SN∕T 5655.10-2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第10部分：巴西坚果.pdf

I C S6 7.0 5 0C C S X0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3 商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第1 0部分:巴西坚果C o mm e r c i a l k i t t e s t m e t h o dI mm u n o a s s a y o f f o o d a l l e r g e n s i n p r e p a c k a g e d f o o d sP a r t 1 0:B r a z i l N u t2 0 2 3-1 1-0 1发布2 0 2 4-0 5-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言 本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件为S N/T 5 6 5 5 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 的第1 0部分。S N/T 5 6 5 5已经发布了以下部分:第1部分:麸质;第2部分:甲壳纲类动物;第3部分:蛋类;第4部分:花生;第5部分:大豆;第6部分:乳;第7部分:扁桃仁;第8部分:腰果;第9部分:榛子;第1 0部分:巴西坚果;第1 1部分:夏威夷果;第1 2部分:开心果;第1 3部分:胡桃。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国拱北海关、珠海粤港食品安全检测有限公司。本文件主要起草人:梁颖婕、高东微、冯家望、冼钰茵、刘津、吴本培。S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3引 言 食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏反应。S N/T 5 6 5 5 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 规定了预包装食品中致敏原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生产质控和食品安全检验监管的检测需求。S N/T 5 6 5 5 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 拟由下列1 3个部分构成。第1部分:麸质。第2部分:甲壳纲类动物。第3部分:蛋类。第4部分:花生。第5部分:大豆。第6部分:乳。第7部分:扁桃仁。第8部分:腰果。第9部分:榛子。第1 0部分:巴西坚果。第1 1部分:夏威夷果。第1 2部分:开心果。第1 3部分:胡桃。S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3商品化试剂盒检测方法预包装食品致敏原免疫分析法第1 0部分:巴西坚果1 范围本文件规定了预包装食品中巴西坚果致敏原的胶体金免疫层析测定方法。本文件适用于预包装食品中巴西坚果致敏原的胶体金免疫层析定性检测,也适用于预包装食品生产过程对生产原料和环境样品中巴西坚果致敏原的定性监测。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法AOA C G u i d e l i n e s f o r C o l l a b o r a t i v e S t u d y P r o c e d u r e s t o V a l i d a t e C h a r a c t e r i s t i c s o f a M e t h o d o f A n a l y s i s.A p p e n d i x M:V a l i d a t i o n p r o c e d u r e s f o r q u a n t i t a t i v e f o o d a l l e r g e n E L I S A m e t h o d s:c o mm u-n i t y g u i d a n c e a n d b e s t p r a c t i c e s3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1巴西坚果 B r a z i l n u t玉蕊科巴西栗属植物(B e r t h o l l e t i a e x c e l s a)的可食用种仁。注:又称巴西栗、鲍鱼果、巴西果。3.2胶体金免疫层析 c o l l o i d a l g o l d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h y a s s a y;G I C A以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。注:通常为试纸条形式。