实验1微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验目的,1,）掌握显微镜油镜的使用和保护法,2,）认识细菌的基本形态与特殊结构。,3,）掌握细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法 的步骤、细菌的革兰氏染色结果。,4,）学习无菌操作技术,实验内容：,1,）显微镜油镜的使用方法；,2,）观察细菌基本形态的染色装片；,3,）观察几种常见细菌菌落；,4,）进行革兰氏染色法的操作,实验原理,显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，影响显微镜的分辨率。,显微镜物镜中的油镜放大倍数最大，可达,100X,油镜使用需在载玻片与镜头之间滴加镜油（香柏油）。,油镜的基本原理,油镜的使用,增加照明亮度,油镜头焦距很短，直径很小，所需光照强度最大,增加显微镜的分辨率,显微镜性能的优劣主要决定其分辨率的大小。,为什么使用香柏油？,当物镜与装片间的介质是空气（空气折射率,n=1.0,）时，光线会发生折射，使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度。,当介质为香柏油时，香柏油的折射率（,1.52,）与玻璃相近，光线可经过载片直接进入物镜而不发生折射，增加了照明度，更重要的是增加了数值孔径达到提高分辨率的目的。,显微镜使用方法,显微镜各部分名称,油镜的维护与保养,透镜的清洁,用无水乙醇和无水乙醚（,3:7/4:6,）擦拭镜头。尤其是用完油镜后。,干燥防止生霉,目的要求,巩固显微镜油镜的使用方法,认识细菌的基本形态和特殊结构,观察并描绘几种常见微生物的基本形态与特殊结构,微生物形态观察,实验仪器、材料和用具,显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液,细菌装片：细菌三种基本形态装片及细菌特殊结构,-,芽孢、鞭毛、荚膜装片。,细菌基本形态观察,（,1,）观察金黄色葡萄球菌、八叠球菌装片。注意菌体间的关系。,（,2,）观察枯草芽孢杆菌、大肠杆菌装片。,（,3,）观察螺菌装片。注意菌体的螺旋。,细菌的基本形态,Arrangement of Cocci,球菌,A.arrangement of cocci B.staphylococcus arrangement C.streptococcus arrangement,D.sarcina arrangement E.diplococcus arrangement,Arrangements of Bacilli,牙孢杆菌,A.arrangements of bacilli B.single bacillus C.streptobacillus,Spiral Forms,A.spiral forms B.spirillum,C.spirochete(arrows)mixed with red blood cells D.vibrio,细菌特殊结构观察,（,1,）固氮菌（荚膜）装片：注意菌体和荚膜的染色差异，荚膜的大小、以及与菌体的关系。,（,2,）螺菌（鞭毛）装片：注意鞭毛的染色、位置、数目、形状和大小。,（,3,）巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破伤风梭菌装片，注意孢体和菌体的染色差异，芽孢的形状、大小和位置。,Capsule stain of,Enterobacter aerogenes,细菌荚膜,细菌的鞭毛,arrangement of flagella,鞭毛,细菌芽孢,目的要求,掌握细菌涂片标本的制备方法及革兰氏染色法的步骤,识别细菌的革兰氏染色结果,学习无菌操作技术,细菌革兰氏染色,实验仪器、材料和用具,(1),显微镜、镜油、擦镜纸、擦镜液,(2),结晶紫、革氏碘染液、,95%,酒精、番红染液,(3),载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、,(4),枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 液体培养液、牙垢,实验原理,实验步骤,涂片,左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜,;,从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中,;,干燥,在空气中自然干燥,用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过三次,;,以载玻片在手背上试感觉不烫为宜,.,固定,3.,95%的乙醇脱色,：滴,加95%的乙醇，轻轻摇动玻片,进行,脱色,，,直至流出的乙醇无紫色时，水洗,；,染色步骤,1.,结晶紫,初染,：,滴加数滴结晶紫染液,于细菌涂片上,，,染色,1,分钟，水洗,；,2.,卢戈氏碘液,媒染,：,用,卢戈氏,碘液覆盖涂片,1,分钟，水洗,；,4.,蕃红,复染,：,滴加蕃红染液复染,2,分钟,以上,，水洗,，吸干镜检,。,载玻片上滴,加一滴香柏油,，,放,油镜,下镜,检;注意标本中细菌的形态,、,大小,排列,和颜色,镜检,染色结果：,革兰氏阳性菌,呈,紫色;,革兰氏阴性菌,呈,红色;,金黄色葡萄球菌的染色结果,讨论,记录革兰氏染色结果,并描述形状,菌体排列和颜色,看看与理论上是否相同,;,如不同,分析原因,;,分析影响革兰氏染色结果的因素,;,牙垢里大概能看到几类菌，哪几种较多？,注意事项,载玻片是否干净,取菌量、合适的菌龄、热固定及每一步水洗和酒精脱色程度是实验成功的关键,禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中,影响革兰氏染色结果的因素,菌龄：取处于对数生长期的细菌，此时结果典型。,操作：,热固定：温度不能太高，否则会造成细菌结构的破坏。,染色：染料应过量，避免结晶。,初染和媒染：时间在,30-60s,为宜。,复染：时间可稍长,脱色：约,30s,，以流下的脱色液无色为准,否则制片上会留有杂质或造成假阳性或假阴性。,水洗：要充分，否则制片上会留有杂质。,萋纳氏抗酸染色法,染液：石炭酸复红，,3,盐酸酒精，碱性美蓝染液。,菌液：枯草芽孢杆菌,器具：显微镜，载玻片，酒精灯，接种环。,（,1,）用接种环挑取一环枯草芽孢杆菌菌液，涂于玻片上做成薄膜，自然干燥后经火焰固定。,（,2),滴加石炭酸复红液于涂片上，用玻片夹住涂片微火加热，保持染液冒蒸汽约,5,分钟，,切勿蒸发至干或使染液沸腾。,染色法：,（,3,）冷后，水冲洗。,（,4,）以,3,盐酸酒精脱色，至片上红色全部脱去为止。,（,5,）水冲洗后，以碱性美蓝液复染,1,分钟，水洗，待干，镜检。,结果：枯草芽孢杆菌芽孢被染成红色，,而菌体则被染成蓝色。,细菌单菌落观察结果,