T∕GDFDTAEC 07-2024 食品中禁用水溶性合成色素的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS67.050CCS C53TB广东省食品药品审评认证技术协会团体标准T/GDFDTAEC 072024食品中禁用水溶性合成色素的测定液相色谱-串联质谱法Determination of prohibited water-soluble synthetic colour in foodsby liquid chromatography-tandem mass spectrometric method2024-03-29 发布2024-03-29 实施广东省食品药品评审认证技术协会发 布T/GDFDTAEC 072024I目次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 原理.15 试剂和材料.16 仪器和设备.27 分析步骤.28 结果计算和表述.49 精密度.410 其他.4附录 A（资料性）禁用水溶性合成色素的母离子、子离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间.5附录 B（资料性）禁用水溶性合成色素的中英文名称、CAS 号和化学分子式.6附录 C（资料性）禁用水溶性合成色素特征离子质量色谱图.7T/GDFDTAEC 072024II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由广州市食品检验所、广州汇标检测技术中心提出。本文件由广东省食品药品评审认证技术协会归口。本文件起草单位：广州市食品检验所、广州汇标检测技术中心、华测检测认证集团股份有限公司、通标标准技术服务有限公司。本文件主要起草人：毛新武、周庆琼、陈晓强、梁友、温恒、戚平、林子豪、梁淑珍、邱险辉、潘敏尧，秦坤良、叶丹、许汇成、徐政慧、张竞雯。T/GDFDTAEC 0720241食品中禁用水溶性合成色素的测定 液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了食品中32种禁用水溶性合成色素（见附录A）的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于饮料、葡萄酒、糖果、调味酱、豆制品、熟肉等食品中32种禁用水溶性合成色素的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 33087仪器分析用高纯水规格及试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液经氮吹置换溶剂后，经C18萃取小管净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。5试剂和材料除另有说明，本实验使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682中规定的一级水或GB/T 33087中规定的高纯水。5.1试剂5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.2乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。5.1.3氨水（NH3H2O）：含量 20%25%5.1.45%氨水甲醇溶液：移取 5 mL 氨水于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。5.1.510%甲醇水溶液：移取 10 mL 甲醇于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。5.2标准品32种禁用水溶性合成色素标准品：参见附录B，纯度95%。5.3标准溶液配制5.3.1标准储备溶液（1000 mg/L）：分别准确称取经折算相当于 50 mg（精确到 0.1 mg）的色素标准品，置 50 mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在18下避光保存，保存期 6 个月。5.3.2混合标准储备液 A 组（10 mg/L）：根据附录 A 化合物的浓度分组，准确移取 1 mL 的 A 组色素单标储备溶液于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在18下保存，保存期 3 个月。5.3.3混合标准储备液 B 组（100 mg/L）：根据附录 A 化合物的浓度分组，准确移取 1 mL 的 B 组色T/GDFDTAEC 0720242素单标储备溶液于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在18下避光保存，保存期 6 个月。5.3.4混合标准中间液 A 组（1 mg/L）：准确移取 1 mL 混合标准储备液 A 组于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度。临用现配。5.3.5混合标准中间液 B 组（10 mg/L）：准确移取 1 mL 混合标准储备液 B 组于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容到刻度。临用现配。5.3.6混合标准工作溶液：根据需要，用 10%甲醇水溶液将混合标准中间液稀释成所需的标准工作溶液。5.4材料5.4.1十八烷基硅烷键合硅胶（C18材料）：粒径 40 m60 m。5.4.2亲水聚四氟乙烯微孔滤膜：0.22 m。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾电离源（ESI）。6.2分析天平：感量为 0.1 mg、0.01 g。6.3离心机：转速不低于 8000 r/min。6.4超声波清洗器。6.5氮吹仪。7分析步骤7.1试样制备饮料、葡萄酒、调味酱试样应混合均匀，含气饮料及葡萄酒试样应先加热或超声去除二氧化碳后混合均匀，糖果、豆制品、熟肉试样经食品粉碎机搅碎混匀，制备好的试样密封冷藏避光保存，备用。