免疫组化应用.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫组化在病理诊断中的应用,免疫组化简介,免疫组化原理,Enlivision染色措施,免疫组化的使用范围,各系统肿瘤的抗体体现,免疫组化的原理,根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理，应用标识抗体检测组织中未知抗原的措施。,抗原+抗体（标识）抗原抗体复合物,通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分（蛋白抗原）,显示系统：抗原抗体复合物+检测系统,将二抗和酶通过一种多聚葡聚糖骨架联接成一种多聚体（即EnVision）,Primary Antibody,Polymer complex,Substrate-chromogen,solution,tissue,Enlivision染色措施,(1)、将切片捞至APES胶片上，放入60温箱中烘烤1小时。,(2)、经二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水后流水冲洗。,(3)、过3 H2O2中20min后流水冲洗。,(4)、修复高火3min后，低火15min后，自然冷却至室温。,(5)、取出玻片放至湿盒，PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或 50l的第一抗体40min。,(6)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50l的聚合物增强剂(试剂A），室温孵育20min。,(7)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加1滴或50l的酶标鼠/兔聚合物(试剂B），室温下孵育30min。,(8)、PBS冲洗，3minx3。擦干玻片，每张玻片加2滴或100l的DAB液，显微镜下观测，10min显色。,(9)、流水冲洗，苏木素复染1-2min，0.1盐酸分化，自来水冲洗后返蓝。,(10)、梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。,免疫组化的使用范围,组织学标本中的应用,细胞块中的应用,各系统肿瘤的抗体体现,对肿瘤进行来源分类,上皮性肿瘤的标识物 CK,间叶肿瘤的标识物 Vimentin,淋巴造血系统肿瘤的标识物 LCA,神经内分泌肿瘤的标识物 Syn、CgA、CD56,各系统肿瘤的抗体体现,上皮性肿瘤中的腺癌,CK7+CK20-,Villin+,Villin-,可见于,：胃腺癌(41.67%)、,乳头状肾细胞癌(17.39%)、,乳腺浸润性导管癌(5.36%)、,卵巢浆液性腺癌(3.7%),少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、,肺小细胞癌、肾透明细胞癌、,嫌色细胞癌、前列腺癌、,直肠腺癌、乳腺浸润性小叶癌、,卵巢粘液性癌。,可见于,：乳腺浸润型小叶癌(100%）、,肺腺癌(95.83%）、乳腺浸润型,导管癌(78.57%)、卵巢浆液性腺癌,(70.37%）、嫌色细胞癌(66.67%）、,卵巢粘液性腺癌(37.5%）、肺鳞癌,(11.43%）、前列腺癌(9.09%）、,直肠腺癌(2.78%）、胃腺癌(2.78%）,、肾透明细胞癌(2.33%）。,少见于,：肺小细胞癌、乳头状肾细,胞癌。,CK7+CK20+,Villin+,Villin-,可见于,：胃腺癌(13.89%）、,卵巢粘液性腺癌(12.5%）、直肠,腺癌(5.56%），乳头状肾细,胞癌(4.35%）,少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、,肺小细胞癌、肾透明细胞癌、,肾嫌色细胞癌、乳腺癌、,卵巢浆液性癌。,可见于,：卵巢粘液性腺癌(12.5%）,乳腺浸润性导管癌(3.57%）、胃腺,癌(2.78%）、直肠腺癌(2.78%）。,少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、肺小,细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状,肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺,癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液,性癌。,CK7-CK20-,Villin+,Villin-,可见于,：乳头状肾细胞癌(43.47%）、,胃腺癌(18.06%）、直肠腺癌(16.67,%）、卵巢粘液腺癌(12.5%）、嫌色,细胞癌(11.11%）、前列腺癌(4.54%）。,少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、,肾透明细胞癌、乳腺浸润型导管癌、,乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。,可见于,：肺小细胞癌(100%）、肾透明细胞癌,(42/43，97.67%）肺鳞癌(88.57%）、前,列腺癌(86.36%）、乳头状肾细胞癌(34.78,%）、嫌色细胞癌(22.22%）、卵巢浆液腺,癌(18.52%）、乳腺浸润型导管癌(16.07%）,、胃腺癌(13.89%）、直肠腺癌(5.56%）、,肺腺癌(4.17%）。,少见于,：乳腺浸润性小叶腺癌、卵巢粘液,腺癌。,CK7-CK20+,Villin+,Villin-,可见于,：直肠腺癌(52.78%)、卵巢粘,液性腺癌(25%)、胃腺癌(6.94%)、,卵巢浆液性癌(3.7%）。,少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞,癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞,癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺,浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌。