食品微生物检验1.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,Click to edit Master text styles,LOGO,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食品微生物检验 1,第一 食品的微生物污染及途径,一 食品污染,动物性食品：易腐性,植物性食品：发霉变质,食品污染,：,食品中原来含有或者加工时认为添加的生物性或化学性物质，这些物质对人体健康都具有急性或慢性的危害。,食品污染,生物性污染,：食品受到了微生物及其毒素、寄生虫、有毒生物组织及昆虫的污染。,化学性污染,：食品在生产、加工直至销售、使用的各环节中，带染了农药、药物及某种食品添加剂等。,放射性污染,食品,二 食品的微生物污染源,食品在其生产、加工、贮藏、运输、销售、食用过程中均有可能受到某些微生物及其毒素的污染，这些污染到食品中的微生物既有质腐性微生物，也有致病性微生物或中毒性微生物。概括起来有,土壤,、,水,、空气、人和动植物、加工设备、原料、和包装材料,等方面。,1 土壤中微生物对食品的污染,土壤中的微生物种类以,细菌为,主，其次是,放线菌,和,真菌,。,土壤中的微生物按其生活方式和致病性可分为自养菌、异养菌、病原菌。,来源于动物尸体、粪便、垃圾、医院污水等。,2 水中微生物的污染,水中微生物种类很多，主要来自于土壤、空气、动物排泄物、工厂和生活污物等。,3 空气中微生物的污染,主要来自于土壤、水、人及动物,三,食品微生物污染的途径,内源性污染（第一次污染）：动植物在生长发育过程中，由本身带染的生物性或从环境中吸收的化学性或放射性物质而造成的食品污染。,外源性污染（第二次污染）：食品在生产、加工、运输、贮藏、销售等过程中，若不遵守操作规程或不按卫生要求操作，则导致食品受到生物性、化学性、放射性污染。,四 食品微生物污染的危害,食物传染,：通过接触或食用某些食品而引起人类某种传染病疾病，或通过食品原料及副产品而引起动物发生某种传染性疾病。,食品中毒,：健康的人经口摄入正常数量的可容状态的食品后，所引起的以急性过程为主的疾病。,“三致”作用,：,致癌、致畸、致突变,。,引起“三致”作用的物质是微生物毒素，常见的有霉菌毒素，例如黄曲霉毒素，肉毒毒素，肠毒素。其中黄曲霉毒素的致癌力是目前已知的最强的致癌物之一。,4,、造成食品资源的浪费及经济基础。,五 食品微生物污染的控制,发生食品微生物污染的原因是多方面的，既有内源性因素，也有外源性因素，其中外源性因素的重要的，在外源性因素中，各种加工方法、食品保存加工方法、食品保存方式、运输方式、从业人员的卫生状况及环境的卫生状况都是造成食品发生微生物污染的重要原因,。,2,食品微生物污染的控制措施,建立健全各种卫生制度,严格执法,加强食品原料的卫生管理,加强食品生产过程中的卫生监督与管理,注意食品的运输和贮藏的卫生管理,开展情报和技术交流,适当采取干预措施,加强食品卫生的宣传教育，提高人们对食品的认识。,第二 食品的腐败变质与控制,一 食品腐败,指在微生物为主的因素下，使食品组成成分发生分解，食品在色、香、味、形等感官性状和营养成分方面发生质的变化，从而导致食品质量下降或完全丧失食用价值，这一系列的理化性质的变化现象,。,腐败：微生物的作用下，食品中蛋白质发生分解而产生的以恶臭为主的变化,。,酸败：微生物分解食品中碳水化合物及脂肪而引起的以酸臭为主的变化,食品腐败变质的机理,蛋白质的分解,脂肪分解,碳水化合物的分解,二 食品腐败变质的控制,防止或减少微生物的污染,杜绝内源性污染,减少外源性污染,破坏微生物生存、繁殖的条件,控制温度保藏食品的方法,降低食品水分活性,-,干燥法等,三 食品卫生微生物检验方法,菌落总数测定（GB4789.2）,大肠菌群测定（GB4789.3）,沙门氏菌检验（GB4789.4）,志贺氏菌检验（GB4789.5）,致泻大肠埃希氏菌检验（GB4789.6）,副溶血性弧菌检验（GB4789.7）,小肠结肠炎耶尔森氏菌检验（GB4789.8）,空肠弯曲菌检验（GB4789.9）,金黄色葡萄球菌检验（GB4789.10）,溶血性链球菌检验（GB4789.11）,肉毒梭菌及肉毒毒素检验（GB4789.12）,产气荚膜梭菌检验（GB4789.13）,蜡样芽胞杆菌检验（GB4789.14）,霉菌和酵母计数（GB4789.15）,常见产毒毒菌的鉴定（GB4789.16）,肉与肉制品检验,乳与乳制品检验,蛋与蛋制品检验,水产食品检验,清凉饮料检验,调味品检验,冷食菜、豆制品检验,糖果、糕点、果脯检验,酒类检验,罐头检验,鲜乳中抗生素留量检验,第三 食品微生物检验的指标,常采用的微生物检验指标为三项细菌指标，即细菌数量（主要是菌落总数）、大肠菌群近似数（MPN）和致病菌。,一 菌落总数,食品中的细菌数量对食品的卫生质量具有极大的影响，它反映了食品受微生物污染的程度。