7.2试样提取7.2.1饮料、葡萄酒试样称取试样1 g（准确至0.01g）于10 mL比色管，用甲醇定容至刻度。准确移取2 mL至含有50 mg C18材料的净化管中，涡旋1 min，在8000 r/min下离心5 min。取1 mL上清液用水定容至10 mL，过0.22 mPTFE滤膜，待测。7.2.2糖果试样糖果：称取试样2 g（准确至0.01 g）于小烧杯中，加入5 mL甲醇，微热溶解后，溶液转移至10 mL比色管，用甲醇多次洗涤烧杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。准确移取2 mL至含有50 mg C18材料的净化管中，涡旋1 min，在8000 r/min下离心5 min。取1 mL上清液用水定容至10 mL，过0.22 mPTFE滤膜，待测。其他：7.2.3调味酱、豆制品、熟肉试样称取试样2 g（准确至0.01g）试样于50 mL离心管中，加入10 mL5%氨水甲醇溶液，超声5 min，在8000 r/min下离心5 min，重复提取一遍，合并上清液。准确移取2 mL上清液于氮吹仪上氮吹至干，用2 mL甲醇复溶，转移至含有50 mg C18材料的净化管中，涡旋1 min，在8000 r/min下离心5 min。取1 mL上清液用水定容至10 mL，过0.22 m PTFE滤膜，待测。每个样品做2个平行测试，同时做空白测试。7.3仪器参考条件7.3.1液相色谱参考条件a)色谱柱：C18柱，100 mm2.1 mm，1.8 m，或同等性能的色谱柱；T/GDFDTAEC 0720243b)流动相：A 为 5 mmol/L 乙酸铵水溶液，B 为甲醇；梯度洗脱条件见表 1；c)柱温：40；d)进样量：2 L；e)流速：0.4 mL/min。表 1液相色谱梯度洗脱条件时间，min流动相A，%流动相B，%0.009821.0098215.0059518.0059521.009827.3.2质谱参考条件a)离子源类型：电喷雾电离源（ESI）；b)扫描方式：负离子电离模式；c)检测方式：多反应监测 MRM；d)毛细管电压：-2.5 kV；e)离子源温度：150；f)脱溶剂气温度：500；g)脱溶剂气流速：1000 L/h；h)锥孔气流速：150 L/h；i)定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞电压参见附录 A。7.4试样溶液的测定7.4.1定性分析在同样测试条件下，试样溶液中禁用水溶性合成色素的保留时间与标准溶液相应峰的保留时间相对偏差在25%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的标准溶液相对离子丰度一致。其允许偏差应符合表2的要求。表 2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度允许偏差502020502510203010507.4.2定量测定取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以特征离子质量色谱峰面积定量，按外标法计算。标准工作液及试样溶液中的禁用水溶性合成色素响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准溶液特征离子质量色谱图见附录B。7.5空白试验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行测定。T/GDFDTAEC 07202448结果计算和表述试样中各色素含量按式（1）计算：ss1000(1)式中：X样品中相应的色素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；CS标准溶液中相应色素质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；A样品溶液中相应的色素峰面积；V样品定容体积，单位为毫升（mL）；m样品质量，单位为克（g）AS标准溶液中相应的色素峰面积；1 000 换算系数。计算结果保留2位有效数字。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。10其他本方法中，当样品取样量为2 g，定容体积为10 mL时，32种禁用水溶性合成色素的检出限为0.3 mg/kg（A组化合物）、3.0 mg/kg（B组化合物）。T/GDFDTAEC 0720245AA附录A（资料性）禁用水溶性合成色素的母离子、子离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间禁用水溶性合成色素的母离子、子离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间见表A.1。表 A.1 禁用水溶性合成色素的母离子、子离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间序号中文名称标准溶液浓度分组母离子(m/z)定量离子(m/z)定性离子(m/z)去簇电压(V)定量离子碰撞电压(V)定性离子碰撞电压(V)保留时间(min)1酸性蓝 27B 组421.180.0341.130352511.032酸性蓝 3A 组559.1479435.02030459.533酸性蓝 41B 组464.1370.1400.050453510.854酸性蓝 62B 组399.1316.1225.150354511.475酸性蓝 7B 组667.3560.948110404010.256酸性橙 10A 组202.9150.6145.11010305.107酸性橙 20A 组326.9171.2247.24025208.288酸性橙 8A 组341.0185.2169.840203510.189酸性橙 IIA 组327.0171.2156.23030309.5310橙黄 IVA 组352.0156.279.92030459.9611酸性红 1A 组231.4179.2158.13010156.112酸性红 26A 组216.8150.5143.12015157.6113酸性红 265A 组294.6157.2235.21015108.9714酸性红 