维生素类药物分析ppt课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第十二章 维生素类药,物的分析,基本要求,一、掌握维生素,A,、,B,1,、,C,、,E,的结构性质与分析方,法之间的关系；,二、掌握维生素,B,1,、,C,、,E,的含量测定原理和方法。,三、了解维生素,A,的含量测定原理和方法。,四、了解维生素,D,性质和分析特点。,维生素：,是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。,人体不能合成维生素。,概 述,VitA,、,D,2,、,D,3,、,E,、,K,1,等,脂溶性,水溶性,VitB,族,(B,1,、,B,2,、,B,6,、,B,12,),VitC,、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,第一节 维生素,A,的分析,维生素,A1,活性最高，维生素,A,2,的生物活性是维生素,A,1,的,30-40%,，维生素,A,3,的生物活性是维生素,A,1,的,0.4%,，故通常所说的维生素,A,系指维生素,A,1,。,来源：,1.,天然产物,主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油,即,鱼肝油,。从鱼肝油提取的,V,A,多为各种酯类的混合物，其中主要为,醋酸酯和棕榈酸酯。,来源：,2.,人工合成产物,全反式维生素,A,醋酸酯,中国药典,收载的,VA,是人工合成的,VA,醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有,V,AD,胶丸和,V,AD,滴丸。,药典收载情况：,V,A,及醋酸酯棕榈酸酯混合物的食用油溶液,。,人工合成的,V,A,醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有,V,AD,胶丸和,V,AD,滴丸。,浓缩,V,A,油混合物,Ch.P,USP,BP,-H,维生素,A,醇,-COCH,3,维生素,A,醋酸酯,-COC,15,H,31,维生素,A,棕榈酸酯,R:,维生素,A,C,H,3,C,H,3,C,H,2,O,R,C,H,3,C,H,3,C,H,3,环己烯,共轭多,烯侧链,存在多种立体异构化合物,具有,UV,吸收,易发生脱氢、脱水、聚合,反应,为一个具有共轭多烯侧链的,环己烯,（一）,结构与性质,一、,具有,UV,吸收,存在多种立体异构化合物,维生素,A 325.5 (,全反式,)100%,新维生素,Aa 328 (2-,顺,)75%,新维生素,Ab 320.5 (4-,顺,)24%,异维生素,Aa 323 (6-,顺,)21%,异维生素,Ab 324 (2,，,6-,顺,)24%,相对生物效价,VitA,2,VitA,3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,C,H,2,O,H,C,H,2,鲸醇,C,H,2,O,H,C,H,2,O,H,C,H,3,或有金属离子存在时氧化,共轭多烯侧链 易被氧化,（二）,环氧化物,VitA,醛,VitA,酸,O,C,H,2,O,H,H,O,C,C,O,O,H,（三）,与三氯化锑发生呈色反应,CHCl,3,溶解性,（四）,不溶于水,易溶于有机溶剂和植物油等,三氯化锑反应,（一）,条件 无水无醇,CHCl,3,鉴别,二、,蓝色,紫红,（,BP,（,1998,）,max,为,326nm,一个吸收峰,UV,法,（二）,max,为,350,390nm,三个吸收峰,去水,VitA,（,VitA,3,）,VitA,C,H,3,C,H,3,C,H,2,O,R,C,H,3,C,H,3,C,H,3,USP,显色剂 磷钼酸,规定斑点颜色和,Rf,值,BP,杂质对照品法,显色剂 三氯化锑,TLC,法,（三）,立体异构体,氧化产物及光照产物,合成中间体,去氢维生素,A,（,VitA,2,）,去水维生素,A,（,VitA,3,）,UV,法,（一）,含量测定,三、,三点校正法,1.,条件：,（,1,）杂质的吸收在,310340nm,波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,（,2,）物质对光的吸收具有加和性。