细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种：,菌落总数和细菌总数。,菌落总数,：,指一定数量或面积的食品样品，在一定条件下进行细菌培养，使适应该条件的每一个活菌必须而且只能形成一个肉眼可见的菌落，然后进行菌落计数所得的菌落数量。,通常以1g或1ml或1cm,2,样品中所含的菌落数量来表示。菌落计数以菌落形成单位,（CFU）,表示。,细菌总数：,一定数量或面积的食品样品，经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。通常以1g或1ml或1cm,2,样品中的细菌总数来表示。,GB/T 4789.2-2008 菌落总数检验,菌落计数,可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。,1,选取菌落数在30 CFU-300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。,2,其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。,3,当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，,则将每条单链作为一个菌落计数,菌落总数的计算方法1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式计算：N=C/（n1+0.1n2）d 式中：N 样品中菌落数；C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；nl 第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2 第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d 稀释因子（第一稀释度）。,结果的表述,若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300 之间，其中一部分小于30 或大于300 时，则以最接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。,菌落总数的报告,1 菌落数在100 以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。2 大于或等于100 时，第三位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。,二 大肠菌群MPN,大肠菌群系指一群在37能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。,大肠MPN是指在100ml（或100g）食品检样中所含的大肠菌群的最近似或最可能数,。,大肠菌群,MPN,的概念及意义,大肠菌群主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。所以此菌可作为判断食品是否被肠道致病菌所污染及其被污染程度的指示菌,。,大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，所以其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。,大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多,。,大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。,大肠菌群数量的表示方法有两种：,大肠菌群MPN和大肠菌群值。,大肠菌群MPN是采用一定的方法，应用统计学的原理所测定和计算出的一种最近似数值。,大肠菌群值：,在样品中检出一个大肠菌群细菌时所需要的最少样品量,。所以，大肠菌群值越大，表示食品总所含的大肠菌群细菌的数量越少，食品质量也就越好。,大肠菌群,MPN,的常规检验方法,我国现有的大肠菌群检出标准，是国家标准（,GB/T 4789.3-2008,）,大肠菌群MPN的常规检验方法是将不同倍数的检样稀释液接种到LST肉汤中内，经一定的温度、时间发酵，若均不产气者则可报告为阴性，如有产气者，则需进行分离培养，证实实验，然后查取MPN检索表，报告出每100ml（g）大肠菌群的最近似值。,检样25g（25ml）+225ml稀释液，均质,10倍系列稀释,选择适宜,三,个连续稀释度的样品菌液，接种,LST,肉汤管,(36,+,1,48,+,2h),不产气,产 气,BGLG肉汤,36,+,1,48,+,2h,),产气,不产气,大肠杆菌阳性,报 告,大肠菌群阴性,查MPN表,大,肠,菌,群,检,验,程,序,稀释一般采用三个连续的稀释度，一般是33系列，在不同稀释度中，取三个连续的稀释度，每个稀释度接种三个发酵管，共取9个管。