消毒灭菌与细菌的分类.ppt

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,资料仅供参考,不当之处，请联系改正。,教学要求,【,掌握,】,消毒、灭菌等基本概念,常用消毒灭菌方法及适用范围,细菌种、属、菌株、标准菌株的概念，细菌的命名原则和书写规则,【,熟悉,】,消毒灭菌的应用,【,了解,】,影响消毒灭菌效果的因素,消毒灭菌技术发展历史,1847,年 匈牙利人塞麦尔维斯：,漂白粉洗手降低院内产褥热死亡率,1867,年 英国人李斯特：,发明石碳酸消毒法，,“腐烂是微生物引起的”,1886,年 德国人伯格曼：蒸汽灭菌法,1890,年 美国人哈斯特：戴橡胶手套,李斯特,1998,年,4,月，深圳市妇女儿童医院共计手术,292,例，发生感染,166,例。致病菌为龟型分枝杆菌,。,感染原因是浸泡刀片和剪刀的,戊二醛配制错误,，错把,2%,戊二醛稀释,200,倍。,2005,年,12,月，上海第九医院专家到安徽宿州市立医院为,10,例白内障患者实施手术，结果均感染绿脓杆菌，其中,9,名患者单侧眼球被摘除。感染原因是手术器械不能做到,一人一用一灭菌,，全用,75%,的乙醇浸泡手术器械，达不到灭菌要求。,2009,年,10,月广东潮阳区谷饶中心卫生院,18,例剖腹产产妇发生切口感染。原因手术器械等清洗不彻底，手术用刀片、剪刀、缝合线等用戊二醛浸泡，不能达到灭菌效果。,院内感染个案,消毒灭菌是,减少院内感染,发生的关键,概念,灭菌,消毒,防腐,清洁,无菌及无菌操作,概念,视频,:,供应室消毒灭菌,概念,灭菌,(,sterilization,),杀灭物体上,所有微生物,的方法，包括,芽胞,在内的全部病原微生物和非病原微生物。,消毒,(,disinfection,),杀死物体上,病原微生物,，不一定能杀死芽胞或非病原微生物的方法。,微生物，包括有哪些？,概念,防腐,(,antisepsis,),防止或抑制细菌生长繁殖的方法。,细菌一般不死亡。,清洁,（,cleaning,）,通过除尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。,彻底清洗,是保证消毒,或灭菌成功的关键,概念,“,无菌物品,”,进入人体内部手术器械、注射器、导管；,实验室所用培养基、试剂、器材等。,概念,无菌,(,asepsis,),：,不含活菌的意思。,无菌操作,（,aseptic technique,),：,防止微生物进入机体或物品的操作技术。,进行微生物实验、外科手术及医疗技术操作等过程，均需进行严格的无菌操作。,擦拭法,高压蒸汽灭菌法,常用消毒灭菌方法,物理法,化学法,浸泡法,熏蒸法,喷雾法,热力法,生,物,净,化,法,辐射法,燃烧法,烤箱法,煮沸法,干热法,湿热法,日光曝晒法,紫外线灯照射法,电离辐射法,消毒灭菌的方法,物理消毒灭菌法,热力灭菌法,辐射杀菌法,滤过除菌法,干燥与低温抑菌法,化学消毒灭菌法,原理及分类,消毒灭菌的方法,热力灭菌法,（,1,）,干热灭菌,a.,焚烧,b.,烧灼,c.,干烤,（,2,）,湿热灭菌,a.,煮沸法,b.,巴氏消毒法,c.,间歇灭菌法,d.,高压蒸汽灭菌法,利用热力破坏微生,物的蛋白质、核酸、,细胞壁和细胞膜，,从而导致其死亡。,干热灭菌,a.,焚烧：,b.,烧灼：,红外电热灭菌器,方法：对废弃物可直接在焚烧炉内焚毁；培养用的试管或烧瓶，当开启或关闭塞子时，将试管（瓶）口或塞子，在火焰上来回旋转,2-3,次，实验室接种环烧灼。