医学早中期妊娠EB病毒感染的前瞻性研究课件.ppt

Page,*,无忧,PPT,整理发布,无忧,PPT,整理发布,Page,*,无忧,PPT,整理发布,*,*,早中期妊娠EB病毒感染的前瞻性研究,Page,2,附录,3,课题研究技术报告,2,课题研究工作报告,1,Page,3,课题研究的现状,3,课题研究的目的,2,课题研究的理由,1,课题研究过程,5,课题研究工作报告,1,课题研究的意义,4,课题研究工作报告,1,Page,4,有关妊娠妇女病毒感染的研究一直被国内外学者所关注，巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等能引起异常妊娠结局已被公认,。,随着社会的进步，科学的发展，满足人们日益增长的生殖健康需求，促进优生优育，降低出生缺陷，减少不良妊娠结局的发生，是我们医务工作者的重任。,我院为淄博市唯一一家三甲妇幼保健院，有充足的病员保障，优秀的人才梯队，先进的仪器设备，协调的合作科室和医院的各项扶持政策保证课题的顺利进行。,课题研究的理由,1,Page,5,本课题旨在研究早中期妊娠妇女,EB,病毒感染率，并用免疫学、分子生物学方法探讨早中期妊娠妇女,EB,病毒感染对妊娠结局的影响，包括引起早产、死胎、流产、胎儿畸形等,并初步探讨,EB,病毒对妊娠结局影响的可能机制，这将有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对妊娠结局的影响，为我们进一步研究不良妊娠结局的病因学提供依据，有望作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广。,课题研究的目的,2,EB,病毒在人群中普遍易感，但在优生优育方面的研究尚不足。国外已有研究针对妊娠期,EB,病毒感染的研究，并对引起不良后果的机制进行了初步研究，由于人种不同，基因易感性不同，对此我国尚未进行详尽研究。,国内的王玲、白玉青等分析了,13,例,EB,病毒感染孕妇的临床表现，以探讨妊娠合并病毒感染的特点。所述资料包含晚期妊娠。杨艳环、薛承岩等研究了腺病毒、人类微小病毒、巨细胞病毒、,EB,病毒等多种微生物感染与不良妊娠之间的关系，其结果显示多种微生物与不良妊娠之间关系密切，并未针对,EB,病毒单独进行研究。,课题研究的现状,3,挪威公共健康研究所,Eskild,教授等报告，,EB,病毒在妊娠早期的复活会导致妊娠时间缩短和死产。,宾夕法尼亚大学医学院的,Gary,、,Ronald,等研究了妊娠期妇女持续性,EBV,感染对胎儿的影响，结果显示妊娠期妇女,EBV,的复发感染并不能造成对胚胎的影响。,Icart,、,Didier,等的研究显示妊娠期,EBV,原发感染容易导致死胎、出生缺陷等不良后果。建议妊娠期间应进行,EB,病毒检测。,以色列的,Avqil,Ornoy,等研究了妊娠期间,EB,病毒感染对胚胎造成影响可能机制，其结果显示原发感染的,EB,病毒可以通过胎盘，通过胎盘感染引起胚胎损伤。,通过对,EB,病毒的活动性感染妊娠妇女的随访，同时与既往感染妊娠妇女（,IgM,阴性）的对比，发现,EB,病毒感染对不良妊娠的影响，为优生优育提供更多依据和保障，为我国的优生工作作出贡献。,通过早中期妊娠妇女,EB,病毒感染及其妊娠结局的调查，来研究,EB,病毒感染对妊娠结局的影响。有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对优生优育的影响。对不良妊娠结局的病因学研究，治疗和预后有重要参考价值，亦可作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广应用。,在进行,ELISA,检测的同时进行了,EB,病毒,DNA,的定量,PCR,检测，比较两种检测方法的利弊及应用价值，为临床优生优育检测方法的选择提供依据。,课题研究的意义,4,准备阶段：,自,2010,年八月开始申报课题，课题组即在,EB,病毒与优生优育的关系领域进行了大量的文献查阅，搜集资料，进行了预试验，进行了大量的前期准备工作，形成了课题研究的初步思路，科技局进行了查新，进行了课题立项申请。,具体实施阶段：,在课题立项后，在查阅了大量文献资料的基础上，确定了课题研究的具体思路、实施办法、研究对象和标本收集。以来我院门诊就诊的早中期孕妇为研究对象，收集临床资料，在检验科收集就诊者血液标本。并根据实验需要购买了相应的试剂。以检验科设备及人员为技术力量，进行相关数据的检测。