,月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤：,蛋白胨作为基础营养物质提供细菌生长所需的碳源、氮源及其他的营养元素；氯化钠可维持均衡的渗透压，乳糖作为可发酵的碳水化合物；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾是缓冲剂，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群细菌的生长。,细菌可以分解糖或醇（葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油）的能力，发酵后产生各种有机酸（乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸）及各种气体（H,2,、CO,2,）.大肠菌群内的细菌可以在,37发酵乳糖产酸,产气，可见倒立,的杜氏小管,中有气泡产生,。,煌绿乳糖胆盐肉汤：（BGLG肉汤）,蛋白胨提供氮源，乳糖为可发酵的糖类，牛胆粉和煌绿抑制非肠杆菌科细菌,伊红美蓝琼脂平板分离,a：分离作用；,b：鉴别作用。（把要检的细菌和杂菌分开），可为进一步证明大肠菌群的存在，进行平板分离，所用培养基为伊红美蓝琼脂。伊红和美蓝是抑菌剂和pH指示剂，可以抑制G+菌和一些难培养的G-菌，而且在低酸度时，两种染料结合形成沉淀，起着产酸指示剂的作用。产生沉淀，形成紫黑色菌落或具黑色中心的外围无色透明的菌落。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产生大量混合酸,伊红美兰琼脂平板,划线培养,大肠菌群的典型菌落,（1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落,（2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落,（3）淡紫红色、中心色较深的菌落。,革兰氏染色阴性菌,其它测定方法有疏水网膜法，TTC（2、3、5-氯化三苯四氮唑）显色法，DC（去氧胆酸钠）半固体法、纸片法等。,大肠菌群,MPN,的其它检测方法,第四 食品中毒性微生物的检验,一 食物中毒,食物中毒：健康的人，经口摄入正常数量的可食状态的食品后，所引起的以急性过程为主的疾病。,因食用被微生物或微生物毒素污染的食品而引起的中毒称为,微生物性食物中毒。,细菌性食物中毒,：人们吃了大量活的食物中毒性细菌或细菌产生的毒素污染的食品所引起的中毒现象。,霉菌毒素食物中毒,感染型食物中毒,毒素型食物中毒,混合型食物中毒,沙门氏菌及其检验,沙门氏菌可引起混合型的食物中毒。对动物性食品的污染较为常见，可归纳总结为两条途径,。,内源性污染,外源性污染,沙门氏菌属是,肠杆菌科,的一个大属，包括2000多个血清型，在形态结构、培养特性、生化特性和抗原构造方面都非常相似，是一类,形态短小的革兰氏阴性杆菌,，主要寄居于,人和其它温血动物的肠道,中，引起多种性质的疾病。,根据沙门,氏菌的致,病范围，,分为,三,大,类群：,专门对人致病：如伤寒沙门氏菌,引起人类食物中毒：如鼠伤寒沙门氏菌,专门对动物致病很少感染人：如马流产沙门氏菌,沙门氏菌食物中毒的主要症状：,急性胃肠炎,，潜伏期6-12小时，最长达24小时，临床表现为,恶心、头痛、出冷汗、面色苍白,，继而出现,呕吐、腹泻、发热,、体温可高达,38-40,，中毒严重的出现寒战、惊厥、抽搐、昏迷。,一 生物学特性,形态与染色特性,：,沙门氏菌为革兰氏,阴,性、,两端钝园的短杆菌,，,不,形成荚膜和芽胞，除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏外，都具有周身鞭毛，能运动，大多数具有菌毛。,培养特性,：,属于,需氧及兼性厌氧菌,，最适宜生长温度为,37,，最适生长的,PH,值为,6.8-7.8,，普通琼脂培养基培养,24,小时后，形成,中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明，边缘整齐的菌落,。,血清学特性,一般沙门氏菌具有,菌体（O）抗原,、,鞭毛（H）抗原和表面抗原（荚膜和包膜抗原）,三种抗原。,O抗原存在于菌体表面，沙门氏菌的O 抗原共有,65,种。,H抗原存在于,鞭毛,中，其化学成分是,蛋白质,，不耐热，其抗原性可被,酒精,破坏，H 抗原常有,两相,的变异，,第一相为特异相,，用小写英文表示，,第二相为非特异相,，阿拉伯数字表示，,凡具有两相抗原的为双相菌,，大多数沙门氏菌属于此类，也有,只有一相H抗原，为单相菌,。极少数无鞭毛菌,两相抗原都不具有，为无相菌。,抵抗力,沙门氏菌对一些杀菌药物、热、及不良环境的抵抗力不强，冷冻对于沙门氏菌无杀灭作用，及时在-25低温环境中仍可存活10个月左右。,毒素特性,沙门氏菌不产生外毒素，但当菌体裂解时，可产生毒性很强的内毒素，这为致病的主要因素。