高中生物---检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质名师优质课获奖市赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。,第一章 细胞分子组成,第三节 有机化合物及生物大分子,试验,1,：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,第1页,试验：检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,试验原理：,一些化学试剂能够使生物组织中相关有机化合物产生特定颜色反应。,化学试剂,+,有机化合物特定颜色,还原糖,+,斐林试剂 砖红色沉淀,脂肪,+,苏丹,（或苏丹,）染液橘黄色（或红色）,蛋白质,+,双缩脲试剂紫色,淀粉,+,碘蓝色,水浴加热,第2页,斐林试剂与双缩脲试剂比较,斐林试剂,双缩脲试剂,甲液,乙液,A,液,B,液,成份,0.1 g/mL NaOH,溶液,0.05 g/mL CuSO,4,溶液,0.1 g/mL NaOH,溶液,0.01 g/mL CuSO,4,溶液,判定物质,可溶性还原糖,蛋白质或多肽,添加次序,甲乙两液等量混匀后马上使用（现配现用）,先加入,A,液,1 mL,，摇匀，再加入,B,液,4,滴（不能过量），摇匀,反应条件,50,65,水浴加热,不需加热，摇匀即可,反应现象,样液变砖红色沉淀,样液变紫色,斐林试剂用是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水浴加热。双缩脲试剂用是,A,液和,B,液，先加,A,液，后滴,B,液，不用水浴加热。,第3页,比较项目,斐林试剂,双缩脲试剂,不,同,点,使用方法,甲液和乙液混合均匀后方可使用，且,现配现用,使用时先加A液再加B液,反应条件,需50-65水浴加热,不需加热即可反应,反应原理,还原糖中醛基被Cu（OH）2 悬浊液氧化,Cu（OH）2被还原为砖红色Cu2O沉淀,含有两个以上肽键化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成紫色络合物,颜色,砖红色,紫色,浓度,乙液CuSO,4,浓度为0.05 g/mL,B液CuSO,4,浓度为0.01g/mL,相同点,都含有NaOH、CuSO4两种成份，且所用NaOH浓度都是0.1g/mL,第4页,双缩脲反应：含有两个或两个以上肽键化合物与碱性硫酸铜作用，生成蓝紫色复合物,第5页,斐林试剂与双缩脲试剂都由,NaOH,和,CuSO,4,组成，但二者有以下三点不一样：,溶液浓度不一样。,斐林试剂中,NaOH,浓度为,0.1g/mL,，,CuSO,4,浓度为,0.05g/mL,；双缩脲试剂中,NaOH,浓度为,0.1g/mL,，,CuSO,4,浓度为,0.01g/mL,。,使用原理不一样。,斐林试剂实质是新配制,Cu(OH)2,溶液；双缩脲试剂实质是在碱性环境下,Cu,2,。,使用方法不一样。,使用斐林试剂时，先把,NaOH,溶液和,CuSO,4,溶液混合，然后马上使用。使用双缩脲试剂时，先加入,NaOH,溶液，然后再加入,CuSO,4,溶液,。,第6页,第7页,一、可溶性还原糖检测：,（,1,）原理：还原糖,+,斐林试剂 砖红色沉淀。,（,2,）选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为白色或近于白色植物组织。,（,3,）检测过程：,水浴加热,振荡混匀,50,65,水浴,加热,2min,2mL,组织样液,刚配制斐林试剂,2mL,展现浅蓝色,变成砖红色（,Cu,2,O,）,还原糖：含有半缩醛羟基糖类，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。,第8页,当质量浓度为,0.1g/mL,氢氧化钠溶液与质量浓度为,0.05g/mL,硫酸铜溶液混合后，马上生成淡蓝色,Cu,（,OH,）,2,悬浊液。,Cu,（,OH,）,2,与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色,Cu,2,O,沉淀。所以，利用该反应，可证实样液中含可溶性还原糖。,RCHO+2Cu(OH),2,RCOOH+Cu,2,O+2H,2,O,甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。