4 原理利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的巴西坚果致敏原进行胶体金免疫层析试纸条检测。样品中的巴西坚果致敏原与预包被在反应管内的标记抗体发生反应,形成抗原-抗体结合物。此抗原-抗体结合物被预包被在免疫层析试纸条上的特异性抗体捕获,形成抗体-抗原-抗体的夹心复合物,并在检测区显色,通过目测判读检测结果。1S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 35 试剂和材料除特别说明外,实验用水应符合G B/T 6 6 8 2规定的三级水,所有试剂均为分析纯。5.1 巴西坚果致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒:试剂盒按照AOA C G u i d e l i n e s f o r C o l l a b o r a t i v e S t u d y P r o c e d u r e s t o V a l i d a t e C h a r a c t e r i s t i c s o f a M e t h o d o f A n a l y s i s A p p e n d i x M:V a l i d a t i o n p r o c e-d u r e s f o r q u a n t i t a t i v e f o o d a l l e r g e n E L I S A m e t h o d s:c o mm u n i t y g u i d a n c e a n d b e s t p r a c t i c e s进行评价,评价结果见附录A。注:试剂盒详细信息见附录B。5.2 吸附缓冲液,按照附录C执行。5.3 P B S-吐温缓冲液:8.0 g N a C l,0.2 g K C l,1.4 4 g N a2HP O4,0.2 4 g KH2P O4,2 mL 吐温-2 0,调p H至7.27.4,用蒸馏水定容至1 L。5.4 氯化钠(N a C l)。5.5 棉签拭子。6 仪器和设备6.1 分析天平:感量0.0 1 g。6.2 匀浆机。6.3 涡旋混匀仪。6.4 离心机:转速4 0 0 0 r/m i n。6.5 单道移液器:1 0 0 L1 0 0 0 L,5 0 0 L5 0 0 0 L。7 分析步骤7.1 环境拭子的采样7.1.1 吸取1 mL P B S-吐温缓冲液(5.3)到洁净的2 mL离心管中,浸润棉签拭子(5.5)。7.1.2 用浸润的棉签拭子(7.1.1)的棉头,擦拭大约1 0 c m1 0 c m面积的待检测环境表面。若无法实现1 0 c m1 0 c m的待检测环境表面擦拭,请自行定义合理及合适的待检测环境表面范围并记录。7.1.3 将擦拭取样后的棉签拭子(7.1.2)放回装有P B S-吐温缓冲液的离心管中,充分浸洗并挤压使棉头与缓冲液充分融合和释放,取出挤干的棉签拭子。7.1.4 从离心管中取0.1 mL用于检测。注:若棉签采样拭子(7.1.2)含有肉眼清晰可见的致敏原颗粒,则可能含有的致敏原超过1 0 0 0 m g/k g,建议将棉签拭子采样处理后的离心管中样品液,进一步稀释后,再用于检测。7.2 清洁用水的采样直接取0.1 mL清洁用水用于检测。7.3 食品样品前处理和提取7.3.1 液体样品:量取不少于5 mL样品,进行充分均质。7.3.2 固体样品:称取5 0.0 0 g样品,向其中加入4 5 0 mL水和4.0 0 g氯化钠(5.4)后均质。置离心机中4 0 0 0 r/m i n室温(2 0 2 5)离心5 m i n,取上清液用于检测。无离心条件时,可用粗滤纸过滤,2S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3得到滤清液用于检测。若离心后产生脂肪层,则轻挑除去脂肪层后,取脂肪层下的无脂肪清液用于检测。脂肪含量高的样品,宜进行冷冻离心以去除脂肪。7.3.3 含多酚类的样品:对于如啤酒、葡萄酒、可可、调味料、中草药等样品,应使用吸附缓冲液(5.2)进行样品前处理。吸取1 mL液体样品或称取1.0 0 g均质后的固体样品,加入已含有9 mL吸附缓冲液的样品管中,室温(2 0 2 5)孵育1 0 m i n1 5 m i n,边孵育边振荡。孵育结束后置离心机中于室温(2 0 2 5)4 0 0 0 r/m i n,离心5 m i n,取上清液用于检测。注:含若样品中可能含有的致敏原浓度超过1 0 0 0 m g/k g,则建议将样品提取液进一步稀释后,再进行检测。密封好的上清液或滤清液在2 8 避光保存不超过2 d。7.4 样品的测定向预包被标记抗体的反应管 见B.1 a)中加入0.2 mL的流动相缓冲液 见B.1 c),再加入0.2 m L于7.1、7.2、7.3步骤得到的样品提取液,盖上管盖充分混匀,于室温(2 0 2 5)孵育5 m i n。向反应管中放入巴西坚果致敏原试纸条 见B.1 b),反应5 m i n,目测读取检测结果。注:强酸性或强碱性样品提取液调节p H值至7.50.5后再检测。7.5 测定结果评估和表述7.5.1 试纸条反应区包括2条结果条带,从上至下分别为质控带(C)和检测带(T)。