,生化特性：,一般特性：分解葡萄糖、甘露醇、山梨醇产气（伤寒沙门菌产酸不产气）。不分解乳糖、蔗糖、不水解尿素。多数产生H2S，不产生靛基质（不产吲哚），不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，多数在氰化钾培养基上不生长。,一般4h，干蛋品1824h,1824h,36,1824h,1824h,361,361,42,36,10ml+SC100ml;,非沙门氏菌,36,4048h,1824h,1824h,42,检 样,前增菌法：,冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 25gBP 225ml,直接增菌法：,鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品25g灭菌生理盐水225ml，做成检液匀液,10mlMM(或TTB)100ml,检样匀液25ml+MM（或TTB）100ml,BS,DHL(或HE、WS、SS),挑取可疑菌落,TSI（斜面、底面、产气、H,2,S），蛋白胨水（靛基质），尿素（,pH7.2），KCN，赖氨酸,反应序号：A1,反应序号：A2,反应序号：B1,反应序号：A3、A4、B2、B3、B4,甘露醇、山梨醇,沙门氏菌血清学试验,ONPG、鸟氨酸,非沙门氏菌,沙门氏菌血清学试验,报 告,检样匀25mlSC100ml,（或TTB）100ml,非沙门氏菌,按照国家标准方法，沙门氏菌检验有五个基本步骤：,前增菌,：,使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态,。,沙门氏菌在食品加工过程中，常常受到损伤而处于濒死状态，因此，对经过加工的食品检验沙门氏菌时应进行前增菌。即用不加任何抑菌剂的培养基缓冲蛋白胨水（,BP,）进行增菌。未经加工的食品，可直接进行选择性增菌。,二 检 验,选择性增菌：,在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。,选择性增菌常用的增菌液有亚硒酸盐胱氨酸增菌液（,SC,）、四六磺酸钠煌绿增菌液（,TTB,）、因为沙门氏菌有,2000,多个菌型，一种增菌液不可能适用所有的沙门氏菌，因此，沙门氏菌要同时用两种以上的培养基增菌。,平板分离沙门氏菌,：这一步采用固体选择性鉴别培养基，经过选择性增菌后，抑制了大部分杂菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。常用的分离沙门氏菌的选择性培养基有亚硫酸铋琼脂（,BS,）、木糖赖氨酸脱氧胆盐,(XLD),琼脂,沙门氏菌属各亚属在各种选择性琼脂平板上的菌落特征,选择性,琼脂平板,亚属、,亚属（即亚利桑那菌）,亚硫酸 琼脂（BS）,产H,2,S菌落为黑色有金属光泽,、棕褐色或灰色、菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株不产生H,2,S，形成灰绿色的菌落，周围培养基不变色。,黑色有金属光泽。,DHL琼脂,无色半透明，产生H,2,S菌落中心带黑色或几乎全黑色。,乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与亚属、相同，乳糖阳性的菌株为粉红色，中心带黑色。,HE琼脂,蓝绿色或蓝色，多数菌株产H,2,S，菌落中心黑色或几乎全黑色。,乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，中心黑色或几乎全黑色。,SS琼脂,无色透明,，产生H,2,S菌株，有的菌落中心带黑色，但不如以上培养基明显。,乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与亚属、相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大肠埃希氏菌不能区别。,沙门氏菌在 35 培养 24-48 小时后，XLD培养基上无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色。志贺氏菌为无色透明菌落。大肠杆菌为黄色菌落，其外围有黄色环。,显色培养基,生物化学筛选：,排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。选择平板上符合沙门氏菌特征的菌落，不一定就是沙门氏菌，因为肠杆菌科的某些菌属和沙门氏菌在平板上的菌落相似，所以需做生化实验进一步鉴定。,初步生化试验做三糖铁（,TSI,）实验，培养基做成斜面，颜色为砖红色，将待检菌穿刺接种，然后再划线接种于高层斜面上。,蛋白胨 20.0g 牛肉膏3.0g,乳 糖 10.0g 蔗糖 10.0g 葡萄糖1.0g,硫酸亚铁铵(含6个结晶水)0.5g,酚红 0.025g或5g/L溶液5mL氯化钠5.0g 硫代硫酸钠0.5g琼脂 15-20g 蒸馏水 1000.0mL,除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.40.