,第9页,制备组织样液,梨或苹果,研磨,取,5g,，放入研钵中,洗净、去皮、切块,过滤,滤液,（用单层纱布）,显色反应,向试管中加入,2ml,组织样液,向试管中加入,2ml,新配制斐林试剂或本尼迪特试剂,振荡混匀,50,65,水浴加热,2min,观察现象,观察溶液颜色改变：浅蓝色棕色砖红色,结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。,砖红色糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃,第10页,2 ml,组织样液,1 ml,新配制斐林试剂,50,65,水浴加热约,2min,观察颜色改变,砖红色,浅蓝色,棕 色,【,斐林试剂,】,：,甲液：,0.1g/mLNaOH,溶液，乙液：,0.05 g/mLCuSO4,溶液，使用前等体积混合均匀（生成浅蓝色,Cu,（,OH,）,2,悬浊液），现配现用（时间一长，,Cu,（,OH,）,2,沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。,第11页,还原糖检测结果,斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热条件下，生成砖红色,Cu,2,O,沉淀。,-CHO+Cu(OH),2,悬浊液,-COOH+Cu,2,O,（砖红色）,第12页,二、脂肪检测,（,1,）选材：经浸泡去种皮花生种子。,（,2,）检测过程：,制片,选取最薄切片置于洁净载玻片中央,制成暂时装片：滴,1,2,滴蒸馏水，盖上盖玻片,染色：在薄片上滴加,2,3,滴苏丹,染液,，染色,23min,洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为,50%,酒精,1,2,滴,镜检观察：,在低倍镜下寻找到已着色圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。,苏三（苏丹,）送了我一个橘黄色胭脂（脂肪）,切片：,花生种子（浸泡,h,），去皮，将子叶削成薄片。,视野中有橘黄色颗粒,第13页,橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒,脂肪,+,苏丹,（或苏丹,）染液 橘黄色（或红色）,第14页,第15页,注意事项：,（,1,）,若用花生种子作试验材料，必须提前浸泡,3,4,小时，浸泡时间短了，不轻易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下薄片不易成形，切片要尽可能薄。,（,2,）染色后一定要用,50%,酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹,），染色和洗浮色时间不宜过长。,第16页,三、蛋白质检测：,（,1,）原理：蛋白质,+,双缩脲试剂 紫色络合物,（,2,）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆,（,3,）检测过程：,2 ml,组织样液,2 ml,双缩脲试剂,A,液，摇匀,3-4,滴双缩脲试剂,B,液，摇匀,观察颜色改变,紫色,双（双缩脲）子（紫色）弹（蛋白质）,第17页,将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。反应式为,:,双缩脲（,H2NOC-NH-CONH2,）在碱性环境（,NaOH,）中能和,Cu,2+,作用生成紫色络化物，这个反应叫做双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键结构与双缩脲结构相同，所以，蛋白质也可与双缩脲试剂发生颜色反应。,双缩脲双缩脲试剂,第18页,无色,紫色,（创造碱性条件）,（提供,Cu,2+,）,双缩脲试剂,B 3-4,滴,双缩脲试剂,A 2mL,2mL,组织样液,在碱性条件（,NaOH,）下，蛋白质中肽键,（,NHCO,）,与,Cu,2,作用生生紫色络合物。所以，操作时，应先加,A,再加,B,，且,A,多,B,少，假如,B,过量，,Cu,2,蓝色就会遮盖生成紫色。,第19页,制备组织样液,黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液）,黄豆,浸泡,研磨,过滤,滤液,去皮、切片,蛋清液,鸡蛋,鸡蛋清稀释液,稀释,显色反应,向试管中注入,2ml,组织样液,向试管中注入,2ml,双缩脲试剂,A,加入,3-4,滴双缩脲试剂,B,观察现象,观察颜色改变：无紫色,结论：加入双缩脲试剂,A,后，颜色展现为无色，加入,B,后，变为紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。