,2011,年,8,月份后进行了检测对象的产后随访工作，并进行了数据、资料的整理，运用统计学软件进行了处理。,课题总结阶段：,根据实验的数据及资料，进行了实验总结，并进行了论文撰写，课题组人员在,山东医药,发表文章一篇，题目,不明原因早中孕期妊娠丢失妇女,EBV,抗体检测及分析,并进行了结题报告等的撰写。,课题研究过程,5,Page,10,材料与方法,3,前言,2,摘要,1,课题研究创新点,5,课题研究技术报告,2,课题研究成果及讨论,4,摘要,1,目的：,探讨早中期妊娠妇女,EB,病毒感染情况及其对妊娠结局的影响。,方法：,选取,2009,年,8,月至,2010,年,10,月在我院进行产前检查的孕妇,520,例，其中早期妊娠,302,例，中期妊娠,218,例，留取血液标本，用,ELISA,法进行,EB,病毒抗体的检测，用,PCR,方法进行病毒,DNA,含量检测。根据,ELISA,结果将孕妇分为三组：未感染组、原发感染组、激活感染组，随访并比较三组妊娠结局。,结果：,早中期妊娠,EB,病毒抗体阳性率为,89%,，原发感染者占,3.6%,，激活感染者占,10%,，提示,EB,病毒活动性感染主要为复发感染。在,ELISA,法与荧光定量,PCR,检测,DNA,的比较中发现,IgM,阳性者中,DNA,检测阳性者,15,例；,IgM,阴性者,DNA,检测阳性,21,例。随访妊娠结局发现原发感染组异常妊娠结局的发生率显著高于其他组（,P0.5,）。抗体检出时间与异常妊娠发生的时间显示自然流产的发生率与早期妊娠感染,EB,病毒有关。,结论：,早中期妊娠,EB,病毒近期感染与异常妊娠结局有关，早期妊娠,EB,病毒的感染危险性较大。,EB,病毒,DNA,检测法并不能代替,ELISA,抗,体检测法对,EB,病毒感染的监控。,关键词：,前瞻性研究 妊娠,EB,病毒感染 妊娠结局,Abstract,Objective,Our objective was to evaluated the positive rate of EBV seropositivity in early and mid-term pregnant women and effect on pregnant women and fetus.,Methods,ELISA was used to detect the antibody of EBV and PCR was used to detect the pathogens in 520 cases of early and mid-term pregnant women.All the pregnant wemen were devided into 3 groupsBy ELISA outcomes:noninfection group,primary infection group and re-active infection group.following-up survey of the pregnancy outcomes of the three groups were compared.,Results,The results showed that the positive rates of EBV infection was eighty-nine.The positive rate of primary infection was3.6%and re-active infection was 10%.In the ELISA method with fluorescence quantitative PCR for detection of DNA comparable to that found in IgM positive DNA test was positive in 15 patients;IgM negative DNA test was positive in 21 cases.Follow-up of pregnancy outcome findings of primary infection group with abnormal pregnancy outcome incidence was significantly higher than other groups(P 0.5).,Conclusion,This study revealed a significant relation between Spontaneous abortion