,可见于,：直肠腺癌(13.89%）、卵巢,浆液性腺癌(3.7%）。,少见于,：肺鳞癌、肺腺癌、肺小细,胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾,细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、,乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性,小叶癌、卵巢粘液性癌、胃腺癌,1、软组织,小圆细胞肿瘤,CK Vim EMA LCA NSE CgA Des S-100,小细胞未分化癌 +-+-,神经内分泌癌 +-+-+-,神经母细胞瘤 -+-+-+/-,尤文肉瘤/PNET -+-+-+/-,胚胎性横纹肌肉瘤 -+-+-,恶性淋巴瘤 -+-,恶性黑色素瘤 -+-/+-+(HMB45+),CK,、,Vim,、,NSE,、,CgA,、,Des,、HMB45胞浆,EMA,胞膜,/,胞浆,LCA,胞膜,S-100,胞核,/,浆,间皮：EMA、Calretinin阳性,横纹肌：Desmin(+)Actin、MyoD1（弱+）Myglobin,血管：CD31、CD34阳性,颗粒细胞瘤：S-100、NSE,CD34 Bcl-2 S-100,神经纤维瘤 +,孤立性纤维性肿瘤 +-,滑膜肉瘤 -+-,孤立性纤维性肿瘤CD99+,滑膜肉瘤CK、Vimentin 双阳,2、乳腺,P63 CK5/6 E-cad 34E12,导管原位癌 +-+-,浸润性导管癌 -+-,浸润性小叶癌,-+,P63 胞核,CK5/6 胞浆,E-cad 胞浆、胞膜,34E12 胞浆,乳腺病理,ER、PR显示肿瘤的内分泌体现，与肿瘤的内分泌治疗反应率有关,CerbB-2肿瘤有关因子，靶向治疗,KI-67显示细胞增殖指数,ER、PR 胞核,CerbB-2 胞膜,KI-67 胞核,中间型上皮 成熟型,CK5/6+,CK8/18+CK5/6-,CK8/18+,干细胞,CK5/6+,CK8/18-,SMA-,P63-,中间型肌上皮 成熟型,CK5/6+,SMA+,P63+CK5/6-,SMA+,P63+,CK5/6,CK8/18，SMA胞浆,P63胞核,CerbB-2的染色意义,阳性强度的判断：,强的着色是指4x或10 x物镜下易于观测到，弱的强的着色是指需要用40 x物镜观测。,CerbB-2与治疗及预后的关系,不仅与浸润型乳腺癌的不良预后有关，并能预测多种化疗药机内分泌治疗的敏感性。靶向药物赫赛汀,CerbB-2的染色意义,0+浸润性肿瘤细胞无着色,1+任何比例的浸润性肿瘤细胞呈弱而不完整的包膜着色或10%的肿瘤细胞呈弱且完整着色,2+10%的肿瘤细胞展现弱或不一致的、完整的包膜着色；或30%的肿瘤细胞展现强且完整的包膜着色,3+30%的浸润性肿瘤细胞呈强且完整包膜着色,指导治疗,ER,PR,CerbB-2,Ki-67,ER+PR+:60-70%的内分泌治疗反应率,ER-PR-:10%的内分泌治疗反应率,ER+PR-:40%的内分泌治疗反应率,ER-PR+:46%的内分泌治疗反应率,阳性分级（或阳性细胞数比例）与治疗反应的有关性尚缺乏统一认识,3、消化,CK7-/CK20+,胃肠间质瘤CD117，CD34,肝 TTF-1 浆阳、Hep、AFP,CDX2重要体现于结肠，胃癌和卵巢粘液性腺癌也有体现,CD117胞膜/胞浆，,CD34胞膜,CDX2胞核,CK7，CK20，AFP，Hep胞浆,4、泌尿,肾,CK-H CK-L Vimentin E-cad CD10 EMA CD117,透明细胞 -+-+,(膜),+-,（乳头状癌）,嫌色细胞癌 +-+-/+,（浆）Hale铁,+,（嗜酸细胞腺瘤）,集合管癌 +-Villin-,CK-H、CK L、Vimentin胞浆,CD10胞膜,EMA、CD117、E-cad 胞膜/胞浆,移行上皮：正常CK7阳性，CK20阳性提醒肿瘤,5、生殖,卵巢,上皮性肿瘤,CK7+/CK20-，CA125卵巢上皮（+）,无性细胞瘤（女性）=精原细胞瘤（男性）,Vimentin，PLAP，CD117,胚胎性癌,AFP，CD30，PLAP,子宫,HCG HPL,合体滋养叶 +弱+,细胞滋养叶 -,中间滋养叶 +/弱+,HCG，HPL胞浆,Vimentin ER CEA,子宫内膜样癌 +-,宫颈癌 -+,Vimentin胞浆,ER 胞核,CEA胞膜/胞浆,前列腺,基底细胞阳性标识：高分子量CK（34E12,CK5/6）,P504s 肿瘤性腺泡（+），良性腺泡（-）,PSA 前列腺上皮（+）,34E12，CK5/6，PSA，P504s胞浆,6、神经内分泌,甲状腺,TG TTF-1 Calcitonin CD56,乳头状癌 +-,滤泡癌 +-+,髓样癌 -+,甲状腺乳头状癌Galectin-3，CK19,TG、Calcitonin胞浆,TTF-1 胞核,CD56胞膜,肾上腺,皮质 Mart-1、Syn、NSE、inhibin 阳性,髓质 CgA、Syn、CD15阳性,Mart-1、Syn、NSE、CgA胞浆,inhibin 胞核/胞浆,CD15 胞膜/胞浆,7、肺,鳞状细胞癌CK14、CK5/6、34E12和p63；,腺癌CK7和TTF-l；,神经内分泌癌CD56、CgA、Syn、AE1/AE3、CK18、NSE。,卫生部肺癌诊断规范,鼻腔,嗅神经母细胞瘤NSE、Syn、CgA。,畸胎癌肉瘤上皮性、间叶性、神经源性都体现一部分,8、神经系统,中枢神经系统,脑胶质瘤GFAP,脑膜瘤EMA,GFAP胞浆,EMA胞浆/胞膜,周围神经系统,神经鞘瘤 S-100（+）,神经纤维瘤S-100(+/-),两者的鉴别重要看形态,S-100胞核/胞浆,胸腺瘤 器官型（胸腺样）组织特性，常出现（小叶状、血管周腔隙、未成熟的TdT+、CD1a、CD99+的T细胞）,胸腺癌 CD5/CD70/CD117+,谢谢！,