,适用范围：污染的废弃物、病理标本、带脓性分泌物的敷料和纸张等的处理，实验室接种环的消毒灭菌；某些金属器械、搪瓷类物品急用时。,视频：灭菌操作,干热灭菌,c.,干烤,：,160,170 2,小时。,适用于高温下不变质、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器等。,d.,红外线,适用于医疗器械、食具,烤箱,湿热灭菌比干热灭菌效力大,（,1,）菌体蛋白较易凝固；,（,2,）,穿透力,大；,（,3,）潜热。蒸气变为液态的潜热,穿透力和灭菌效果比较,湿热灭菌,a.,巴氏消毒法,pasteurization,：,用较低温度杀灭液体中的病原菌、同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒,方法,:71.715-30s,，,常用于,牛奶,和酒类等的消毒。,湿热灭菌,b.,煮沸法：,1005min,杀死繁殖体；,1001-2h,杀死芽胞,水中加,2%,碳酸氢钠，可提高沸点到,105,c.,流动蒸汽灭菌法,:,是一种简单、经济、应用最早的消毒方法之一。适用于耐湿、耐高温的物品。,湿热灭菌,d.,间歇蒸汽灭菌法：,杀死细菌所有繁殖体和芽胞的灭菌法。,适用不耐高热含糖、牛奶的培养基。,100 30min37,培养,18,24h,100 30min37,培养,18,24h,100 30min,湿热灭菌,e.,高压蒸汽灭菌法：,103.4kPa,121,15,30min,，,杀死芽胞在内的所有微生物。,灭菌效果最好、目前应用最广,用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。,不能灭活朊粒,临床上最常用的一种灭菌法，利用高压及饱和蒸气的高热所释放的潜热灭菌。,手提式高压蒸汽灭菌器,小型全自动高压灭菌器,不向外排放蒸汽和热力,大型全自动高压灭菌器,下排气式压,力蒸汽灭菌器,预真空压力,蒸汽灭菌器,手提高压,蒸汽灭菌器,灭菌效果监测,灭菌效果监测,高压蒸汽灭菌法,:,嗜热脂肪芽胞杆菌,环氧乙烷法：,枯草芽胞杆菌,辐射杀菌法,a.,紫外线,:,波长,240,280nm,，,260nm,最强,穿透力差,，,适用于实验室、无菌室、培养箱等的空气消毒及物品表面消毒。,注意防护：,紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用,改变,DNA,分子构型，干扰细菌,DNA,复制转录,紫外线消毒,实验室,杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。,空气消毒：每,10m,3,空间用,30W,紫外灯照,30min,物体表面消毒：紫外灯与物体的距离,1.2m,。应将物品,摊开或挂起，使其表面直接受到照射,生物安全柜,辐射杀菌法,b.,日光，微波,c.,电离辐射,:,射线、,射线（如,60,Co,）等，用于一次性医用塑料制品，食品保存。,穿透力强，可在包装后灭菌,辐照食品。,滤过除菌法,滤菌器,filter,薄膜滤菌器,：,孔径,0.1,m-0.45,m,硝基纤维素膜。常用,0.22,m,深层滤器,:,石绵、玻璃滤菌器,用途：不耐高温灭菌的血清、细菌毒素、抗生素，以及空气等的除菌。,不能除去支原体和病毒,。,高效空气过滤器,HEPA,应用于无菌手术室、生物安全柜。