and active infection of EBV in the early pregnancy.And suggests that EBV infection during pregnancy should be considered as a risk indicator in the anagement of pregnancy.Detection of EB virus DNA and is not a substitute for the ELISA antibody detection method for EB virus infection surveillance.,Keywords:,Prospective study,；,Early and mid-term pregnancy,；,EBV infection,；,Pregnancy outcome,前言,2,EB,病毒（,Epstein-Barr virus),是,1964,年,Epstein,和,Barr,在研究非洲儿童的恶性淋巴瘤病因时，从瘤细胞培养中发现的一种新病毒。为双股线性,DNA,病毒，属,疱疹病毒亚科，又称为人疱疹病毒,4,型，在人群中广泛存在，成人抗体的阳性率达,90%,以上。大多数人在幼儿期感染，多无明显症状。人类是其唯一天然宿主，感染的靶细胞主要是,B,淋巴细胞。亦可感染腮腺管、咽部、宫颈等处的上皮细胞,。在发展中国家，大部分人群在初次感染,EB,病毒后没有相关的临床表现，而且感染人群极其普遍，当这些携带病毒的人群与未感染者之间经传播途径,(,唾液传播,),，如接吻、共同进餐时则造成感染的发生。,EB,病毒感染细胞有两种形式，即潜伏性感染和增殖性感染。增殖性感染感染病毒大量增殖，细胞破坏，出现临床症状。潜伏感染病毒不增殖，也不破坏细胞，病毒与宿主细胞处于暂时平衡状态，病毒基因组的表达受到抑制，不引起病毒血症，传统上认为不会造成宫内感染。病毒基因组的一部分可整合于宿主细胞的,DNA,中，导致细胞转化、永生化。在一定条件或某些诱导因子（发热、机械损伤、免疫力低下等）作用下，潜伏基因组被激活转为增殖性感染。,妇女妊娠期各种不良因素都可能对胚胎和胎儿发育造成影响，尤其是妊娠期的感染性疾病以及用药都可能使胚胎发育异常，使胚胎出现损伤或死亡。已有大量研究针对感染引起的异常妊娠结局，尤其是妊娠合并病毒感染与异常妊娠结局的相关性。,病毒感染与异常妊娠结局及出生缺陷密切相关已成定论。有关妊娠妇女病毒感染的研究一直被国内外学者所关注。巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等能引起异常妊娠结局已被公认。,已有文献显示,EB,病毒能够通过生殖道进行传染；有研究称,EB,病毒与不孕症有高度相关性，通过免疫抑制等作用导致精卵结合失败及阻止受精卵着床。国外已有文献报道,EB,病毒对妊娠的影响，挪威公共健康研究所,Eskild,等报告，,EB,病毒在妊娠早期的复活会导致妊娠时间缩短和死产，其他相关文献较少。,本课题试图通过早中期妊娠妇女,EB,病毒感染及其妊娠结局的调查，来研究,EB,病毒感染对妊娠结局的影响。本研究将有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对优生优育的影响。是对不良妊娠结局的病因学研究，对于治疗和预后有重要参考价值。可作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广应用，为优生优育提供更多依据和保障，为我国的优生工作作出贡献。,材料与方法,3,研究方法：,本研究为前瞻性研究,结合文献调研,临床流行病学调查及数理统计等方法对淄博市保健院就诊的早中期妊娠妇女的,EB,病毒感染情况及妊娠结局进行研究,对比分析各组数据研究,EB,病毒对早中期妊娠的影响。,研究对象的选择：,2009,年,8,月至,2010,年,10,月在淄博市妇幼保健院进行产前检查并计划在本院分娩的孕妇,520,例。其中早期妊娠,302,例，中期妊娠,218,例。年龄最小,23,岁，最大,36,岁，平均,28.5,岁，均为单胎妊娠，所有研究对象按要求填写流行病学调查表。,研究对象确立的诊断标准,:,(1),早期妊娠,:,妊娠,12,周末以前。,(2),中期妊娠,:,第,13,至,27,周末称为中期妊娠。,标本收集及检测：,均抽取静脉血，分离血清，,ELISA,法检测,EB,病毒,IgG,、,IgM,；同时分离淋巴细胞进行,EBV-DNA,荧光定量,PCR,检测。