,2.,波长的选择：,（,1,）,1,VitA,的,max,（,328nm,）,（,2,）,2,3,分别在,1,的两侧各选一点,测定对象,VitA,醋酸酯,第一法 等波长差法,第二法 等吸收度法,(,皂化法,),测定对象,VitA,醇,测定法,（,1,）基本步骤,:,第一步,A,选择,选择依据：,所选,A,值中杂质的干扰已基本消除,注意：,C,为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（,2,）,第一法,维生素,A,醋酸酯,判断 是否在,326,329nm,之间,在,326,329nm,之间,改用第二法,是,否,求算,并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算,A,328,（校正）,用,A,328,计算,0,3%,15%,3%,第二法,第二法,VitAD,胶丸中,VitA,的含量测定,精密称取本品,(,规格,10000VitAIU/,丸,),装量差异项下（平均装量,0.08262g/,丸）的内容物,0.2399g,至,250ml,量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取,2.0ml,，置另一,20 ml,量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为,328nm,，并在下列波长处测得吸收度为,A,300,：,0.354,A,316,：,0.561,A,328,：,0.628,A,340,：,0.523,A,360,：,0.216,A,300,/A,328,：,0.555,A,316,/A,328,：,0.907,A,328,/A,328,：,1.000,A,340,/A,328,：,0.811,A,360,/A,328,：,0.299,求本品中维生素,A,的含量？,A,300,/A,328,：,0.564,A,316,/A,328,：,0.893,A,328,/A,328,：,1.000,A,340,/A,328,：,0.833,A,360,/A,328,：,0.344,0.555,0.907,1.000,0.811,0.299,+0.01,0.01,0,+0.02,+0.04,=,=,=,=,=,适用于维生素,A,醇,（等吸收度法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,皂化法、,6/7A,法,（,3,）第二法,水溶性,脂溶性,判断,max,是否在,323,327nm,之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断,A,300,/A,325,是否大于,0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,A,325(,校正,),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max,618nm,620nm,标准曲线法,缺点,呈色不稳定（,5 10s,内）,水分干扰,与标准曲线温差,1,专属性差,三氯化锑有腐蚀性,氨基嘧啶环,CH,2,噻唑环,(,季铵碱,),维生素,B,1,HCl,Cl,-,氨基嘧啶环,UV,还原性,噻唑环,（一）,溶解性,1,、易溶于水,2,、水溶液呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max,=246,nm,结构与性质,一、,嘧啶环,伯氨,噻唑环,季铵,1,、可与酸成盐,2,、与生物碱,3,、含量测定,非水碱量法,（三）,硫色素反应,（四）,碱性,ChP,鉴别试验,二、,（一）,硫色素反应,硫色素,2H,VitB,1,H,+,H,+,H,+,H,+,（二）,沉淀反应,S,元素反应,Cl,-,反应,（三）,其他反应,三、,含量测定,喹那啶红亚甲蓝,（紫红天蓝）,（一）,非水溶液滴定法,UV,法,（二）,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的,%=,A=ECL,规格,g/,片,g/100ml,g,ChP,（每,ml,）相当于标示量的,%=,规格,g/ml,ml,准确度高,灵敏度低,操作繁琐,设备简单,（三）,硅钨酸重量法,重量法特点,1,、,原理,2,、,2337.27,3479.22,取本品约,50mg,，精密称定，加水,50,ml,溶解后，加盐酸,2,ml,，煮沸，立即滴加硅钨酸试液,4,ml,，继续煮沸,2,分钟，用,80,恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（,120,）,20ml,分次洗涤，再用水,10ml,洗涤,1,次，最后用丙酮洗涤,2,次，每次,5ml,，在,80,干燥至恒重，精密称定，所得重量与,0.1939,相乘，即得,测定方法,3,、,例,精密称取本品,0.0519g,，加水,50,ml,溶解，加盐酸,2ml,煮沸，立即滴加,硅钨酸试液,4 ml,，继续煮沸,2,分钟，用,80,恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀,先用煮沸的盐酸溶液（,120,）,20 ml,分次洗涤，再用水,10ml,洗涤,1,次，后,用丙酮洗涤,2,次，每次,5ml,。在,80,干,燥至恒重，称得沉淀重量为,0.2557g,。,求本品的含量按干燥品计算为多少？