HIV抗体检测解读(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,HIV,抗体检测,1,HIV,简介,HIV,是,HIV,感染及艾滋病（,AIDS,）的病原体，主要通过性接触和体液传播，,HIV,主要侵犯和破坏辅助性,T,淋巴细胞（,CD,4,+,T,淋巴细胞），使机体细胞免疫功能受损，最后并发各种严重的机会性感染和肿瘤。,HIV,可分为,HIV-1,和,HIV-2,两个型，均为单链,RNA,病毒。前者分布广泛，后者主要局限于非洲某些国家和地区。,2,HIV,简介,人体感染,HIV,后，血液中最先出现,HIV,抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现,IgM,抗体并很快消失，此后,IgG,抗体出现并一直存在。,HIV,感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅，后者要求高，仅限于某些研究实验室中进行。,3,HIV,简介,HIV-,抗体检测分为筛查试验和确认试验两种，筛查试验为阳性的血清必须进一步确认，确认为阳性的方可报告,HIV,感染阳性。,筛查试验的要求是敏感性高，理论上要求达到,100%,（,97%-99%,），尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性（,99%,）要求不是太高，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复检测和确认试验排除。,4,HIV,抗体检测适用范围,适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对,HIV,感染者,/AIDS,病人的诊断、报告和处理的实验室依据。,5,HIV,抗体检测实验室,应符合,全国艾滋病检测工作规范（,1997,年版）,中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。,应符合,实验室 生物安全通用要求,（,GB 19489-2004,）对,II,级生物安全实验室（,BSL-2,）的各项要求。,实验室的质量保证和实验室安全防护按,全国艾滋病检测技术规范,规定执行。,6,HIV,抗体检测的目的,HIV,抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。,以监测为目的的检测是为了解不同人群,HIV,感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。,以诊断为目的的检测是为了确定个体,HIV,感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。,以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播,HIV,而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。,7,HIV,抗体检测的要点,筛查试验阳性不能出阳性报告。,严格遵守实验室标准操作程序（,SOP,）。,严格按照试剂盒说明书操作。,注意防止样品间交叉污染。,8,常规,HIV,抗体检测的方法,HIV,抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。,HIV,抗体检测筛查试验,筛查试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。,筛查方法：常用的筛查方法是酶联免疫试验（,ELISA,）。目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，第四代,ELISA HIV,抗原抗体联合测定试剂已在有些国家和地区用于血源筛查，同时检测抗原抗体，可将检出时间提前,49.1d,，有利于降低血源筛查的残余危险度。,9,其他简便快速的,HIV,检测方法,明胶颗粒凝集试验（,PA,）：,PA,是,HIV,血清抗体检测的一种简便方法，是将,HIV,抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有,HIV,抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原,-,抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。,HIV-1,和,HIV-2,抗原共同致敏的,PA,试剂（,AFD HIV-1/2 PA,），已经我国食品药品监督管理局（,SFDA,）注册批准。,斑点,EIA,或称斑点,ELISA,（,dot-EIA,）：以硝酸纤维膜为载体，将,HIV,抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同,ELISA,。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在,10 min,以内，使用抗原量少。,10,其他简便快速的,HIV,检测方法,斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：与斑点,EIA,相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金（或胶体硒）,A,蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的,ELISA,，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被,SFDA,批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在,10,30min,内判读结果。,11,其他简便快速的,HIV,检测方法,艾滋病唾液检测卡：,在硝酸纤维膜上包被人工合成的,HIVgp41/gp36,蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的,HIV-1/HIV-2,抗体，原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的,HIV IgA,与,IgG,抗体，敏感性特异性与,ELISA,相近，可避免静脉穿刺。,12,几种常规,HIV,抗体检测方法的比较,第三代,ELISA,第四代,ELISA,PA,胶体硒,WB,检测的是总抗体，,第四代,ELISA,可同时检测,P24,抗原,主要包括,IgM,、,IgG,抗体,IgG,抗体,P24,抗原消失、抗体产生时敏感性高,感染早期,P24,抗原出现时敏感性高,操作方便易行，敏感性特异性均可,敏感性低于第三代、第四代,ELISA,和,PA,IgG,抗体出现时特异性高,13,几种常规,HIV,抗体检测方法的比较,在感染早期，,IgM,抗体出现时第三代、第四代,ELISA,、,PA,、胶体硒方法优于,WB,，而在方法学上，硒标的敏感性要低于第三代、第四代,ELISA,和,PA,。,因此，当两种筛查试验均阳性或一阴一阳而,WB,阴性时，不能轻易报告阴性，要同,WB,不确定反应一样，至少随访,6,个月，以防漏检。建议将,WB,和胶体硒法检测的“窗口期”至少定为,6,个月。