紫外灯消毒效果验证.doc

传递窗紫外灯表面
消毒效果验证

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传递窗紫外灯表面消毒效果验证
目 录

1、概述 3
2、实施日期及时间安排 3
3、验证小组成员 3
4、仪器和设备 3
5、材料与试剂 3
6、验证过程 4
7、验证结果记录 8
8、再验证周期 9
9、相关SOP 9
10、QA职责 9
11、修改事项 9
12、文档 9

1、概述
进入净化车间的零配件或其它物品通过传递窗，进入微生物室的物品通过传递窗，经过紫外消毒后进入微生物室。为了确认传递窗紫外灯的消毒效果，特起草方案对其进行验证。本验证用于生产车间、微生物室、无菌室传递窗紫外灯表面消毒效果检查。
2、实施日期及时间安排
2007年月日开始进行验证。
3、验证小组成员

张兴雨
负责验证方案的批准

王宇
负责验证方案、验证报告的审核、组织验证方案的培训和实施
高江、张英
负责验证方案和验证报告的起草
验证方案的实施
4、仪器和设备
仪器名称
型号或规格
净化工作台
HS-1300-V型
菌落计数器

紫外线强度测定仪

稳压器
220V
细菌培养箱
SHP-150型
霉菌培养箱
GNP-9270型
5、器材
5.1灭菌刻度吸管（1ml，10ml）
5.2灭菌试管
5.3灭菌平皿
5.4酒精灯
5.5载体：（1.0×1.0cm的玻片）
6、材料与试剂
6.1纯化水
6.2营养琼脂培养基
6.3改良马丁琼脂培养基
6.4营养肉汤培养基
6.5改良马丁培养基
6.6金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]
6.7枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]
6.8大肠杆菌[CMCC（B）44 102]
6.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
6.10稀释液（0.1％吐温80，0.1％蛋白胨溶液）
7、验证过程
7.1 试验环境
试验在洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行，全过程严格遵守无菌操作。单向流空气区、工作台面及环境定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
每次操作开始前，开紫外灯照射1小时。
7.2 培养基的制备
7.2.1营养琼脂培养基
配方：
营养琼脂培养基粉 31.0g
纯化水 1000ml
配制：
根据需要量称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.1±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。

7.2.2 改良马丁琼脂培养基
配方：
改良马丁琼脂培养基粉 42.0g
纯化水 1000ml
配制：
根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。
7.2.3 营养肉汤培养基
配方：
营养肉汤培养基 20g
纯化水 1000ml
配制：
称取营养肉汤培养基20克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。
7.2.4改良马丁培养基
配方：
改良马丁培养基粉 28.0g
纯化水 1000ml
配制：
根据需要量称取改良马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。

7.4 方法验证试验
7.4.1辐照强度测定
7.4.1.1开启紫外灯5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪在灯管下方垂直1m的中心处测量其辐照度值（uW/cm2）。
7.4.1.2测量时，电压应稳定在220V。
7.4.1.3普通型或低臭氧型直管紫外线灯（30W），在灯管下方垂直1m的中心处，新灯管的辐照度值应≥90 uW/cm2 。使用中的灯管的辐照度值应≥70 uW/cm2 ，低于此值者应予更换。
7.4.2 照射剂量
表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到7.5×103 uW·s/cm2,对金黄色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌应达到2.53×104uW·s/cm2。
7.4.2.2照射剂量计算：
照射剂量（uW·s/cm2 ）＝紫外灯管强度（uW/cm2）×时间（s）
7.4.3 细菌及其芽孢和真菌杀灭效果的测定
7.4.3.1菌液的制备
接种菌种名称
接种培养基
培养条件
金黄色葡萄球菌新鲜培养物

营养肉汤培养基

30～35℃培养18～24小时
大肠杆菌新鲜培养物
枯草芽孢杆菌新鲜培养物
白色念珠菌新鲜培养物
改良马丁培养基
23～28℃培养24～48小时
金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌培养后，将菌液进行活菌计数。
7.4.3.2 将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌悬液，（载体回收菌量达5×105～5×106 cfu/片），涂匀，放37℃培养箱烘干。开启紫外灯5min后，将16个染菌玻片平放于灭菌平皿内，水平放于适当距离照射，于4个不同间隔时间（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。
7.4.3.3经适当稀释后，取1ml洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，细菌放30～35℃培养48小时作活菌计数，真菌放23～28℃培养72小时作活菌计数。
7.4.3.4阳性对照，除不做照射处理外，取4个染菌玻片，分别投入4个盛有5ml洗脱液试管中，振打80次。余按7.4.2.3同样操作。
7.4.3.5计算杀灭率
阳性对照回收菌数－试验组回收菌数
杀灭率（％）＝ ×100％
阳性对照回收菌数
7.4.3.6判定标准 对指示菌杀灭率≥99.9％判为消毒合格。
8、验证结果记录：
附件1. 试验菌数量测定原始记录
8、再验证周期
传递窗构造或紫外灯管放置位置发生改变时。
9、相关SOP
文件编号
文件名称
CK/ZY-059
紫外灯、照明灯管理制度
CK/ZY-012
物料进入控制区程序和清洁管理规定
CK/ZY-049
实验室操作制度
CK/ZY-068
初始污染验证方案
020343
培养基的配制
020344
细菌的接种、传代和保存

10、文档
所有的相关文档都应该保留至少5年，这些文档应包括如下内容：
原始方案、修改后的方案（如果有的话）、偏差报告、原始数据、原始报告和最终报告、其中，报告应该包括以下内容：
记录的原件（或复印件）、测试项目及条款、实验开始和结束的日期、材料和方法描述、出现的偏差描述（如果有的话）、实验结果。
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