,分组：,按,EB,病毒,ELISA,结果将研究对象分为,3,组：,IgM,阴性包括未受感染者、既往感染者；,IgM,阳性者,IgG,阴性者，即原发感染者；,IgM,阳性者,IgG,阳性者，即激活感染者；,研究对象的排除,:,以上标本同时,ELISA,进行,TORCH,检测（弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒以及乙型肝炎、艾滋病、梅毒、丙型肝炎），排除其他病原体感染引起的异常妊娠结局。排除,RF,对,ELISA,检测的干扰因素。怀疑染色体引起的异常妊娠者做染色体检查，以排除器质性、遗传性、功能性、及其他感染性因素等导致的异常妊娠结局,。,质量控制：,全部实验设立阴阳性对照及空白对照，质控品由检验科统一购买，全部检验由专人操作，实验结果与临床资料分别由专人收集、分析。,统计学处理：,采用,SPSS17.0,软件分析数据。,X2,检验进行组间异妊娠结局发生率的分析，对可能混杂因素的分析用,Mantel Haensze,分层分析，分析指标采用,RR,、,OR 95,可信区间、,X2MH,、,P,值。必要时采用,Fisher,精确概率法,.,随访,：以统一调查表随访、记录所有研究对象的妊娠结局。各种异常妊娠结局判断依据如下,自然流产：妊娠于,2 8,周前终止，体重,0.05,）。职业危险性分布差异显著（,P0.05,组与组比较得分无统计学意义。,表,4-2,不同居住地孕妇异常妊娠结局的比较,居住地 组别 正常妊娠结局 异常妊娠结局 合计,外地居住史 ,IgM-125 6 131,IgM+12 9 21,合计,137 15 152,本地居住 ,IgM-362 4 366,IgM+21 8 29,合计,383 12 395,合计,493 27 520,注：,2,smh,=0.952,查卡方界值表,P0.05,组与组比较得分无统计学意义。,表,4-3,不同文化程度孕妇异常妊娠结局的比较,文化分组 组别 正常妊娠结局 异常妊娠结局 合计,初中及 ,IgM-119 1 120,以下 ,IgM+32 2 14,合计,121 3 134,高中至 ,IgM-365 16 401,大学 ,IgM+34 8 22,合计,399 24 426,合计,493 27 520,注：,2,smh,=0.625,查卡方界值表,P0.05,组与组比较得分无统计学意义。,表,4-4,丈夫吸烟孕妇异常妊娠结局的比较,吸烟史 组别 正常妊娠结局 异常妊娠结局 合计,吸烟,5 IgM-115 9 119,年以上 ,IgM+56 5 61,合计,171 14 180,不吸 ,IgM-206 8 334,烟者 ,IgM+23 5 28,合计,229 13 342,合计,393 27 520,注：,2,smh,=1.626,查卡方界值表,P0.05,组与组比较得分无统计学意义。,表,4-5,丈夫孕前饮酒孕妇异常妊娠结局的比较,丈夫饮酒史 组别 正常妊娠结局 异常妊娠结局 合计,孕前 ,IgM-135 8 143,饮酒者 ,IgM+23 5 28,合计,168 13 171,孕前未 ,IgM-315 8 323,饮酒者 ,IgM+28 6 34,合计,343 14 357,合计,493 27 520,注：,2,smh,=2.302,查卡方界值表,P0.05,组与组比较得分无统计学意义。,表,4-6,危险性职业孕妇异常妊娠结局的比较,职业分组 组别 正常妊娠结局 异常妊娠结局 合计,危险 ,IgM-106 10 116,职业 ,IgM+34 8 42,合计,190 18 158,非危 ,IgM-268 4 272,险职业 ,IgM+35 5 40,合计,303 9 312,合计,493 27 520,注：,2,smh,=3.575,查卡方界值表,P0.05,组与组比较得分有统计学意义。,早、中期妊娠妇女的血清,EB,病毒,IgM,、,IgG,检测结果,:,ELISA,用于,EB,病毒感染的血 清学诊断具有较高的特异性和敏感性。本研 究 以,ELISA,将研究对象分为未受感染、原发感染和激活感染组其中,IgG,阳性者占,89%,，同时,IgM,阳性者占,10%,，其中,IgM,、,IgG,均阴性者占,2.7%,，,IgG,阴性，,IgM,阳性者占,10%,，提示,EB,病毒在人群中广泛感染，活动性感染者中以激活感染为主，妊娠期原发感染所占比例较小。其感染率如表,2-9,所示，基本与文献相符。