当质控带(C)出现蓝紫色条带,检测结果有效,否则检测结果无效。7.5.2 试纸条同时出现蓝紫色质控带(C)和蓝紫色检测带(T),检测结果为阳性,结果表述为“检出巴西坚果致敏原”。7.5.3 试纸条只出现蓝紫色质控带(C),未出现蓝紫色检测带(T),检测结果为阴性,结果表述为“未检出巴西坚果致敏原”。7.6 试剂失效试纸条未出现蓝紫色质控带(C),检测结果无效。7.7 内部质控定期或必要时使用巴西坚果致敏原质控品或实验室自行制备的人工添加样品进行检测质量控制。8 检出限8.1 本方法对食品样品及清洁用水中巴西坚果致敏原的检出限为1 m g/k g(L)。8.2 本方法对环境表面的拭子采样的检出限为1 g/1 0 0 c m2(当采样面积为1 0 c m1 0 c m时),或1 g/采样拭子(当采样面积是自行确定时,应明确所记录的采样范围)。9 方法局限性本文件的胶体金免疫层析方法适用于检测巴西坚果致敏原,检测结果为定性检测结果,无法获得定量检测结果。若样品中含有特别高浓度的巴西坚果(1 0 0 0 m g/k g),则检测带的颜色可能会变浅,甚至完全抑制其形成。若样品可能含有特别高浓度的目标检测过敏原,则建议对样品进行大倍数稀释。3S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 31 0 防污染措施1 0.1 食品样品的均质可能产生粉尘,为避免污染应在通风橱内进行样品均质的前处理操作。1 0.2 设备和器具用水冲洗后,用6 0%乙醇或异丙醇彻底清洁,以消除致敏原(蛋白质)污染。1 0.3 在试验过程中应戴手套操作,在称量、均质样品、样品提取及试剂盒检测四个检测阶段更换手套。4S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3附 录 A(资料性)巴西坚果致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒评价结果1)1)本评价结果仅适用于r-b i o p h a r m b i o a v i d L a t e r a l F l o w B r a z i l N u t试剂盒。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。A.1 检出限对食品样品及清洁用水中巴西坚果致敏原的检出限为1 m g/k g(L)。对环境表面的拭子采样的检出限为1 g/1 0 0 c m2(当采样面积为1 0 c m1 0 c m时),或1 g/采样拭子(当采样面积是自行确定时,应明确所记录的采样范围)。A.2 特异性对扁桃仁、杏仁、腰果、椰子、蛋、榛子、花生、南瓜籽、葵花籽、核桃、板栗、夏威夷果、碧根果、开心果、松籽、油菜籽、玉米粉、豌豆、绿豆、小麦、燕麦、孜然、咖喱、大豆、辣椒、桂皮、丁香、八角、姜、芥末、洋葱、鸡肉、猪肉、牛肉、可可粉、橙汁、苹果汁、牛奶、牛血清蛋白、羊奶均无交叉反应。5S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3附 录 B(规范性)巴西坚果致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒2)2)r-b i o p h a r m b i o a v i d L a t e r a l F l o w B r a z i l N u t试剂盒是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。B.1 试剂盒组成a)预包埋标记抗体的反应管:1 0支或2 5支(根据试剂盒规格不同);b)巴西坚果致敏原快速试纸条:1 0支或2 5支(根据试剂盒规格不同);c)内含1 0 mL流动相(缓冲液)的滴瓶:1支;d)冻干阳性质控:1份,使用时加入1 mL水复溶,涡旋混匀5 m i n。B.2 试剂盒验收和保存B.2.1 每个批号试剂盒应按照质量控制要求进行验收试验,考察检测性能。B.2.2 未开封试剂盒保存在2 8,使用前回复至室温(2 0 2 5)。开封后试剂条保存在室温(2 0 2 5)并保持干燥。B.2.3 超过有效期的试剂盒不应使用。B.3 试纸条检测结果示例试纸条检测结果示例见图B.1。从左至右检测结果第1条为阴性,第23条为阳性。C为质控带,T为检测带。图B.1 试纸条检测结果示例6S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3附 录 C(规范性)吸附缓冲液3)C.1 试剂盒描述吸附缓冲液专门适用于含多酚的样品(如咖啡、可可、红酒等)处理,配合致敏原胶体金免疫层析检测试纸条进行过敏原检测。C.2 试剂盒组成吸附缓冲液样品管9 mL2 5支。C.3 试剂盒保存C.2.1 试剂盒保存在室温(2 0 2 5)。C.2.2 超过有效期的试剂盒不应使用。3)r-b i o p h a r m b i o a v i d A b s o r b e n t B u f f e r吸附缓冲液是适合的市售产品实例。给出这一信息是为了方便本文件的使用者。如果采用其他产品可以得到相同或更好的检测效果,经实验评估后可以使用这些等效产品。7S N/T5 6 5 5.1 02 0 2 3