实验——总黄酮含量的测定.doc

《有机分析实验讲义》植物中总黄酮的提取与测定
黄酮类化合物主要指以2—苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、花色素、查尔酮等以及它们的衍生物。其主要结构式如图。

图 黄酮类化合物分子结构式
黄酮类化合物主要结构类型见表。
表 黄酮类化合物主要结构类型

原理
黄酮母核中含有碱性氧原子,一般又多带酚羟基，能和铝离子产生黄色络合物,又加入亚硝酸钠和氢氧化钠,使在碱性溶液中呈红色，溶液在510 nm 处有最大吸收，显色反应在60 min 内稳定。用芦丁作为对照品，用硝酸铝作为黄酮类比色测定的显色剂，吸光度与芦丁的浓度呈线形关系，采用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。
仪器与试剂
新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。
60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制
称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。
标准曲线的制作
准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
3.6.4 总黄酮提取与测定和计算
称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml.
吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。

总黄酮含量=100×稀释倍数

A为标准曲线中的含量。
例如：
测得的吸光度=0.504 Y=0.0101x+0.0017
A===49.73
M为样品的质量(mg)