,302,例早期妊娠孕妇血清,EB,病毒,IgG,阳性者,271,例，阳性率为,93%,；,IgM,阳性者,15,例，阳性率,8%,；其中,IgM,、,IgG,均阴性者即未受感染者,6,例，占,3.3%,；,IgM,、,IgG,均阳性者即激活感染者,10,例，占,5%,；,IgM,阳性者即原发感染者,3,例，占,1.1%,。活动性感染者,12,例占,6%,。,218,例中期妊娠孕妇血清,EB,病毒,IgG,阳性者,115,例，阳性率为,96%,；,IgM,阳性者,12,例，阳性率,10%,；其中,IgM,、,IgG,均阴性者即未受感染者,2,例，占,1.6%,；,IgM,、,IgG,均阳性者即激活感染者,12,例，占,10%,；,IgM,阳性者即原发感染者,3,例，占,2.5%,。活动性感染者,15,例占,12.5%,。,表,4-7,不同孕期抗体阳性率统计,抗体类别 不同孕期阳性例数（,%,）,IgG IgM,早期 中期 合计,未受感染,18,（,3.3,）,2(1.6)20,（,2.7,）,既往感染,+232,（,90,）,103(86)265,（,79,）,原发感染,+3,（,1.1,）,16(2.5)19,（,3.6,）,激活感染,+59,（,5,）,55,（,10,）,22,（,10,）,合计,302 218 520,注：未感染组包括既往感染,+,组别,异常妊娠结局发生率及组间比较,：,表,4-8,三组随访结果比较,随访 正常妊娠 异常妊娠例数,例数 例 数 自然流产（,%,）早产（,%,）死胎（,%,）先天缺陷（,%,）合计（,%,）,未感染,256 233 1(9.5)5,（,25.6,）,1 1 2,（,16.7,）,原发感染,12 5 5(37.5)6(23.0)0 2 11,（,35.5,）,激活感染,127 115 9(9.5)7(2.5)1 0 17,（,18.8,）,合计,ORmh 3.35 0.85 0.31 0.35 5.24,95%,可信区间 （,0.88-9.62,）,(0.96-8.63),注：与组比较,p0.05.IgM,阳性组组（,+,）与组比较存在职业危险性差别，,Mantel-Haenszel,分层,X,2,检验示，,P0.05,。,组别,异常妊娠结局发生率及组间比较：三组共发生自然流产,15,例，占,5,：早产,18,例，占,4.7%,；死胎,1,例，占,0.3%,。先天缺陷,3,例占,0.52%,。这四种异常妊娠结 局 共 发 生,30,例，占,8%,。各组异常妊娠绪局发 生 情 及比较结果列于表,2-10,。,两分类变量间关联程度检测其危险度，由表,4-8,可 见，原发感染组异常妊娠的发生率均显著高于未感染组（,P0.05),。,感染时间与异常妊娠结局的关系,293,例抗体阳性者抗体检出时间与异常妊娠结局发生的关系列于表,4-9,。,13,例早期妊娠活动性感染者出现自然,10,例占,68%,，显著高于中期妊娠组活动性感染者和未感染者的总和,1,（,0.7%,）,(P0.05,）。,表,4-9,抗体检出时间与异常妊娠结局的关系,感染 异常妊娠例数,类型 例 数 自然流产 早产 死胎 先天缺陷 合计,早期 未感染,162 4 8 1 1 8,活动性感染,13 10 3 0 2 10,中期 未感染,103 1 4 0 0 5,活动性感染,15 0 3 0 0 7,合计,293 15 18 1 3 37,OR 2.35 0.85 0.31 0.24 4.25,95%,可信区间,0.89-9.66 0.99-7.88,检出时间,荧光定量,PCR,检测,EB,病毒,DNA,，并且与,ELISA,法结果比较,ELISA,检测,EB,病毒抗体是临床上常用方法，也是比较可靠的方法，但是由于,EB,病毒存在潜伏期，且产生抗体需要一定时间，,ELISA,无法检测窗口期内体内病毒的存在；,抗体在体内持续时间较长，激活感染的情况下,ELISA,法无法发现病毒的存在，所以依然存在方法上的缺陷，而由于,EB,病毒感染多为无症状感染，切潜伏期较长，如果近期内感染过，却无法检测出,EB,病毒,DNA,，,ELISA,法却能发现近期内感染病毒。,IgM,阳性通常被认为是病毒近期感染或病毒在体内复制的标志，所以将研究对象血清分为,IgM,阳性者和,IgM,阴性者，同步进行,PCR,检测，其检测结果如下表所示：,IgM,阳性,48,例中,PCR,阳性者,15,例占,2.07%,；而,IgM,阴性,442,例中，,PCR,阳性,21,例占,4.03%,，而在所有的样本中，,IgM,阳性率为,9.2%,，而,PCR,阳性率为,6.1%,。