgSO,4,.7H,2,O 20mol,ml,，,酵母泥,550mg,m1,。,上述反应体系于,28,保温,20,小时,，胞二磷胆碱对胞苷酸的收率为,80,。,粘性红酵母发酵法,国外发现一株粘性,红酵母可高产胞二磷胆碱,。,菌体培养基（,g,L,）：,葡萄糖,50,；多胨,5,；酵母膏,2,；,KH,2,PO,4,2,；（,NH,4,）,2,HPO,4,2,；,MgSO,4.,7H,2,O 1,；,pH6.0,，经,28,，,22h,培养，,收集菌体,，菌体经,0.2mol,L,磷酸缓冲液,pH7.0,洗涤，,备用,。,产生胞二磷胆碱的反应体系（,g,L,）：,葡萄糖,140,；,MgSO,4,.7H,2,O 6,；,5,CMP,Na,2,20,；,磷酸胆碱,20,；析干,菌体,50,；反应体系中保持磷酸缓冲缓,pH7.0,、,0.2mol,L,，,30,，,28,小时产胞二磷胆碱,9.8g,L,，,对,5-CMP,收率,92.5,。,提取工艺,：,反应液离心除去菌体，用0.5molL KOH调pH8.5，上dowex 12（酸型）树脂，水洗后用,甲酸梯度洗脱,，在0.04molL甲酸洗脱液中收集产品，含胞二磷胆碱溶液上活性炭柱，丙酮-氨水溶液洗脱，减压浓缩，乙醇中结晶。,3、作用与用途,胞二磷胆碱是,卵磷脂,生物合成的,前体,。当脑功能下降时，脑组织内卵磷脂含量显著减少。,本品能促进卵磷脂生物合成,，兴奋脑干网状结构，特别是上行网状联系，提高觉醒反应，降低“肌放电”阈值，恢复神经组织机能，增加脑血流量和脑耗氧量，从而,改善脑循环和脑代谢,，,大大提高患者的意识水平,。,临床用于减轻严重脑外伤和脑手术伴随的意识障碍，,治疗帕金森氏症，抑郁症等精神疾患,。由于胞二磷胆碱是在,ATP存在下,参与磷脂的合成反应，故合用ATP可提高本品疗效；用于脑外伤，脑出血患者可合用止血剂和防水肿药；用于震颤麻痹可合用L-多巴；用于精神病可合用镇静药。,1、酶合成法：,啤酒酵母泥,CMP+磷脂酰胆碱 胞二磷胆碱,Ph8，28,2、粘性红酵母发酵法：,粘性红酵母,5-CMP,Na,+磷酸胆碱 胞二磷胆碱,pH7，30,3,、提取工艺：,离心 KOH 离子交换 洗脱,反应液 去菌体 洗脱液,Ph 8.5 甲酸,活性炭吸附 减压、浓缩 结晶,洗脱液 成品,丙酮、氨水洗脱,