52A 组557.1433.080.02045409.5615酸性红 71A 组269.1136.7209.820251510.4916酸性红 73A 组255.0150.7241.31010109.0217酸性红 87A 组642.7518.6440.91025309.3418酸性紫 34B 组577.1496.9417.140254010.9719酸性紫 7A 组259.9178.9158.23013155.7220酸性紫 9A 组589.2185.2544.150404010.8021酸性黄 11A 组357.0237.2207.820203510.1922酸性黄 36A 组352.0156.279.740254510.2523铬变素 2BA 组233.3158.6126.72020156.0924铬变素 2RA 组211.2158.680.01015255.9125坚牢绿A 组381.3170.2340.91040157.9526甲基橙A 组303.9156.2288.23030308.7527丽春红 3RA 组224.0136.7150.23020158.3128胭脂红 SXA 组217.1170.280.03015208.1629滂酰洋红 2BA 组246.4179.1158.11015206.8530滂酰紫 6RA 组235.7158.6126.74010208.2831荧光素钠A 组331.1286.4285.24020358.2332二甲苯青 FFA 组515.1435.1406.15030358.38T/GDFDTAEC 0720246BB附录B（资料性）禁用水溶性合成色素的中英文名称、CAS 号和化学分子式禁用水溶性合成色素的中英文名称、CAS号和化学分子式，见表B.1。表 B.1 禁用水溶性合成色素的中英文名称、CAS 号和化学分子式序号中文名英文名CAS 号化学分子式1酸性蓝 27acid blue 276408-51-1C22H17N2NaO5S2酸性蓝 3acid blue 320262-76-4C27H31N2NaO7S23酸性蓝 41acid blue 412666-17-3C23H18N3NaO6S4酸性蓝 62acid blue 624368-56-3C20H20N2O5S5酸性蓝 7acid blue 73486-30-4C37H35N2NaO6S26酸性橙 10acid orange 101936-15-8C16H10N2Na2O7S27酸性橙 20acid orange 20523-44-4C16H11N2NaO4S8酸性橙 8acid orange 85850-86-2C17H13N2NaO4S9酸性橙 IIacid orange II633-96-5C16H11N2NaO4S10橙黄 IVacid orange IV554-73-4C18H14N3NaO3S11酸性红 1acid red 13734-67-6C18H13N3Na2O8S212酸性红 26acid red 263761-53-3C18H14N2Na2O7S213酸性红 265acid red 2656358-43-6C24H19N3Na2O9S314酸性红 52acid red 523520-42-1C27H29N2NaO7S215酸性红 71acid red 716226-76-2C24H18N4Na2O7S216酸性红 73acid red 735413-75-2C22H14N4Na2O7S217酸性红 87acid red 8717372-87-1C20H6Br4Na2O518酸性紫 34acid violet 346408-63-5C28H20N2Na2O8S219酸性紫 7acid violet 74321-69-1C20H16N4Na2O9S220酸性紫 9acid violet 96252-76-2C34H25N2NaO6S21酸性黄 11acid yellow 116359-82-6C16H13N4NaO4S22酸性黄 36acid yellow 36587-98-4C18H14N3NaO3S23铬变素 2Bchromotrope 2B548-80-1C16H9N3Na2O10S224铬变素 2Rchromotrope 2R4197-07-3C16H10N2Na2O8S225坚牢绿food green 32353-45-9C37H34N2O10S3Na226甲基橙methyl orange547-58-0C14H14N3NaO3S27丽春红 3Rponceau 3R3564-09-8C19H16N2Na2O7S228胭脂红 SXponceau SX4548-53-2C18H14N2Na2O7S229滂酰洋红 2Bpontacyl carmine 2B6625-46-3C19H15N3Na2O9S230滂酰紫 6Rpontacyl violet 6R5850-63-5C20H12N2Na2O8S231荧光素钠uranine518-47-8C20H10Na2O532二甲苯青 FFxylene cyanol FF2650-17-1C25H27N2NaO6S2T/GDFDTAEC 0720247CC附录C（资料性）禁用水溶性合成色素特征离子质量色谱图禁用水溶性合成色素特征离子质量色谱图（A组：100 ng/mL；B组：1000 ng/mL），见图C.1。Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-158:MRM of 3 Channels ES-421.147 79.969(A139)7.54e511.031.酸性蓝 27Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-170:MRM of 3 Channels ES-559.098 479.035(A047)1.05e79.532.酸性蓝 3Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-162:MRM of 3 Channels ES-464.097 370.088(A134)3.45e710.853.