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm100mm),每管约24mL,高压灭菌121 10 min或11515 min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。,。,肠杆菌科的细菌在三糖铁培养基上的反应主要有：,分解葡萄糖、乳糖和蔗糖：分解三种糖产酸，使酚红变黄色。,分解葡萄糖，不分解乳糖和蔗糖：斜面产碱，酚红变深红色，底层产酸，变成黄色。,分解葡萄糖、乳糖或蔗糖：结果同,a,）,分解含硫酸氨基酸产生硫化氢：生成硫化铁黑色沉淀。,分解糖类产气：可见气泡或裂缝。,生化试验,:挑取可疑菌落，接种于TSI中，只有斜面产酸同时H,2,S阴性的菌株可排除，其它反应结果还需进一步生化试验。,肠杆菌科各菌属在三糖铁琼脂内的反应结果,斜面,底层,产气,H,2,S,可能的菌属,/,沙门氏菌属、变形杆菌属、枸橼酸杆菌属、爱德华氏菌属,/,沙门氏菌属亚属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属,沙门氏菌属、埃希氏菌属、哈夫尼亚菌属、摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属,伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌、志贺氏菌属、埃希氏菌属、哈夫尼亚菌属、摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属,/,埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、枸橼酸杆菌属,原 理 分 析,本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色,。,如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。,志贺氏菌都能分解葡萄 糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H,2,S。应该产生什么现象？,沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H,2,S，多数产气。能产生什么现象？,大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H,2,S。应该是什么现象？,下面照片所示,2-3-4，可能是,大肠杆菌、沙门氏菌,或志贺氏菌？,蛋白胨水(靛基质)：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。,阳性（液面红）,阴性（液面黄）,空白对照,其它生化试验：在接种三糖铁的同时，再接种蛋白胨水(供作靛基质试验)、尿素（pH7.2）琼脂、KCN培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各一管。,尿素酶试验：有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。,KCN（氰化钾）生长抑制试验：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液,挑取1环接种于氰化钾(KCN)培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在361,培养12d,观察结果。如果对照培养基出现长菌浑浊，而KCN没有出现长菌情,况，则可证明有沙门氏菌的存在。,赖氨酸脱羧酶试验,对照 阳性（紫）阴性（黄）,赖氨酸脱羧酶试验：检测沙门氏菌产生赖氨酸的能力，阴性为黄色，阳性为紫色。（指示剂为溴钾酚紫）,按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其它五种结果均可排除。,肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表,反应序号,H,2,S,靛基质,pH7.2,尿素,KCN,赖氨酸,脱羧酶,判定菌属,A,1,沙门氏菌属,A,2,沙门氏菌属（少见）、爱德华氏,菌属,A,3,枸橼酸杆菌属、奇异变形杆菌,A,4,普通变形杆菌,B,1,沙门氏菌属、埃希氏菌属,甲型副伤寒沙门氏菌、埃希氏菌,属、志贺氏菌属,B,2,埃希氏菌属,埃希氏菌属、志贺氏菌属,B,3,/,克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆菌、,枸橼酸杆菌属,B,4,/,摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属,反应序号A1，,典型反应判断为沙门氏菌属,。