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高中生物选修一--分解纤维素的微生物的分离省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

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4、谢谢,分解纤维素的微生物的分离,第1页,纤维素酶,纤维素酶是一个,复合酶,,普通认为它,最少包含三种组分,,即,C,1,酶,(,外切酶,),、,C,X,酶,(,内切酶,),和葡萄糖苷酶,,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维二糖,C,1,酶、,Cx,酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,纤维素,第2页,取二支,20mL,试管,试验:纤维素酶分解纤维素试验,各加入一张滤纸条,各加入,pH4.8,,物质量为,0.1mol/L,醋酸醋酸钠缓冲液,11ml,和,10ml,甲 乙,在乙试管中加入,1mL,纤维素酶,两支试管固定在锥形瓶中,放在,140r/min,摇床上振荡,1h,结

5、果:乙试管滤纸条消失,讨论,:乙试管滤纸条为何会消失?甲试管作用是什么?,第3页,提醒:,本试验,自变量,是,纤维素酶有没有,自变量操纵方法是:,在,一支试管,中,添加适量(,1mL,)纤维素酶溶液,,,另一支试管,不添加纤维素酶,但需,加入等量缓冲液,,不能加入蒸馏水,不然会影响溶液,pH,。,试验分析:,P,27,小试验是怎样组成对照?,第4页,可依据是否产生,透明圈,来筛选纤维素分解菌,第5页,培养基成份分析,培养基组成,提供主要营养物质,纤维素粉,5g,碳源(能源),NaNO,3,1g,氮源、无机盐,KCl 0.5g,Na,2,HPO,4,7H,2,O 1.2g,KH,2,PO,4,0

6、9g MgSO,4,7H,2,O 0.5g,无机盐,酵母膏,0.5g,生长因子、氮源、少许碳源,水解酵素,0.5g,氮素、生长因子,溶解后,蒸馏水定容至,1000mL,水,第6页,比较项目,分解尿素细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,基,原理,培养基类型,目标,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,将细菌涂布在只有,尿素做氮源选择,培养基上,将细菌涂布在只有,纤维素粉做碳源,选择培养基上,固体培养基,液体培养基,筛选菌株,选择培养,第7页,思索:本试验流程与课题,2,中试验流程有哪些异同?,课题,2,是将土样制成菌悬液直接涂布在,以尿素为唯一氮源选择性培养基上,直接分离,得到菌落。,本课题经过,选

7、择培养,使纤维素分解菌得到增殖后,,再将菌液涂布在选择培养基上。其它步骤基本一致。,第8页,按照课题,1,稀释操作方法,将选择培养后培养基进行等比稀释,10,1,10,7,倍。,3.,梯度稀释,10,1,10,2,10,3,10,4,10,5,10,6,第9页,4.,将样品涂布到,判别纤维素分解菌,培养,基上,(,1,)制备判别培养基,:,(,2,)涂布平板:,将稀释度为,10,4,10,6,菌悬液各取,0.1ml,涂布到平板培养基上,,30,倒置培养。,第10页,培养基组成,提供主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏,1g,碳源,、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,

8、无机盐,土豆汁,100mL,碳源,、生长因子,琼脂,15g,凝固剂,上述物质溶解后,加蒸馏水定容至,1000mL,氢元素、氧元素,判别纤维素分解菌,培养基,(,水溶性羧甲基纤维素钠,),第11页,方法一:先,,再加入刚果红进行颜色反应。,方法二:在,时就加入刚果红。,培养微生物,倒平板,5.,刚果红染色法,挑选产生透明圈菌落,普通即为分解纤维素菌落。,第12页,这两种方法各有哪些优点与不足?,染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反应基本上是纤维素分解菌作用,操作繁琐,刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便不存在菌落混杂问题,1.,产生淀粉酶微生物也产生含糊透明圈,2.,有些微生物能降解色素,

9、形成显著透明圈。,第13页,比较,项目,分解尿素细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,原理,培养基类型,目标,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,在细菌分解尿素化学反应,中,细菌合成脲酶将尿素,分解成了氨,氨会使培养基,碱性增强,,pH,升高。在培,养基中加入酚红指示剂,如,果,pH,升高指示剂会变红,刚果红能够与纤维素形成,红色复合物,当纤维素被,纤维素酶催化分解后红色,复合物无法形成,培养基,上就会出现以纤维素分解,菌为中心透明圈,观察菌落周围是否有,着色,环,带出现来判定尿素分解菌,观察菌落周围是否出现,透明圈,来筛选纤维素分解菌,脲酶检测法,刚果红染色法,第14页,在,产生显著透明圈,菌落,挑取并接种到纤维素分解菌选择培养基上,在,30,0,C,37,0,C,培养,可取得,纯化培养,。,6,、纯化培养,第15页,为了确定分离得到是纤维素分解菌,还需要进行,_,试验,纤维素酶发酵方法有,_,发酵和,_,发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生,_,含量进行定量测定。,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,五、课题延伸,第16页,

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