月季花药培养(公开课).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,课题,2,月季的花药培养,花中皇后月季又称“月月红”，,自然花期,5,至,11,月,，开花连续不断，,通常扦插就可以成活,。,知识回顾,单倍体育种的过程？,花药离体培养（,N,）,单倍体植株（,N,）,秋水仙素处理，使染色体翻倍,植株（,2N,）,特点：,1,明显缩短育种年限,2,后代植株都为纯合子。,正常植株（,2N,）,花的结构,花托,花萼,花瓣,雄蕊,花药,花丝,雌蕊,柱头,花柱,子房,花丝,花药：,囊状结构，内有很多花粉,（一）被子植物的花粉发育,1,雄蕊,一、基础知识,2,花粉的概念,:,由,花粉母细胞,经过,减数分裂,形成的,单倍体的生殖细胞,.,花粉母,细胞,（小孢子母细胞）,4,个小孢子,减数分裂,小孢子四分体,1,个小,孢子,花粉粒,（双核）,有丝分裂,单核,双核,花粉管细胞核,营养细胞,生殖细胞核,2,个精子,小孢子母细胞,小孢子,花粉囊,花药,花粉粒（双核期）,成熟花粉,8,个精子,小孢子母细胞,（,）时期,单核（,）期,双核期,（）细胞核,（,）细胞核,（,）细胞,（）细胞,（,）个精子,（,）分裂,（,）分裂,单核（,）期,（）分裂,减数,小孢子四分体,中,边,有丝,生殖,生殖,花粉管,营养,有丝,2,2N,N,N,N,N,N,N,N,N,4,个小孢子,减数分裂,有丝分裂,4,个花粉管细胞核,4,个生殖细胞核,有丝分裂,8,个精子,1,花粉母细胞,例题,1,：两个精子和花粉管细胞核的,基因型,相同？,1,、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（）,A,、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的,B,、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果,C,、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段,D,、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央,BD,注：花粉母细胞经减数分裂形成,4,个单核花粉粒，每个花粉粒的细胞核进行一次有丝分裂形成,1,个花粉管细胞核和,1,个生殖细胞核，每个生殖细胞核再进行一次有丝分裂生成,2,个精子。,（二）产生花粉植株的两种途径,移栽,花药中的花粉,胚状体,脱分化,愈伤组织,花药中的花粉,脱分化,分化,丛芽,再分化,丛芽,诱导,生根,体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与,合子发育成的胚非常相似的结构,，发育过程亦与合子胚类似,原因：培养基中的激素种类及浓度配比,部分花药通过胚状体途径形成小植株,烟草花药培养,胚状体发育途径,愈伤组织转接种到再生培养基,愈伤组织分化形成再生植株,水稻花药培养,愈伤组织发育途径,部分花药产生愈伤组织,接种在平板上的水稻花药,1,、材料的选择,不同植物的诱导成功率不同,.,同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响,.,（一般选月季的初花期）,合适的花粉发育期,（单核居中期与靠边期之间）,2,、培养基的组成,（,MS,培养基,+,不同比例的植物生长调节激素）,此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等,(,三,),、影响花药培养的主要因素,注意：选择最合适的花粉发育时期,:,单核期,不选择单核期之前花药原因：,花药质地幼嫩，容易破碎,；,不选择单核期之后花药原因：,花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难,；,挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。,实验操作,一、材料的选取,二、材料的消毒,三、接种和培养,（一）材料选取,2,、通过,镜检,来确定是否处于适宜的发育期,。,方法：,醋酸洋红法,(,将染色体染成红色,),焙花青,-,铬矾法,(,花粉细胞核染成蓝黑色,),。,1,、,从花药看,：月季的初花期,从花粉看：,单核期,从花蕾看,：完全未开放的,花药（载玻片上）,1%,的醋酸洋红,1,滴用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）,花药（在卡诺氏固定液中处理,20min,）取出，置于载玻片上,焙花青铬矾溶液染色,盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）,月季花药培养时的花粉粒最好是（）,A,、四分体时期,B,、,二核或三核花粉粒,C,、单核期,C,（二）材料的消毒,5,、无菌水冲洗,3,5,次,花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态,1,、花蕾用,体积分数为,70%,的酒精,浸泡,30,秒,2,、无菌水清洗,3,、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,4,、放入,质量分数为,0.1%,的氯化汞,溶液中,2,4,分钟 （,质量分数为,1%,的,次氯酸钙溶液,或饱和漂白粉溶液,）,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,讨论：,（三）接种和培养,1,灭菌后花蕾，要在,下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。,3,通常每瓶接种花药,，温度控制在,左右，,。幼小植株形成后才,。,2,在剥离花药时，要尽量,（,否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织,），同时还要彻底,，,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,。,一般经过,20-30,天培养后，会发现花药开裂，长出,愈伤组织或释放出胚状体,。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。,4,进一步鉴定和筛选：,常常会出现染色体倍性的变化,无菌条件,不损伤花药,去除花丝,7-10,个,25,不需要光照,需要光照,主要原因是,花粉管核和生殖核融合,造成的,植物组织培养技术与花药培养技术的比较,项目,相同点,不同点,植物组织培养技术,离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。,外植体为体细胞，染色体数无需加倍。,花药培养技术,取材为花药，培养的为,单倍体幼苗,，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为,纯种,。,谢谢,