,高效空气过滤器：应用于无菌手术室、生物安全柜等,干燥与低温抑菌法,低温法,:,贮藏菌种,冷冻真空干燥法,-,最好的菌种保存方法,加入冷冻保护剂,-20,-70,冻干菌种,低温冰箱,消毒剂杀菌机制,消毒剂的分类,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,常用化学消毒剂,化学消毒灭菌法,如皮肤、粘膜、排泄物及周围环境、光学仪器、金属锐气和某些塑料制品的消毒。,用化学药品进行消毒灭菌的方法，凡不适用于热力消毒灭菌和不怕湿的物品均可选用此法消毒,杀菌机制：,（,1,）使菌体蛋白质变性或凝固；,（,2,）干扰细菌的酶系统和代谢；,（,3,）损伤细胞膜影响通透性。,消毒剂杀菌机制,哪种消毒剂适用？,中效：,杀灭细菌繁殖体、结核杆菌、真菌、病毒，但不能杀灭芽孢,低效：,杀灭细菌繁殖体、部分真菌、亲脂性病毒，但不能杀灭结核杆菌、亲水性病毒和芽孢,高效：,能杀灭一切微生物，包括芽孢。,消毒剂的分类,1,、根据物品的性能和各种微生物的特,性，选择合适的消毒剂。,2,、严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒,时间及使用方法。,3,、消毒剂应定期更换，易挥发的要加,盖，定期检测、调整浓度。,4,、待消毒的物品必须先洗净擦干，全,部浸没在消毒液内，并打开物品的套盖。,消毒剂使用原则,消毒剂使用方法,1,、浸泡法,2,、擦试法,3,、喷雾法,4,、熏蒸法,常用消毒剂类型作用机制及种类,类别,作用机制,常用种类,酚类,蛋白变性，细胞膜损伤,石炭酸、洗必泰,醇类,蛋白变性,乙醇,氧化剂,氧化、蛋白沉淀,高锰酸钾、过氧乙酸、过氧化氢、碘酊,表面活性剂,蛋白变性，改变胞壁通透性,新洁而灭,酸碱类,破坏膜、壁，蛋白凝固,醋酸、生石灰,烷化剂,醛类,蛋白质、核酸烷基化,蛋白变性,环氧乙烷,甲醛、戊二醛,消毒剂,使用范围,剂量,含氯消毒剂漂白粉,饮用水,有效氯,0.4%,次氯酸钠,皮肤 物表 排泄物,有效氯,0.01-0.1%,过氧乙酸,皮肤 物表 空气,0.1-0.5%,过氧化氢,皮肤 物表 空气,3%,戊二醛,医疗器械,2%,乙醇,医疗器械 皮肤,75%,碘酊,皮肤 黏膜 物表,2%,碘乙醇溶液,碘伏,皮肤 黏膜 物表,0.3%-0.5%,有效碘溶液,苯扎溴铵,皮肤 黏膜 物表,0.05-0.1%,氯己定,皮肤 黏膜 物表,0.02-0.05%,高锰酸钾,皮肤 黏膜 蔬菜 水果,1-10g/L,溶液,常用消毒剂种类及使用,常用消毒剂,高效消毒剂,含氯消毒剂,：,次氯酸、漂白粉、二氯异氰酸尿酸钠,过氧化物消毒剂,：,过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯,醛类消毒剂：,戊二醛（不腐蚀金属）、甲醛,环氧乙烷,：,800-1200mg/L 56,6h,环氧乙烷灭菌器,（环氧乙烷易燃，有毒）,过氧化氢灭菌器,（安全：常温、常压、无毒、无残留,杀菌谱广，杀菌力强）,中效消毒剂,含碘消毒剂：碘伏、碘酊,醇类：乙醇,70,75,低效消毒剂,季铵盐类：苯扎溴铵（新洁尔灭）,氯已定（洗必泰）,高锰酸钾,常用消毒剂,高危,：,需进入无菌组织的物品。,灭菌,中危,：,接触黏膜的器械。,消毒,低危,：,只接触未损伤皮肤。,清洗,、,消毒,室内空气消毒灭菌,物理消毒法,：,紫外线照射（,1.5,W,/m,3,，1h）最常用,；,滤过除菌,：,高效过滤装置,化学消毒法,：,过氧乙酸,或,过氧化氢喷雾,、,熏蒸,医疗器械物品的消毒灭菌,消毒灭菌的运用,手和皮肤的消毒,用肥皂和流动水正确洗手,病原微生物污染时应用消毒剂消毒,。