酸性蓝 41Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-156:MRM of 3 Channels ES-399.054 316.083(A106)4.16e711.474.酸性蓝 62Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-178:MRM of 3 Channels ES-667.287 560.863(A102)2.79e610.255.酸性蓝 7T/GDFDTAEC 0720248Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-14:MRM of 3 Channels ES-202.918 150.624(A066)4.12e55.106.酸性橙 10Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-141:MRM of 3 Channels ES-326.926 171.187(A041)1.53e78.287.酸性橙 20Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-145:MRM of 3 Channels ES-340.991 185.163(A094)3.45e710.188.酸性橙 8Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%01002020092108542:MRM of 1 Channel ES-327.007 171.181(A017)4.36e79.539.酸性橙 IITime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-147:MRM of 3 Channels ES-351.984 156.203(A019)9.95e79.9610.橙黄 IVTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%01002020092108517:MRM of 1 Channel ES-231.384 179.155(A013)1.26e66.1011.酸性红 1Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-19:MRM of 3 Channels ES-216.766 143.1(A038)2.52e57.6112.酸性红 26T/GDFDTAEC 0720249Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-132:MRM of 3 Channels ES-294.613 235.244(A034)1.83e68.9713.酸性红 265Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-169:MRM of 3 Channels ES-557.084 432.974(A023)9.27e59.5614.酸性红 52Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-126:MRM of 3 Channels ES-269.069 136.698(A096)7.69e510.4915.酸性红 71Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-122:MRM of 3 Channels ES-255.035 150.709(A014)1.59e69.0216.酸性红 73Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-175:MRM of 3 Channels ES-642.672 518.589(A026)1.42e69.3417.酸性红 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170.174(A075)1.85e67.9525.坚牢绿Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-133:MRM of 3 Channels ES-303.944 156.221(A020)8.19e78.75T/GDFDTAEC 0720241126.甲基橙Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-111:MRM of 3 Channels ES-224.015 136.672(A081)1.46e68.3127.丽春红 3RTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-110:MRM of 3 Channels ES-217.066 170.237(A071)9.63e58.1628.胭脂红 SXTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-120:MRM of 3 Channels ES-246.442 179.084(A084)2.65e56.8529.滂酰洋红 2BTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-119:MRM of 3 Channels ES-235.745 158.62(A082)7.81e58.2830.滂酰紫 6RTime-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-144:MRM of 3 Channels ES-331.093 286.38(A083)4.70e68.2331.荧光素钠Time-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00%010020200921085-165:MRM of 3 Channels ES-515.129 435.06(A044)1.27e68.3832.二甲苯青 FF图C.1 禁用水溶性合成色素特征离子质量色谱图（A组：100 ng/mL；B组：1000 ng/mL）