高中生物知识梳理复习231实验三学习细菌培养的基本技术.doc

实验三 学习细菌培养的基本技术
教学目的
1． 通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，理解配制培养基的一般步骤和方法。
2． 理解灭菌的基本原理以及实验室中常用的灭菌方法。
3． 初步掌握细菌培养的基本技术。
实验原理
1． 配制培养基时要注意原料的选择和调节适宜的PH
2． 配制好的培养基必须经过灭菌，灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物细胞、芽孢和孢子。
3． 对不同的材料，应当采取不同的灭菌方法：培养基一般采用高压蒸汽灭菌法，而接种环则用火焰灼烧法
方法步骤
一、培养基的配制
1． 称量
2． 溶化：加入材料（蛋白胨、牛肉膏、琼脂等）加热溶化
3． 调PH：1mol/L的NaOH溶液，PH试纸，7．4～7．6
4． 分装：加热溶化后，每管1/5
5． 加棉塞：棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。不能太松、不难太紧，2/3在管内
6． 包扎
二、灭菌
1． 开锅加水
2． 放入待灭菌的材料：管中向上，竖放，不能太挤
3． 加盖
4． 排出锅内冷空气：达49Kpa时，排气两次
5． 维持：98 Kpa，20min
6． 排气：锅内压力降为0时，才能排气
三、搁置斜面
将锅内试管等取出，在冷却至50℃时，搁置斜面，斜面长度不能超过试管总长度的1/2
四、接种
1． 洗净双手，用酒精擦拭
2． 等手上酒精挥发以后，点燃酒精灯
3． 接种
①左手夹住菌种试管和接种斜面试管，拧松棉塞
②接种环灼烧灭菌
③右手无名指和小指夹住棉塞（不能放下），灼烧管口一周
④接种环伸入试管内，在末长菌的部位冷却，后挑取少量菌体，立即抽出
⑤在火焰旁迅速将接种环由斜面底部向外轻轻画蛇形细线
⑥抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰上方将棉塞塞上
4． 熄灭酒精灯
5． 填写标签
五、培养：25℃下5-7d，37℃下24h。

【同类题库】
．不同微生物生长所要求的最适温度不同。请就测定大肠杆菌生长最适温度的实验回答下列问题：
(1)配制的相应培养基可属于 。(填字母)
A．天然培养基 B．半固体培养基 C．液体培养基 D．伊红一美蓝选择培养基
(2)依次按称量、溶化、调pH、分装(每管5ml)、 、包扎的顺序，完成培养基的配制，再用 （方法）灭菌后，取8支试管，分别标明20℃、28℃、37℃、45℃四种温度，每种温度2管。
(3)向每管中接人处于 期的大肠杆菌菌液0．lml，混匀。在相应温度下培养24h。
(4)测定结果显示，45℃下的菌体最少，因为细胞内的 等发生了不可逆的破坏。
[(1)A、C(2分)加棉塞(1分)高压蒸气灭菌法(1分) (3)对数(1分)(4)蛋白质和核酸。(1分)]

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用心 爱心 专心