,第20页,蛋白质检测结果,第21页,注意事项：,（,1,）假如用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，不然反应后产物会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷洁净。,（,2,）,【,双缩脲试剂,】,：,A,液,：,0.1g/mL NaOH,，,B,液：,0.01g/mL CuSO4,。先加,A,液后加,B,液，且,B,不能过量，不需要加热。,（,3,）过量双缩脲试剂,B,会与试剂,A,反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成紫色。,（,4,）先加入,A,液,2ml,，摇匀；再加入,B,液,3-4,滴，摇匀。,第22页,四、淀粉检测：,（,2,）选材：马铃薯匀浆,（,1,）原理：淀粉,+,碘 蓝色,（,3,）检测过程：,2 ml,组织样液,2,滴碘液,观察颜色改变,蓝色,蓝（蓝色）点（淀粉）点（碘）,第23页,制备组织样液,马铃薯块茎,研磨,取,5g,，放入研钵中,洗净、去皮、切块,过滤,滤液,显色反应,向试管中注入2ml组织样液,加入5滴碘-碘化钾,观察现象,观察溶液颜色改变：无色蓝色,结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。,第24页,判定物质,生物材料,所用试剂,颜色改变,还原糖,脂肪,蛋白质,淀粉,苹果、梨、白萝卜,斐林试剂,砖红色沉淀,花生种子,苏丹,染液,苏丹,染液,橘黄色,红色,豆浆、牛奶、鸡蛋清,双缩脲试剂,紫色,面粉、马铃薯匀浆液,碘液,蓝色,注：判定还原糖需加热；脂肪判定不一定要用显微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。,第25页,五、观察,DNA,、,RNA,在细胞中分布,试验原理：,（,1,）,DNA,主要分布在细胞核内，,RNA,大部分存在于细胞质中。,（,2,）甲基绿和吡罗红两种染色剂对,DNA,和,RNA,亲和力不一样，甲基绿使,DNA,展现绿色，吡罗红使,RNA,展现红色。,（,3,）利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，能够显示,DNA,和,RNA,在细胞中分布。,（,4,）盐酸能够改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中,DNA,和蛋白质分离，有利于,DNA,和染色剂结合。,甲基绿使,DNA,展现绿色，吡罗红使,RNA,展现红色，经过观察两种颜色出现部位来判断,DNA,和,RNA,在细胞中分布。,第26页,方法步骤：,（,1,）取材和制片,在洁净载玻片上滴,1,滴,0.9%NaCl,溶液,用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上,将涂有,口腔上皮细胞,载玻片在酒精灯上烘干,（,2,）水解：,将烘干载玻片放入盛有,30 mL,8%,盐酸,小烧杯中，,30,水浴保温,5 min,（,3,）冲洗涂片：用蒸馏水缓水流冲洗载玻片,10,秒,（,4,）染色,吸水纸吸去载玻片上水分,在载玻片上滴加两滴,2,滴用吡罗红，甲基绿染色剂，染色,5,分钟,吸去多出染色剂，盖上盖玻片,（,5,）观察：,先,低倍镜：选染色均匀，色泽浅区域，移到视野中央。后高倍镜：观察细胞核和细胞质染色情况。,第27页,0.9%,生理盐水？,人口腔上皮细胞,8%,盐酸？,蒸馏水,30,水浴,吡罗红甲基绿染色剂,取材,水解,冲洗,染色,观察,第28页,思索与讨论：,（,1,）,9%Nacl,溶液作用？,保持空腔上皮细胞正常形态。,（,2,）,8%,盐酸作用？,杀死细胞，改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞；使染色体中,DNA,与蛋白质分离，有利于,DNA,与染色剂结合。,（,3,）吡罗红甲基绿染色剂要现用现配。该试验不宜选取绿色植物叶肉细胞（有颜色）和其它有颜色细胞（如鸡血细胞）作为试验材料，因其会干扰颜色观察。,第29页,Thank You!,第30页,