动物细胞融合和单克隆抗体课件.ppt

<p>单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,动物细胞融合与单克隆抗体,我学习 我思考 我应用,1970年科学家用发绿色荧光的染料标记小鼠细胞表面的蛋白质分子，用发红色荧光的染料标记人细胞表面的蛋白质分子，将小鼠细胞和人细胞融合。这两种细胞刚融合时，融合细胞一半发绿色荧光，另一半发红色荧光，在37*C下经40min,两种颜色的荧光均匀分布。,植物体细胞杂交,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,原生质,体融合,杂种细胞,组织培养,杂种植株,去细胞壁,纤维素酶、果胶酶,化学法,物理法,动物细胞A 动物细胞B,诱导，融合,2个完整的杂交细胞AB,有丝分裂,（膜融合、,诱导方法,质融合、,核融合）,融合细胞,动物细胞融合过程：,1.诱导融合的方法：,2.动物细胞融合的原理：,3.动物细胞融合基本过程是：,生物方法：灭活的病毒。化学物质：如：聚乙二醇 物理方法：离心、振动、电激等,细胞膜的流动性,分散成单个细胞,后诱导细胞融合,动物细胞融合,制备单克隆抗体,4.动物细胞融合最重要的用途是：,形成杂交细胞,获得杂种植株,结果,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（,离心、振荡、电刺激,）,化学（,聚乙二醇,）,诱导方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原 理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较,方法步骤,酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合，形成杂种细胞后培养成杂种植株,分散成单个细胞后诱导细胞融合,二、单克隆抗体,抗体的传统生产方法及缺陷是什么？,传统制备抗体的缺陷：,产量低、纯度低,，且抗体的,特异性差,。,思 考：为什么有这些缺陷，B淋巴细胞有什么特点？,B淋巴细胞特点,每一个,B淋巴细胞,只能产生一种,特异性抗体。,B淋巴细胞受,抗原,刺激后，可以,产生,抗体,。,动物体内的B淋巴细胞可以产生,百万种以上的抗体,，,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体,称为,单克隆抗体,1、概念,:,大量生产,单克隆抗体思路,B淋巴细胞具产生抗体的功能,骨髓瘤细胞具无限增殖的特性,利用,细胞融合的技术,将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的,杂交瘤细胞,利用,动物细胞培养技术,大量培养杂交瘤细胞,B淋巴细胞,（效应B细胞）,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种,类型,？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞,B淋巴细胞-B淋巴细胞,B淋巴细胞-,骨髓瘤细胞,多种,杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,克隆上述杂交瘤细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，,检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,2、单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承,双亲细胞,的遗传特性，既能,产生专一抗体,又能,无限增殖,。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高且可大量制备,根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。淋巴细胞中有这2种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。,思考,方法:,将这2种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，然后在培养液中加入氨基喋呤。,由题意可知，细胞融合后的杂交瘤细胞合成DNA有D和S两条途径，且可在培养基上无限增殖。在培养基内加入氨基喋呤，骨髓瘤细胞由于只有D途径合成DNA，无法增殖，将其去除，剩下淋巴细胞和杂交瘤细胞，继续培养，由于淋巴细胞不能无限增殖，培养一段时间后，自然去除，只剩下杂交瘤细胞，正是我们想得到的结果。,原理分析：,3.单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,优点：,准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,“生物导弹”单克隆抗体药物,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）,A经过免疫的B淋巴细胞B不经过免疫的T淋巴细胞,C经过免疫的T淋巴细胞D不经过免疫的B淋巴细胞,A,2、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）,A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞,B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞,C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,D筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体,B,谢谢,再见,</p>