,14,样 品,初筛检测,筛查试剂,阳性反应,阴性反应,重复检测,原有试剂加另外一种筛查试剂,一阴一阳,均阴性反应,均阳性反应,送确认实验室确认,报告阴性,HIV,抗体筛查检测流程,15,HIV,抗体初筛试验,实验准备：将试剂和样品放置在室温,(20),平衡,按实验室,SOP,做好试剂准备。,实验操作：按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。,实验结果：,NC,、,PC,符合试剂盒实验成立的条件，,Cut off,值,=,阴性对照均值,+C,，小于,Cut off,为阴性，大于或等于,Cut off,为阳性。,报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具,HIV,抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。,16,HIV,抗体复检试验,对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告,HIV,抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（蛋白印迹试验）。,对,HIV,抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“,HIV,抗体阴性”报告；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“,HIV,抗体待复查”报告。,初筛试验呈阳性反应样品转送时需填写“,HIV,抗体复测送检单”。,对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。,17,HIV,抗体确认试验结果报告,HIV,抗体阴性：无,HIV,抗体特异带出现,。,排除因,“,窗口期,”,而出现的假阴性结果，建议高危行为后,3,个月时再做抗体检测。也可进行,HIV-1 P24,抗原或,HIV,核酸检测，作为辅助诊断。,HIV,抗体不确定（,）：出现,HIV,抗体特异带，但不足以判定阳性，在备注中应注明,“,3,个月后复检,”,。,随访复检：每,3,个月随访复检,1,次，连续,2,次，共,6,个月。如果检测时暴露时间已超过,3,个月，则在,3,个月后随访,1,次即可。,必要时可做,HIV-1 P24,抗原或,HIV,核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。,18,HIV,阳性结果的判定,HIV-1,抗体阳性（,+,）：至少有,2,条,env,带（,gp41,和,gp160/gp120,）出现,或至少,1,条,env,带和,p24,带同时出现。,HIV-2,抗体血清学阳性（,+,）：同时符合试剂盒提供的阳性判定标准和,WHO,阳性判定标准，即出现至少,2,条,env,带,(gp36,和,gp140/gp105),。,19,WB,确认试验中,HIV,抗体特异带,HIV-1,抗体特异带：,env,带,:gp160/gp120,、,gp41,；,gag,带,:p55,、,p24,、,p17(,或,p18),；,pol,带,:p66(,或,p65),、,p51,、,p31,。,HIV-2,抗体特异带：,env,带,:gp140/gp105,、,gp36,（也可为,gp125/gp80,、,gp36,）；,gag,带,:p56,、,p26,、,p16,；,pol,带,:p68,、,p53,、,p34,。,20,HIV,抗体检测的替代策略,21,送检样品,用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括进口第三代,ELISA,试剂,进口第三代,ELISA,试剂,复测,S/CO,比值,6.0,进口第三代,ELISA,试剂,复测,S/CO,比值,1.0,5.9,确认试验,判定阳性，上报疫情,两种均阳性,两种均阴性,一阴一阳,阳性反应,阴性反应,选用筛查试剂,阳性,阴性,不确定，随访,判定阴性,替代策略,（,HIV,感染疫情报告检测策略）检测流程,22,替代策略,（高危人群,VCT,检测策略）检测流程,23,替代策略,（一般人群,VCT,策略）的检测及结果报告流程图,24,HIV,抗体检测情况季报流程,艾滋病筛查中心实验室,艾滋病确认中心实验室,省卫生行政部门,同级卫生行政部门,未设置艾滋病筛查中心实验室的地区,艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点,每季首月,5,日前报告上季检测情况,每季首月,10,日前,报告上季检测情况,每季首月,5,日前,报告上季检测情况,艾滋病确认,实验室,每季首月,15,日前,报告上季检测情况,每季首月,10,日前报告上季检测情况,中国,CDC,性艾中心,艾滋病参比实验室,25,HIV,核酸定性检测,规定了核酸检测、核酸序列测定的实验室条件、检测方法及结果判定标准,结果报告,：,HIV,核酸检测阴性,:,只可报告本次实验结果阴性。,HIV,核酸检测阳性,:,可作为诊断,HIV,感染的辅助指标，不单独用于,HIV,感染的诊断。,严格的实验室管理制度（分区、仪器和材料的专用、单向流向、,废弃物处理,）,26,HIV RNA,定量测定（病毒载量测定）,实验室条件,实验室功能分区,（,试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区,）,人员,(,具有艾滋病实验室上岗资格并接受省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训,),设施和设备,（,区域性专用,）,方法,常用的,HIV RNA,定量测定方法有逆转录,PCR,试验（,RT-PCR,）、核酸序列扩增试验（,NASBA,）、分支,DNA,杂交试验（,bDNA,）。,27,不同病毒载量检测方法的比较,28,HIV,核酸定量检测的意义,辅助诊断：,当,RNA,测定出现较高拷贝数的阳性结果时（,3,，,000c/ml,），感染发生的可能性非常大。,应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。,早期诊断,：,HIV,感染孕妇所生婴儿,、,残余危险度,病程监控,：,确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。,指导治疗方案及疗效判定,：,通常在治疗前后病毒水平降低,0.5 log,以上才被认为临床有效。,预测疾病进程,29,适用范围,：,HIV-1,抗体不确定或窗口期的辅助诊断；,HIV-1,抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代,HIV-1,抗原,/,抗体,ELISA,试剂检测呈阳性反应，但,HIV-1,抗体确认阴性者的辅助诊断；监测病程进展和抗病毒治疗效果。,检测方法,：通常是采用,ELISA,双抗体夹心法。,HIV P24,抗原的检测,30,结果报告和解释,HIV-1 P24,抗原的阳性结果必须经过中和试验确认，若阳性标本的,OD,值比中和反应前减少,50%,以上，才确定为,HIV P24,抗原结果阳性。,HIV-1 P24,抗原阳性仅作为,HIV,感染窗口期的辅助诊断依据，不能据此确诊。,HIV-1P24,抗原检测的敏感性为,30,90,，低于病毒载量测定。,HIV-1P24,抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除,HIV,感染。,31,谢谢大家！,32,