DNA的粗提取与鉴定好实验流程图医学知识讲解培训课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。,2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，,3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解蛋白质，使提取出的DNA纯度较高,4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂；,5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细胞膜，同时也能使蛋白质变性；,6、在6075度条件下加温处理，蛋白质变性，而DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA,7、,二苯胺的沸水浴,能使DNA染成,蓝,色,根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案：,方案一：,30mL含DNA的滤液2mol/L NaCl同方向搅拌，DNA溶解加入蒸馏水DNA析出过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液,方案二：,30mL滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置1015分钟DNA滤液,方案三：,30mL滤液6075恒温保温1015分钟过滤获得DNA滤液,两种材料的DNA粗提取与鉴定过程,以鸡血为材料,以花菜为材料,释放组织细胞中的DNA，,粗提取DNA，,将粗提取的DNA进一步纯化，,鉴定提取物是DNA,鸡血细胞,植物组织,.0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。,.将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液,.取烧杯中的血细胞液约510ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向,快速,搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂,.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液,.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。,.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。,.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。,.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。,.取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却12天,.取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量的NaCl,充分研磨10分钟,.过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟,.取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀35分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。,.DNA的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步骤6、7，具体数据有一定的差异。,.鉴定,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,2mol/L,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,5、过滤取纱布上的滤物,纱布过滤,6、再次溶解DNA,2mol/LNaCl溶液,取滤物,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,7、加冷酒精使DNA析出（纯化）,冷酒精,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,DNA的鉴定,DNA的粗提取与鉴定,实验原理,DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同,DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同,DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同,DNA与二苯胺呈现蓝色反应,DNA粗提取,选择适宜材料,破碎细胞,DNA的溶解和析出,DNA的纯化,鉴定DNA,与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应,总结：,1.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是,A氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大,B人血也可代替鸡血进行实验,C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂,DDNA不能溶于酒精,2.在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是,A.DNA溶解于水 B 血细胞破裂，DNA释放,C稀释血液，防止凝固 D 有利于搅拌,3.若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是,A.利于DNA的溶解 B.分离DNA和蛋白质,C.溶解细胞膜 D.溶解蛋白质,4.在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是,A有利于溶解DNA B有利于溶解杂质,C减少DNA的溶解度 D减少杂质的溶解度,