,消毒灭菌的运用,免洗手消毒液,正确洗手,黏膜,的消毒,：过氧化氢、洗必泰,病人排泄物与分泌物的消毒灭菌,:,次氯酸钠,病人污染物品的消毒,:,漂白粉、过氧乙酸,饮水的消毒,：氯气,环境的消毒,消毒灭菌的运用,影响消毒灭菌效果的因素,消毒剂,微生物,环境,种类,浓度,作用时间,菌龄,种类,有机物,温度,酸碱度,数量,抵抗力：芽胞,-,结核分枝杆菌,-,病毒,-,繁殖体,-,真菌,常用杀菌因子对,HIV,污染物消毒使用的剂量,杀菌因子剂量,热（,80,）,72 h,紫外线（,15 W,灯管,距,10 cm,处照射）,8 min,含氯消毒剂（含有效氯,500,-,5000 mg/L,）,10,30 min,碘伏,(,含有效碘,50,100 mg/L,),10,30 min,乙醇,65%,75%,溶液,5,10 min,过氧化氢,3%,溶液,10,30 min,戊二醛,2%,溶液,20,30 min,甲醛,5%,8%,溶液,20,30 min,煤酚皂溶液,1%,3%,溶液,10,30 min,季铵盐类,0.1%,0.2%,溶液,30 min,以上,朊粒的灭活,朊粒：,无核酸结构,但在宿主细胞内增殖感染性蛋白质,对化学因子的抵抗力是所有微生物中最强,侵犯中枢神经组织,可引发慢性退行性脑组织病变，如克雅氏病、库鲁病、疯牛病等,1mol/L,的氢氧化钠或,5%,次氯酸钠浸泡,1h,后，,134,高压蒸汽处理,2h,微生物实验室的消毒灭菌,实验室哪些常用物品需要消毒灭菌？用何方法消毒灭菌？,培养基（耐热、不耐热）、接种环、吸嘴、玻璃研磨器、试管等均为无菌物品。,实验室配制的耐热物品常用高压蒸气灭菌法；不耐热用间歇蒸汽灭菌法。,微生物室常规工作中产生的医疗废物如何处置？,带菌的培养基须先在实验室内高压蒸气灭菌法处理；带菌液体用次氯酸钠（有效氯,1000-2000mg/L,）浸泡；地面物品表面用含氯消毒剂擦拭和喷洒。,第六节 细菌的分类,细菌的分类原则与层次,细菌分类学,（,Bacterial taxonomy,）,是微生物分类学的一个分支，是对细菌进行分类鉴定命名的一门科学。,分类,（,classification,）,是指根据相似性或亲缘关系，将一个有机体放在一个单元中。,鉴定,（,identification,）,是指确定一个新分离物是否归属于某个已命名的分类单元的过程。,命名,（,nomenclature,）,是按照国际命名法规给予有机体一个科学的名称。,分类等级：,界（,Kingdom,）,门（,Division,）,纲（,class,）,目（,Order,）,科（,Family,）,属（,Genus,）,种（,Species,）,种是最基本的分类单位,。但分类单元之间可加入亚门、亚纲、亚目、亚科等次要分类单位。种以下又可分为亚种、变种、型、菌株等,种,细菌分类的基本单位。,生物学性状基本相同,的细菌群体构成一个菌种。,凡是,16S rRNA,序列同源性,97,的两株细菌，即可确定为同一种。,属,性状相近关系密切的,若干菌种,组成属。,菌株,同种微生物不同来源的纯种培养,。,标准菌株或模式菌株,具有某种细菌典型特征的菌株。如：金黄色葡萄球菌,ATCC25923,（标准菌株）,常见的分类等级概念,：,型,：,按某种细微特征在种内进一步区分。血清型、噬菌体型、生物型、细菌素型。用于流行病学的分析研究。,群,：,不是固定分类单位，按某种生物学特征，把相应的菌株归在一起，组成群。例如：沙门菌血清分群,。