,(,本品干燥失重项下测定结果为,3.73%),A.,取样量,50mg,提高灵敏度,B.,80,保持,4,个,H,2,O,C.HCl,增大沉淀颗粒,D.,硅钨酸 ：,VitB,1,=8,：,1,使沉淀完全,E.,硅钨酸,边搅拌边缓慢加入,增大沉淀颗粒,实验条件,4,、,NaOH,（四）,硫色素荧光法,原理,1,、,激发波长,365nm,发射波长,435nm,方法与计算,2,、,+NaOH+,铁氰化钾,+,异丁醇,+NaOH+,异丁醇,+NaOH+,铁氰化钾,+,异丁醇,+NaOH+,异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,特点,3,、,（,1,）灵敏度高，线性范围宽,（,2,）代谢产物不干扰，适用于,体液分析,维生素,C,L,抗坏血酸,两个手性碳原子，有四个光学异构体,二烯醇强还原性,弱酸性（一元酸）,1,、易溶于水,2,、水溶液呈酸性,结构与性质,一、,（一）,溶解性,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,（二）,强还原性,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,（三）,具糖的性质,C,3,OH,的,pKa=4.17,C,2,OH,的,pKa=11.57,酸性,（四）,一元酸,L(+),抗坏血酸,活性最强,手性,C,（,C,4,、,C,5,）,（五）,光学活性,*,*,与碱反应,（六）,水解反应,（七）,UV,特征,与氧化剂的反应,（一）,鉴别试验,二、,1,、与,AgNO,3,反应,2,、与,2,，,6-,二氯靛酚反应,(ChP2000),氧化型,玫瑰红色,还原型,蓝色,OH,(ChP2000),（,玫瑰色）,（无色）,3,、与碱性酒石酸铜反应,USP,4,、与,KMnO,4,反应,糖类的反应,（二）,或盐酸,50,吡咯,USP,（蓝色）,(,糠醛,),（戊糖）,50,(,吡咯,),UV,（三）,BP,0.01mol/L HCl,指示剂 淀粉指示液,原理,1,、,碘量法,（一）,含量测定,三、,H,+,取本品约,0.2g,，精密称定，加新,沸过的冷水,100ml,与稀醋酸,10ml,使溶,解，加淀粉指示液,1ml,，立即用碘滴,定液（,0.1mol/L,）滴定，至溶液显蓝,色，在,30,秒内不褪。每,1ml,碘滴定液,(0.1mol/L),相当于,8.806mg,的,C,6,H,8,O,6,方法,2,、,（,1,）酸性环境,d.HCl,（,2,）,新沸冷,H,2,O,减慢,VitC,被,O,2,氧化速度,讨论,4,、,（,3,）立即滴定,赶走水中,O,2,减少,O,2,的干扰,（,4,）附加剂干扰的排除,片剂,滑石粉,过滤,注射剂,抗氧剂,丙酮,甲醛,Na,2,SO,3,NaHSO,3,Na,2,S,2,O,3,Na,2,S,2,O,5,C,H,H,O,O,a,S,3,a,S,O,+,H,2,N,H,O,N,2,2,5,2,H,O,N,H,C,O,S,3,a,2,，,6-,二氯靛酚钠滴定法法,（二）,USP,JP,原理,1,、,自身指示终点法,方法,2,、,（,2,）快速滴定,2min,内,（,1,）酸性环境,HPO,3,-HAc,稳定,VitC,防止其他还原性物质干扰,（,3,）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,讨论,3,、,（,4,）缺点,需经常标定,贮存一周,不稳定,干扰多,氧化力较强,HPLC,法,（三）,1,、,HPLC,的优点,灵敏度高,选择性高,分离分析同步,微量分析,干扰少,快速,2,、,HPLC,法分离,VitC,常用方法及测,定对象,对象 制剂、生物样品、果汁,方法 离子交换色谱法,离子对色谱法,分配色谱法（正、反相）,血、尿、组织、细胞等,例,多种维生素片中,VitA,、,VitB,1,、,VitB,2,、,VitB,6,、烟酰胺、,VitC,、,VitE,的含量测定,色谱柱,ODS,流动相,A,、水,-,甲醇（,4,：,1,）,B,、甲醇,（梯度洗脱）,抗氧剂,二巯基丙烷磺酸钠,水溶性维生素,离子对色谱法（樟脑磺酸）,内标法,+,校正因子,内标物,苯酚,脂溶性维生素,外标法,维生素,D,维生素,D,2,一、结构与性质,维生素,D,3,开环的甾体,：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。,手性碳原子,：具有旋光性，可用于鉴别。,多烯,：可进行紫外检测。,二、鉴别试验,1.,显色反应,醋酐,-,硫酸反应,D,2,黄 红 紫 绿,D,3,黄 红 紫、蓝绿 绿,三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,三氯化铁反应 橙黄色,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,2.,比旋度鉴别,维生素,D,2,维生素,D,3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5,+107.5,+105,+112,注意事项,：应于容器开启,30,分钟内取样，,在溶液配制后,30,分钟内测定。,3.,区别反应：,以,96%,乙醇为溶剂，加乙醇和,85%,硫酸，,D,2,显红色，在,570nm,处有最大吸收，,D,3,显黄色，,在,495nm,处有最大吸收。