培养基质量控制.docx

培养基质控标准操作规程
1 检验目的
对商品化的培养基进行质量检测，保证培养基的质量。
2 检验原理
培养基应该是无菌的,选择培养基会根据相应的细菌选择性生长，可以保证细菌所需要生长条件，菌落生长良好。
3 步骤
3。1 频率
每批次或货次的培养基都要进行质量检测，包括外观质量验收和性能质量验收。
3。2外观验收
培养基外观质量验收包括平板有无裂纹、培养皿有无裂纹、充碟是否均匀、溶血情况、污染情况、有无冷冻、过多气泡和斑点、色泽是否均匀.通过肉眼观察后记录。
3.3 性能质量控制
3.3。1培养基质控菌株的选择。参照 WST232—2002商业微生物培养基质量检测规程和厂家说明书.
3。3.2 质控菌株的准备参见《标准菌株使用标准操作规程》。
3.3。3培养基性能检测项目包括：无菌试验、生长试验（营养能力）、菌落生长形态、抑菌试验、
3。3。3。1无菌试验
不接种任何菌体选择适宜的培养条件进行培养。
3.3.3。2生长试验（营养能力）
用工作质控菌株配置菌悬液,通过比浊仪配到0.5麦氏单位作为基础菌悬液.基础菌悬液用生理盐水100倍稀释，接种0.01ml在待测平板上，使其浓度达到1—2×104CFU/碟。如果不能保证在特定培养基上形成单个菌落，则应10倍稀释接种物.
3。3.3。3抑制试验
基础菌悬液用生理盐水10倍稀释，接种0。01ml在待测平板上,使其浓度达到1-2×105CFU/碟。
3。3.3。4根据培养基的种类，选用适宜的温度和二氧化碳,培养18—24小时，同时用空白培养基做阴性对照.
3。3.4次日观察菌落生长情况是典型。
3。3.5每个批号或货次的培养基至少要抽查一块进行室内质控。
3。3。6结果判断
3。3。6。1无菌试验应该无任何微生物生长
3.3.6。2营养能力
质控菌在待测培养基上生长并形成典型的菌落形态,则认为培养基效果满意.某些情况下应该有适当的颜色或溶血。
3。3.6.3抑菌试验
对于选择性培养基，某些菌被抑制，而所需的细菌充分生长。
表1 培养基质量控制标准
培养基
培养条件
质控菌株
预期结果
典型菌落
厌氧羊血琼脂培养基
厌氧，35℃，18-24h
脆弱拟杆菌ATCC25285
生长
灰白表面光滑边缘整齐
产气荚膜梭菌ATCC13124
生长
灰白不透明双层溶血环
血琼脂平板
35℃，18—24h，5％CO2
肺炎链球菌ATCC49619
生长
甲型溶血
化脓链球菌ATCC19615
生长
乙型溶血
金黄色葡萄球菌ATCC25923
生长
乙型溶血
奇异变形杆菌
生长
迁徙生长
麦康凯
35℃，18-24h
大肠埃希菌ATCC25922
生长
粉红色菌落
粪肠球菌ATCC29212
抑制>90％

MH
35℃，18—24h
大肠埃希菌ATCC25922
生长
复方新诺明24—32
金黄色葡萄球菌ATCC25923
生长
复方新诺明24—32
营养琼脂
35℃，18—24h
大肠埃希菌ATCC25922
生长

金黄色葡萄球菌ATCC25923
生长

科玛嘉念珠显色
35℃，18—24h
克柔念珠菌ATCC6258
生长
粉色模糊菌落
大肠埃希菌ATCC25922
抑制

金黄色葡萄球菌ATCC25923
抑制

四号
35℃，18-24h
大肠埃希菌ATCC25922
抑制>90％

粪肠球菌ATCC29212
抑制〉90%

副溶血弧菌
生长
半透明中心黑色
碱性蛋白胨
35℃，18—24h
副溶血弧菌
生长

大肠埃希菌ATCC25922
抑制〉90%

嗜血杆菌巧克力
35℃,18—24h,5％CO2
流感嗜血杆菌ATCC49247
生长

巧克力
35℃，18—24h,5%CO2
流感嗜血杆菌ATCC49247
生长

淋病奈瑟菌
生长

GC平板
35℃，18-24h，5％CO2
淋病奈瑟菌
生长

HE平板
35℃，18—24h

沙门菌
生长
黑心
志贺菌
生长
蓝绿色
4 纠正措施
采取新的质控菌株(冷冻干粉,可靠来源）及来自不同厂家的新批号的材料.如果问题与制造商有关，联系并将测试结果提供给制造商。也可与使用同样方法的其他实验室交换菌株和材料，有助于找到无法解释的系统误差的根源。
5 参考文献
5。1尚红，王毓三，申子瑜主编。全国临床检验操作规程。第四版。人民卫生出版社，2015
5。2周庭银编著。临床微生物学诊断与图解.第二版.上海科学技术出版社，2007
5.3 WST232-2002商业微生物培养基质量检测规程
5.4培养基厂家说明书
5.5纪邵梅，微生物培养基质控与图解。北京:北京科学技术出版社，2006。