,例：,大肠埃希菌,:,属于原核生物界,-,细菌域,-,变形菌门,-,变形菌纲,-,肠杆菌目,-,肠杆菌科,-,埃希菌属的一个种,分类方法,表型分类：,传统分类法（“形态、生理特征,”,等作为分类依据）,数值分类法及自动细菌鉴定法,分析分类：,对菌体组分、代谢产物组成等分析,质谱鉴定法,基因型分类：,最精确,：,16SrRNA,序列（细胞“活化石”）分析，,G+C mol%,亦较常用,肠杆菌科细菌编码的检索方法举例,(,手工法,),葡 萄 糖 赖 鸟 硫 靛 乳 卫 苯 尿 枸,产 产 氨 氨 化 基 茅 丙 橼,酸 气 酸 酸 氢 质 糖 醇 酸 素 酸,(A)(G)4 2 1 4 2 1 4 2 1,-+-+-,AG 2 6 0,AG260,查码 结果为大肠埃希氏菌,临床常用手工细菌鉴定系统,(API,鉴定系统,),API,肠杆菌,API,非发酵菌,API,酵母菌,1,、,伯杰氏细菌鉴定学手册,（,Bergeys Manual of Determinative Bacteriology),，,D.Bergey,（美国细菌学家），,1923,年第,1,版，,1994,年第,9,版。,2,、,伯杰氏系统细菌学手册,（,Bergeys Manual of Systematic Bacteriology),，,Holt,（美国细菌学家），,1984-1989,年编写完第,1,版共,4,卷，,2001,年开始发行第,2,版共,5,卷。,细菌分类命名系统,细菌分类命名系统,伯杰,氏,鉴定细菌学手册,（第,2,版伯杰系统细菌学手册,(Bergeys Manual of Systematic Bacteriology),，本版包括五册，共,30,篇，主要根据细菌的,rRNA,、,DNA,及蛋白质序列进行分类：,第一册,为古细菌、蓝绿藻菌、光合作用菌和具分支菌属。,第二册,为变形菌门（,Proteobacteria,）。,第三册,为,GC,比低的革兰阳性菌。,第四册,为,GC,比高的革兰阳性菌。,第五册,为浮霉菌门（,Planctomycetes,）、螺旋体门（,Spirochaetes,）、纤维杆菌门（,Fibrobacters,）、拟杆菌属（,Bacteroides,）、梭杆菌门（,Fusobacteria,）。,类，,G,有细胞壁的真细菌,分 类 依 据,菌 属,需氧,/,微需氧、有动力、螺形,G,菌,螺菌属、弯菌属,螺杆菌属,需氧,/,微需氧、,G,杆菌与球菌,假单胞菌属、军团菌属、奈瑟菌属、莫拉菌属产碱杆菌属、布鲁斯菌属、罗卡利马体属、鲍特菌属、弗郎西斯菌属,兼性厌氧,G,杆菌、弧菌,埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、克雷伯菌属变形杆菌属、普罗威登斯菌属、耶尔森菌属、弧菌属、巴氏杆菌属、嗜血杆菌属,厌氧,G,直、弯或螺形杆菌,类杆菌属、梭杆菌属,厌氧,G,球菌,韦荣球菌属,立克次体与衣原体,立克次体属、考克斯体属、衣原体属,螺旋体,密螺旋体属、疏螺旋体属、钩端螺旋体属,类，,G+,有细胞壁的细菌,G+,球菌,肠球菌属、球菌属,链球菌属、消化链球菌属,形成芽胞的杆菌,芽胞杆菌属、梭菌属,形态规则的无芽胞,G+,杆菌,李斯特菌属、丹毒丝菌属,形态不规则的无芽胞,G+,杆菌,棒状杆菌属、放线菌属、动弯杆菌属,分枝杆菌,分枝杆菌属,放线菌,诺卡菌属、链霉菌属、红球菌属,类，无细胞壁的真细菌,支原体属、脲原体属,类，古细菌,未发现有致病菌,命名法,采用,生物双名法（,binominal nomenclature,）,。具备拉丁化文字的形式和明确的分类等级两个特点，即由,一个属名和一个种名,构成。