,4.,其他方法,：,TLC,、,HPLC,、制备衍生物测熔点,三、杂质检查,维生素,D,2,中麦角甾醇的检查,：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置,18h,不得发生浑浊或沉淀。,前维生素,D,的光照产物,四、含量测定方法,中国药典（,2000,年版）采用,正相高效液相色谱法,测定维生素,D,的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为,三个方法,。固定相：硅胶流动相：正己烷,-,正戊醇（,997,：,3,）,第一法,：用于无维生素,A,醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：,1,系统适用性试验：测定重复性和分离度。,2,测定校正因子：,A,S,/m,S,f,1,=-A,r,/m,r,f,2,=,（,A,S,m,r,-f,1,m,S,A,r1,）,/,（,A,r1,m,S,）,3,含量测定：,m,i,=,（,f,1,A,i1,+f,2,A,i2,）,m,S,/A,S,第二法,：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：,1,皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙,醚、制备供试液,A,。,2,净化：供试液,A,经液相色谱分离，准确收集含有维,生素,D,及前维生素,D,混合物的全部流出液，制,备成供试液,B,。固定相：,ODS,流动相：甲醇,-,乙腈,-,水（,50,：,50,：,2,）,3,含量测定：取供试液,B,按第一法测定。,第三法,：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：,1,制备供试液：取供试液,A,，净化，水浴加热，得供,试液,C,。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。,2,含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样,对照液和供试液，按外标法定量。,苯并二氢吡喃醇,维生素,E,苯环,+,二氢吡喃环,+,饱和烃链,名 称,R,1,R,2,相对活性,-,生育酚,-,生育酚,-,生育酚,-,生育酚,CH,3,CH,3,H,H,CH,3,H,CH,3,H,1.0,0.5,0.2,0.1,*,*,*,生物效价,右旋体 ：消旋体,=1.4,：,10,（天然品）,（合成品）,dl,生育酚醋酸酯,结构与性质,一、,苯环,+,二氢吡喃环,+,饱和烃链,1,、易溶于有机溶剂，不溶于水,2,、,UV,3,、酯键 易水解,7515,（一）,硝酸反应,橙红色,鉴别,二、,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO,3,强氧化剂,取本品约,30mg,，加无水乙醇,10ml,溶解后，加硝酸,2ml,，摇匀，在,75,加热,15,分钟，溶液应显橙红色。,三氯化铁联吡啶反应,O,（二）,生育酚,对,-,生育醌,O,弱氧化剂,红色,=41.0,45.5,max,=284nm,min,=254nm,0.01%,无水乙醇中,UV,法,（三）,维生素,EUV,图,薄层板 硅胶,G,展开剂 环己烷,-,乙醚（,4,：,1,）,显色剂 硫酸（,105,5,）,VitE R,f,=0.7,TLC,法,（四）,游离生育酚,硫酸铈滴定液（,0.01mol/L,）,二苯胺（亮黄灰紫）,利用游离生育酚的还原性，,将硫酸铈还原成硫酸亚铈,检查,三、,原理,（一）,试剂,（二）,（,M,生育酚,=430.8,）,例,取本品,0.10g,，加无水乙醇,5ml,溶解后，加二苯胺试液,1,滴，用硫酸铈液（,0.01,mol/L,）滴定，消耗硫酸铈液（,0.01,mol/L,）不得过,1.0ml,。,2.15,限量,（三）,药典规定,消耗硫酸铈液（,0.01mol/L,）,1.0ml,设：应消耗硫酸铈液,V ml,0.011.0,实际浓度,V,若硫酸铈液浓度不是,0.01000mol/L,，,应重新计算硫酸铈的消耗量,例,Ce(SO,4,),2,=0.01020mol/L,四、,含量测定,GC,法,（一）,GC,特点,1,、,选择性好,灵敏度高,速度快,分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气,N,2,固定液,硅酮（,OV-17,）,担体硅藻土或高分子多孔小球,柱温,265,检测器氢火焰离子化检测器,(FID),内标正三十二烷,n 