,IgM,阳性与,IgM,阴性者,PCR,结果均在,2103,个拷贝以内，两组数据显示无统计学意义（,P0.05,）。,表,4-10,IgM,阳性者和,IgM,阴性者,PCR,检测结果,组别 例数,PCR,阳性例数（,%,）,IgM+48,（,9.2,）,15,（,2.07,）,IgM-442,（,85.8,）,21,（,4.03,）,合计,520 36,（,6.1,）,讨 论,均衡性试验,本实验用,ELISA,法将研究对象分组，分为未感染组、原发感染组、激活感染组，为保证研究的可信性，所有研究对象均在入院时填写流行病学调查表，了解与异常妊娠结局有关因素的暴露情况，三组研究对象的年龄、文化程度、丈夫吸烟量、孕前丈夫饮酒，居住地、异常妊娠结局史、职业危险性等主要影响因素的均衡性检验，其中危险与非危险职业的分布差异显著（,p0.05,）。,实验同时排除了其他可控因素的影响如染色体的影响，研究显示在早期妊娠丢失者中，有三分之一属于染色体问题，也容易引起其他较严重的妊娠后果如胎儿先天缺陷、流产、死胎等，为此严重异常妊娠结局者我们回顾性进行染色体调查，排除了染色体的影响因素。孕检者所有标本同时进行弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒的血清学检测，入院孕检者全部检验乙型肝炎、丙肝、艾滋病、梅毒。并根据孕妇的其他相关检查排除器质性病变等引起的异常妊娠结局。,早中期妊娠,EB,病毒感染率调查,EB,病毒是,疱疹病毒中的一种亲淋巴细胞的病毒,被发现已有,40,余年，在人群中的感染极为普遍，人类是其唯一天然宿主。,EB,病毒的感染率及发病与社会经济因素等密切相关，,E B,病毒初次感染年龄在发展中国家以,2,6,岁以下低年龄段为主，发达国家感染年龄延迟，以青少年时期为主。发达国家多在青少年时期感染，阳性率在,80%,以下，我国及其他发展中国家,EB,病毒感染集中在婴幼儿期，,90,年代的调查显示阳性率可达,100%,以上。,我们的实验显示早中期妊娠成人女性既往感染阳性率在,89%,，可能是随着社会经济的发展，人们健康意识的提高，生活方式的改变，且研究对象多为城市人口，阳性率有所下降。其中,IgM,阳性率为,9.2%,，说明早中期妊娠妇女多在妊娠以前感染过,EB,病毒，妊娠期后，随着体内免疫特点的改变，整个机体出现免疫抑制状态对病原体易感，从而导致潜伏,EB,病毒的复发，另一方面可能是人多在早期感染过,EB,病毒，而体内的,IgG,抗体低度下降，不能起到很好的保护作用，既往感染产生的,IgG,属于保护性抗体，所以多出现感冒症状或无症状，在大多数人中不能引起严重的后果。而原发感染和未感染只占,11%,，基本与文献相符。,我们的结果显示新生儿,IgG,阳性率为,5%,，,IgM,没有阳性，说明了,EB,病毒感染的年龄特点，随着年龄的增长，暴露感染的几率增大。而很多严重疾病的发生，如致死性单核细胞增多症、,EBV,相关性嗜血细胞综合征等都是婴幼儿早期感染后引起的严重疾病，研究提示,EB,病毒感染多在出生后感染，我们应该在生活习惯、感冒后及时检测,EB,病毒，从而防治,EB,病毒的早期发病,。,EB,病毒可以在上皮细胞及淋巴细胞复制，可在唾液腺及唾液中长期存在，持续排毒，口,-,口传播是其重要传播途径，所以人群普遍易感。,EB,病毒感染可导致免疫功能紊乱，发生与免疫系统功能紊乱相关的多种疾病如淋巴瘤、传染性单核细胞增多症及类风湿关节炎等。其感染和发病呈明显的地域特点，,EB,病毒感染引起的鼻咽癌多发生在广东，淋巴瘤在西方国家多见。,EB,病毒感染率及发病与社会经济因素等密切相关，随着社会经济的发展及人们健康意识的提高、生活方式的改变，,EB,病毒的流行特征也会出现一些新的变化，所以,EB,病毒感染的防治任务艰巨，尤其是早期检测早期防治，延缓感染年龄，减轻感染后引起的严重不良后果,。,ELISA,法及荧光定量,PCR,对检测,EB,病毒感染的作用,EB,病毒感染后，目前临床上最常用的检测的方法以血清学抗体的检测较为准确方便快速。病毒的,IgM,，,IgG,分别出现于疾病的急性期和恢复期，,IgM,升高表现近期感染或病毒持续活动状态，,IgG,可终生存在，为既往感染的标志，故早期,EBV IgM,检测是,EB,病毒感染可靠诊断指标之一。,EBV,感染细胞有两种形式，即潜伏性感染和增殖性感染,病毒由潜伏性感染渐变为增殖性感染。