,属名在前，第一个字母要大写，种名在后，第一个字母小写,，,斜体,表示,。,中文译名与此相反：种名在前，属名在后,。如：,Staphylococcus aureus,金黄色葡萄球菌,属名 种名 种名 属名,Salmonella typhi,伤寒沙门菌,属名 种名 种名 属名,例如,Salmonella typhi,(,沙寒沙门菌,),。,属名也可用第一个字母代表，如,S.typhi,等。有时泛指某一属细菌而不特指其中,的某个细菌则可在属名之后加上,sp,，,如,Salmonella sp,，即表示沙门菌属细,菌,(sp,代表菌种,species,，复数用,spp),；,习题,1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是：,A.,紫外线照射,B.,煮沸5,min,C.,巴氏消毒法,D.,流通蒸气灭菌法,E.,高压蒸气灭菌法,2.灭菌方法错误的是,:,A.,手术室空气-紫外线,B.,饮水-氯气,C.,排泄物-漂白粉,D.,含血清培养基-高压蒸气灭菌,E.,温度计-75%酒精,3.下述不可能杀灭细菌芽胞的方法是：,A.,煮沸法,B.,巴氏消毒法,C.,间歇灭菌法,D.,干热灭菌法,E.,高压蒸气灭菌法,4.关于紫外线，说法错误的是,:,a.,其杀菌作用与波长有关,c.265-266nm,杀菌作用最强,b.,可损坏细菌的,DNA,构型,d.,其穿透力弱，故对人体无损害,e.,紫外线适用空气和物体表面的消毒,5.常用于空气或物体表面的消毒,a.,高压蒸气灭菌法,b.,紫外线照射法,c.,滤过除菌法,d.,巴氏消毒法,e.,干烤法,6.常用于基础培养基灭菌,a.,高压蒸气灭菌法,b.,紫外线照射法,c.,滤过除菌法,d.,巴氏消毒法,e.,干烤法,7.,乙醇消毒剂常用的浓度是：,a.100 b.95 c.75 d.50 e.30,8.,常用于手术器械的灭菌,a.,高压蒸气灭菌法,b.,紫外线照射法,c.,滤过除菌法,d.,巴氏消毒法,e.,干烤法,9.,常用于血清的除菌,a.,高压蒸气灭菌法,b.,滤过除菌法,c.,紫外线照射法,d.,巴氏消毒法,e.,干烤法,10.,将牛奶加热6230分钟的目的是,a.,使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收,b.,杀灭牛奶中的所有微生物,c.,杀死牛奶中的病原菌,d.,使牛奶不含活菌,e.,防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖,11,、破伤风病员用过的敷料最好的处理方法是：,A.,清洗后消毒,B.,烧毁,C.,高压灭菌,D.,煮沸消毒,E.,微波,12,、对细菌芽胞无效的化学消毒剂是：,A.,碘伏,B.20%,的碘酊,C.,甲醛,D.0.5%,过氧乙酸,E.2%,戊二醛,13,、某病人因急性肝炎收入传染病院，其信笺、钱币用下列何种消毒方法为宜,A.,高压蒸气灭菌,B.,喷雾法,C.,熏蒸法,D.,擦拭法,E.,浸泡法,14,、水中加入哪种药物可提高沸点,减少对金属的腐蚀性,A.1%,2%,碳酸氢钠,B.0.1%,0.2%,碳酸氢钠,C.3%,4%,碳酸氢钠,D.10%,碳酸氢钠,E.3%,5%,碳酸氢钠,复习,繁殖体,:,具有繁殖能力的菌体,芽胞：休眠体,抵抗力：芽胞,-,结核分枝杆菌,-,病毒,-,繁殖体,-,真菌,朊粒,消毒要求更高,谢 谢,1E 2D 3B 4D 5B,6A 7C 8A 9B 10C,11B 12A 13C 14A,