500,R2,VitE,测定的色谱条件,2,、,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品,+,内标）,内标物,对照液（对照,+,内标）,是样品中不存在的物质,与被测组分峰靠近,能与各组分完全分离,与被测组分的量接近,校正因子：,实际工作中的计算方法,例,内标液,取正三十二烷加正己烷溶解,并稀释成,1.0mg/ml,溶液,对照液,精密称取,VitE,对照品,0.2011g,置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内,标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13ul,注入,GC,仪，测定，计算,供试液,精密称取供试品,0.1998g,置棕,色具塞锥形瓶中，精密加入内标液,10ml,，密塞，振摇使溶解，取,13ul,注入,GC,仪，测定，计算,对照液,供试液,0.373,0.368,本品含,C,31,H,52,O,3,应为,96.0 102.0%,BP GC,内标 正三十二烷,R1.4,USP GC,内标 十六酸十六醇酯,R1.0,JP HPLC,外标,dl,生育酚,R1.4,利用生育酚的易氧化性,还原型,氧化型,二苯胺（亮黄灰紫）,原理,1,、,铈量法,（二）,指示剂,2,、,防止,Ce(SO,4,),2,的水解,减慢生育酚被,O,2,氧化速度,C,、,酸性条件,Ce(SO,4,),2,易溶于水,生育酚易溶于醇,B,、溶剂,分子量较大，反应慢,易被,O,2,氧化,A,、反应速度,H,2,SO,4,讨论,3,、,含量计算,4,、,M,VitE,=472,样品,dl,生育酚,固定相,十八烷基硅烷键合硅胶,流动相甲醇,-,水（,49,：,1,）,检测波长,292nm,R,2.6,RSD0.8%,JP-RP-HPLC,法（外标法）,（三）,测定对象血清中,VitA,和,VitE,固定相,十八烷基硅烷键合硅胶,流动相甲醇,-,水（,96,：,4,）,检测波长,8,前,330nm,8,后,292nm,RP-HPLC,法（外标法）,（四）,练 习 题,1.,下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾 后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是,A.,维生素,A,B.,维生素,B,1,C.,维生素,C,D.,维生素,D,E.,维生素,E,2,既具有酸性又具有还原性的药物是,A.,维生素,A,B.,咖啡因,C.,苯巴比妥,D.,氯丙嗪,E.,维生素,C,3.,维生素,C,的鉴别反应，常采用的试剂有,A.,碱性酒石酸铜,B.,硝酸银,C.,碘化铋钾,D.,乙酰丙酮,三氯醋酸和吡咯,4.,测定维生素,C,注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了,A.,保持维生素,C,的稳定,B.,增加维生素,C,的溶解度,C.,使反应完全,D.,加快反应速度,E.,消除注射液中抗氧剂的干扰,5,：,14,可发生以下反应或现象的药物为,A.,维生素,B,1,B.,维生素,C,C.,两者均能,D.,两者均不能,1.,与碘化汞钾生成黄色沉淀,2.,麦芽酚反应,3.,在乙醚中不溶,4.,硫色素反应,A,D,C,A,6,中国药典（,2005,年版）规定维生素,A,的测定采用紫外分光光度法（三点校正法），此法又分为,A,等波长差法,B,等吸收度法,6/7 A,法,D,差示分光法,E,双波长法,7,维生素,E,的鉴别试验有,A,硫色素反应,B,硝酸氧化呈色反应,C,硫酸,-,乙醇呈色反应,D,碱性水解后加三氯化铁乙醇,液与,2,2-,联吡啶乙醇液呈色反应,E,Marquis,反应,8.,维生素,A,与,反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在,、,条件下进行。,（）维生素,A,分子中由于具有共轭多烯侧链，因而其性质很稳定，不易被氧化变质。,三氯化锑,无醇,无水,9.,维生素,B,1,的噻唑环在,介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经,等氧化剂氧化生成具有荧光的,，加,荧光消失，加,荧光又显出；此反应称为,反应。,碱性,铁氰化钾,硫色素,酸,碱,硫色素,10.VitB,1,片,UV,法含量测定 取本品,20,片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于,VitB,1,25mg,），置,100,ml,量瓶中，加盐酸溶液,(9,1000),约,70,ml,，振摇,15,分钟，加盐酸溶液,(9,1000),稀释至刻度。用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液,5.0,ml,，置另一,100,ml,量瓶中，再加盐酸溶液,(9,1000),稀释至刻度，摇匀，在,246,nm,处测定吸收度，按,C,12,H,17,ClN,4,OSHCl,的,吸收系数（）为,421,计算，即得。,已知,20,片重,=1.4070g,A,246,=0.461,取样量,=0.1551g,规格,=10mg/,片,求 本品含量是否符合药典规定？,（应相当于标示量的,90.0,110.0%),