,EBV,潜伏感染仅少量病毒复制，可有少数细胞自发进入溶解感染状态,溶解感染状态下，则有大量病毒颗粒产生,而血清学检查抗体水平升高,.,EB,病毒一般潜伏期为,4,7,周由于患者对,EBV,抗原不足的血清学反应，在获得性免疫陷综合征,(AIDS),患者或骨髓移植,(BMT),受者免疫减损的体中,EBV,抗体是无用的。因此，在这些患者进行,EBV,核酸测定和定量对于,EBV,负荷的估量是很重要的。实时,PCR,用作,EBV,负荷的定量分析在先前已有报道。为了监测,EBV DNA,的负荷，一般采用全血或外周血单个核细胞，因为在外周血中,EBV,与白细胞高度相关。,荧光定量,PCR,检测,EB,病毒具有特异性好，敏感性高，快速简便且能早期检测病原体核酸的优点。,ELISA,检测,EB,病毒抗体是临床上常用方法，也是比较可靠的方法，但是由于,EB,病毒存在潜伏期，且产生抗体需要一定时间，,ELISA,无法检测窗口期内体内病毒的存在；抗体在体内持续时间较长，激活感染的情况下,ELISA,法无法发现病毒的存在，所以依然存在方法上的缺陷，而由于,EB,病毒感染多为无症状感染，切潜伏期较长，如果近期内感染过，却无法检测出,EB,病毒,DNA,，,ELISA,法却能发现近期内感染病毒。,IgM,阳性通常被认为是病毒近期感染或病毒在体内复制的标志，,本实验将两种试验方法同时进行，比较两者的优势,，研究结果显示，两种试验方法并不能相互替代，各有利弊，,ELISA,法对于监测近期感染敏感性较高，而对于是不是体内有病毒复制并不敏感，而荧光定量,PCR,对于活动性感染的敏感性较高，能够准确及时的发现体内潜伏病毒和再激活的病毒，在对孕妇的,EB,病毒感染情况的检测中，荧光定量,PCR,不能替代,ELISA,法，在一定情况下建议两者结合使用，定将取得较好的效果。,EB,病毒感染对妊娠结局的影响,妊娠期感染性疾病可能导致的不良妊娠包括流产、胎儿异常、早产、生长受限、胎死宫内、生后异常。本次调查分析表明，不良妊娠与妊娠期,EB,病毒感染显著相关，尤其是妊娠,EB,病毒感染后自然流产的发生率达,37.5%,，妊娠早期感染者危险性更大。,妇女妊娠期免疫系统低下，是各种传染性疾病的易感者，一旦发生了感染性疾病，既要考虑对胚胎及胎儿的影响，又要考虑到因妊娠用药治疗受到的限制，所以预防很重要。孕妇妊娠期一旦发生,EB,病毒感染，要结合检查结果，尤其是血清学诊断和,DNA,检查。考虑到疾病对胚胎、胎儿的影响，综合做出判断，以减少不良妊娠的发生率。,EB,病毒感染对妊娠结局影响的可能机制,EB,病毒主要通过唾液传播，感染后可终身携带病毒，现今为止还没有有效的疫苗等措施可以有效预防。,EB,病毒的感染可导致免疫系统紊乱，导致一系列相关的疾病。它们主要通过病毒编码蛋白影响淋巴细胞,这些被感染的淋巴细胞大量进入血液循环而造成全身感染，,EBV,感染性疾病按病程可分为急性感染和慢性感染。以前认为,EB,病毒只感染,B,淋巴细胞，现在已明确还可以感染,T,细胞，,NK,细胞，单核细胞，上皮细胞及内皮细胞等多种细胞。绝大多数感染,尤其是儿童感染,是短暂、轻微且无症状的,成人的原发感染较儿童严重,病毒可能终生潜伏,但很少留有后遗症。感染患者的预后，主要取决于,EBV,感染的细胞类型和宿主的免疫状态。,资料显示,E B V,在人体中可反复激活的过程中容易发生基因变异，形成不同的血清抗体谱，引发免疫反应，从而影响淋巴细胞相应的生物学行为，改变其功能活动。严重者可使淋巴细胞染色体发生突变或易位。文献显示，,EBV,可以感染上皮细胞，潜伏在子宫颈上皮细胞中，有研究表明,EBV,可以参与到宫颈黏液中改变宫颈黏液的理化性质，可能导致无法实现受精，同时，使受精卵的分裂过程受到影响，这些都可能是引起感染,EB,病毒后发生自然流产的因素。,如表,3,所示，在所有抗体阳性者中，早期妊娠活动性感染者中异常妊娠结局的发生率明显高于中期妊娠抗体阳性者，其中自然流产的发生率最高。虽然在中期妊娠抗体阳性例数高于早期妊娠抗体阳性者，可能与妊娠时间长，感染病毒的几率大，并且在妊娠早期感染后中期妊娠,IgG,抗体依然可以阳性有关。但早期妊娠,IgM,抗体阳性者一定为近期或活动性感染，除少数潜伏感染（多可引起肿瘤等严重疾病）外多数人,IgM,抗体在感染数周后即可在外周血循环中消失，由此表明，早期妊娠期间感染,EB,病毒可能会引起流产等异常妊娠结局。,妊娠期感染往往是多种微生物的混合感染，主的病原体有,TORCH,、,HBV,、微小病毒、支体、梅毒螺旋体、念珠菌等。主要经生殖道上行感染引起胎膜炎、脐带炎、胎盘炎，导致产褥期感染、早产胎膜早破、死胎、死产、畸形等不良妊娠结局及新生肺炎、败血症、脑炎等感染性疾病。