如：尿素、KCN和赖氨酸三项中有一项异常，可判定为沙门氏菌，两项异常就可判定为A3。,反应序号A2，可疑先做补做甘露醇和山梨醇试验和血清学鉴定。,反应序号B1，三糖铁斜面产酸的菌株可首先排除，不产酸的补做鸟氨酸（,）赖氨酸（,）、ONPG（,-半乳糖苷酶试验,）（,）、水杨苷（,）、棉子糖（,）、动力试验（,）。同时做血清学鉴定。,血清学分型实验,:,血清学技术确定菌型，采用玻片凝集试验,(1)乳糖发酵过程中需要乳糖,通透酶和半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-D-半乳糖苷（ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。(2)方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35水浴,或孵箱孵育1824h，观察结果。(3)结果：呈现亮黄色为阳性，无色为阴性。,-半乳糖苷酶,动力试验,血清学凝集试验,沙 门 氏 菌 病,沙门氏菌病，又名,副伤寒,，是各种动物由沙门氏菌属细菌引起的疾病总称。临床诊断上多表现为败血症和肠炎，也可使母家畜发生流产。,本菌对干燥、腐败、日光等因素具有一定的抵抗力，在外界条件下可以生存数周或数月，对于化学消毒剂的抵抗力不强，一般用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。,流行病学,沙门氏菌属中的许多类型对人、家畜和家禽以及其他动物均有致病性。,其中幼畜禽较成年者最易感,。主要发生于4个月龄以内的断乳仔猪。成年猪和哺乳猪很少发病。主要污染源：病畜和带菌者，可由粪便、尿、乳汁以及流产的胎儿、胎衣和羊水排出病菌，污染水源和饲料等，经消化道感染。,病菌可潜藏于,消化道、淋巴组织和胆囊内,本在病一年四季均可发生。本病发生后，一般呈散发性或流行性。,下列因素可促进本病的发生，环境污秽，粪便堆积，长途运输中气候恶劣，疲劳，分娩，手术，等等。,禽沙门氏菌病,禽沙门氏菌病形成相当复杂的传播循环。病禽和带菌禽是主要的传染源，主要通过带菌卵而传播的。,禽沙门氏菌病依据病原体的抗原结构不同分为三种：由鸡白痢沙门氏菌所引起的称为鸡白痢，由鸡伤寒沙门氏菌引起的称为禽伤寒。,由其他有鞭毛能运动的沙门氏,菌引起的称为禽副伤寒。,1：鸡白痢,各种品种的鸡对本病都有易感性,。,最急性,无症状迅速死亡。,稍缓者排稀薄如浆糊状白色石灰样粪便，肛门周围毛被粪便污染，有的因粪便干结封住肛门周围，影响排粪。肛门周围炎症引起疼痛，故常发生尖锐的叫声，最后因呼吸困难及心力衰竭而死。,鸡白痢雏鸡拉白痢，粪便粘住肛门不能排粪，精神沉郁,病鸡排白色稀粪，肛门周围被粪便沾污，糊肛，,【成鸡慢性白痢】病鸡表现缩头垂翅，羽毛蓬乱，怕冷，喜扎堆，不食，拉白色稀便,。,【成鸡慢性白痢】病鸡跗关节肿大（左侧），瘫痪，跛行，死亡率高,【成鸡慢性白痢】病鸡精神沉郁，缩头闭眼,【成鸡慢性白痢】病鸡眼睛呈云雾状混浊，失明,【成鸡慢性白痢】产蛋鸡患成鸡慢性白痢时卵泡变形、坏死。卵巢变形；变色；卵黄液油脂状、混浊、稀薄或呈干酪样，有的卵泡呈充满透明液的囊泡,【成鸡慢性白痢】肺可能呈褐色、实变，有坏死灶,【成鸡慢性白痢】肺脏上有灰白色结节,【成鸡慢性白痢】肝脏肿大,有灰白色细小坏死点,【成鸡慢性白痢】肝棕色，肿胀，散在坏死点,【成鸡慢性白痢】成鸡慢性白痢肌胃表面有白色的病灶,【成鸡慢性白痢】盲肠病变。,右下侧顶端膨大部，内有干酪样物堵塞,【成鸡慢性白痢】心包炎和肝脏地图样坏死,【成鸡慢性白痢】心肌坏死结节，心肌黄色坏死或灰白色增生结节，坏死灶界限不情，严重时心脏变形,【成鸡慢性白痢】心脏变形,上有灰白色结节,【成鸡慢性白痢】心脏变形,上有灰白色结节,【成鸡慢性白痢】右:肝散在坏死斑纹,形如地图;,中:盲肠内积炎性渗出物,呈干酪性凝栓,使肠管增粗,变硬,猪沙门氏菌病,猪沙门氏菌病，又名仔猪副伤寒，主要表现为,败血症,和坏死性肠炎，有时发生脑炎、脑膜炎、卡他性或干酪性肺炎。世界各地均有发生。,（1）临床症状败血型沙门氏菌病,（2）结肠炎型沙门氏菌病,仔猪副伤寒主要症状,常见发育滞缓的仔猪,只吃料不长肉的情况,称为僵猪,耳朵，鼻端等肢体末梢皮肤瘀血，呈弥漫的紫红色,肾出血，出现坏死灶,回肠后段急性出血性炎,结肠全段急性卡他性出血性肠炎，粘膜附着多量纤维蛋白,卡他”是向下滴流的意思，用来形容黏膜渗出液多,结肠盲结肠内有多量暗,红色液体，急性卡他性,出血性肠炎,结肠盲结肠内有多量暗红色液体，急性卡他性出血性肠炎,沙门氏菌的诊断,根据临诊症状和病理变化，只能做出初步诊断，确诊需要从病畜的血液、内脏器官，粪便或肝、脾取材，做沙门氏菌的分离鉴定,。,沙门氏菌的防治,1 鸡舍如何清洁？包括消毒液、门窗、孵化器、饮水槽以及鸡蛋的消毒等等。,2 血清学试验？,