母体菌血症或毒血症时，病原体可经血流侵人绒毛间隙，在胎盘潜隐制垂直传播给胎儿，引起胎儿的感染。,本实验已经通过乙肝五项、,TORCH,检测及染色体检查，排除这些影响因素，但是,EB,病毒引起的不良妊娠结局的致病机制可能与这些病原体的感染机制相似，有文献显示,EB,病毒可以通过性接触传播，引起宫颈病变。能不能通过上行感染引起宫内感染，尚缺乏研究。,近年来，随着微生物学与围产医学的进展，对宫内感染的病原体及其对妊娠结局的影响已有较详尽研究，希望今后能有更多的研究来证实早中期,EB,病毒感染对异常妊娠结局的影响，并解释其相应的机制。,由于,EB,病毒在我国的感染率较高，成人中可达,90%,以上，可以引起鼻咽癌、传染性单核细胞增多症、慢性活动性,EBV,感染、淋巴瘤等严重疾病，但对孕期感染的影响还未得到充分的研究，本研究显示早期妊娠感染后可增加自然流产的发生率，影响妊娠结局，由于样本例数及时间限制，此结论仍需大样本及进一步的实验来证明。,人群对,EB,病毒普遍易感，其感染在不同的年龄不同的地区，不同的性别、不同的社会阶层、不同的季节都有差异。而我们还缺乏对于,EB,病毒在本地区的流行病学研究，我们将通过进一步的收集资料，扩大样本完善,EB,病毒的流行病学研究，并通过进一步的实验来探讨其在优生优育方面的影响和影响机制。,课题研究创新点,5,微生物引起不良妊娠的结论已得到广泛认可，很多检测项目已在临床广泛应用，如临床已常规检测,TORCH,，但是临床仍有许多不良结局妊娠的病因没有得到确认。,巨细胞病毒等对优生优育的影响已经得到证实，,EB,病毒与巨细胞病毒同属于疱疹病毒科，人群对其普遍易感，但其在优生优育中的影响还没有得到充分研究。“早中期妊娠,EB,病毒感染的前瞻性研究”一题，通过对,EB,病毒的感染和再激活妊娠妇女的随访，同时与未感染,EB,病毒妊娠妇女的对比，发现,EB,病毒感染对不良妊娠的影响，为优生优育提供更多依据和保障，为我国的优生工作作出贡献。,首次对,EB,病毒在早中期妊娠妇女中的感染情况进行调查有助于了解本地区,EB,病毒在一定人群中的感染率，为进一步防治，进一步减少,EB,病毒感染对孕妇和新生儿的影响提供依据。,本课题的创新点在于：,本课题同时用,ELISA,法与荧光定量,PCR,进行,EB,病毒感染的检测，分析比较了两种方法的利弊和优势，对于,EB,病毒检测的方法学选择提供依据。,本实验在一定程度上探讨了孕妇,EB,病毒感染后对妊娠结局影响的可能机制，为以后进一步研究,EB,病毒感染及作用机制提供实验证据。,参考文献：,1.Griffim BE.Epstein-Barr vi rus(EBV)and human disease:facts,opinions and problems.Mutat Res,2006,462(2 3):395-405.,2.Kawa K.Diagnosis and tre atment of Epstein _Barrvirus _associated natural killer cell lymphoprol iferative disease.I nt J He_matol,2003,78(1):24-31.,3.Kimura H,，,Morishima T,，,Kanegane H,，,et a1,Prognostic factors ofchronic,active Epsteir Barr v irus infection J,J Infect Dis,，,2003 187(3),：,5 27 533.,4.Straathof KC,Bol lard CM,Rooney CM,et al.Immunotherapy for Epstein Barr virus _associated cancers in children.Oncologist,2003,8(1):83-98.,5,Savoldo B,，,Huls MH,，,Liu zS,，,et a1,Autologous EpstdmBarus(EBV)specific cytotoxic T cells for the treatment of persistent active EBV infectionJ,Blood,，,2004,，,100(12),：,40594066,6.Yamashita N,，,Kimura H,，,Morishima T Virological aspects of Epstein-Barr