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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。谢谢,分解纤维素的微生物的分离,第1页,纤维素酶,纤维素酶是一个,复合酶,，普通认为它,最少包含三种组分,，即,C,1,酶,(,外切酶,),、,C,X,酶,(,内切酶,),和葡萄糖苷酶,，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维二糖,C,1,酶、,Cx,酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,纤维素,第2页,取二支,20mL,试管,试验：纤维素酶分解纤维素试验,各加入一张滤纸条,各加入,pH4.8,，物质量为,0.1mol/L,醋酸醋酸钠缓冲液,11ml,和,10ml,甲 乙,在乙试管中加入,1mL,纤维素酶,两支试管固定在锥形瓶中，放在,140r/min,摇床上振荡,1h,结果：乙试管滤纸条消失,讨论,：乙试管滤纸条为何会消失？甲试管作用是什么？,第3页,提醒：,本试验,自变量,是,纤维素酶有没有,自变量操纵方法是：,在,一支试管,中,添加适量（,1mL,）纤维素酶溶液,，,另一支试管,不添加纤维素酶，但需,加入等量缓冲液,，不能加入蒸馏水，不然会影响溶液,pH,。,试验分析：,P,27,小试验是怎样组成对照？,第4页,可依据是否产生,透明圈,来筛选纤维素分解菌,第5页,培养基成份分析,培养基组成,提供主要营养物质,纤维素粉,5g,碳源（能源）,NaNO,3,1g,氮源、无机盐,KCl 0.5g,Na,2,HPO,4,7H,2,O 1.2g,KH,2,PO,4,0.9g MgSO,4,7H,2,O 0.5g,无机盐,酵母膏,0.5g,生长因子、氮源、少许碳源,水解酵素,0.5g,氮素、生长因子,溶解后，蒸馏水定容至,1000mL,水,第6页,比较项目,分解尿素细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,基,原理,培养基类型,目标,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,将细菌涂布在只有,尿素做氮源选择,培养基上,将细菌涂布在只有,纤维素粉做碳源,选择培养基上,固体培养基,液体培养基,筛选菌株,选择培养,第7页,思索：本试验流程与课题,2,中试验流程有哪些异同？,课题,2,是将土样制成菌悬液直接涂布在,以尿素为唯一氮源选择性培养基上，直接分离,得到菌落。,本课题经过,选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，,再将菌液涂布在选择培养基上。其它步骤基本一致。,第8页,按照课题,1,稀释操作方法，将选择培养后培养基进行等比稀释,10,1,10,7,倍。,3.,梯度稀释,10,1,10,2,10,3,10,4,10,5,10,6,第9页,4.,将样品涂布到,判别纤维素分解菌,培养,基上,（,1,）制备判别培养基,:,（,2,）涂布平板：,将稀释度为,10,4,10,6,菌悬液各取,0.1ml,涂布到平板培养基上，,30,倒置培养。,第10页,培养基组成,提供主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏,1g,碳源,、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,无机盐,土豆汁,100mL,碳源,、生长因子,琼脂,15g,凝固剂,上述物质溶解后，加蒸馏水定容至,1000mL,氢元素、氧元素,判别纤维素分解菌,培养基,(,水溶性羧甲基纤维素钠,),第11页,方法一：先,，再加入刚果红进行颜色反应。,方法二：在,时就加入刚果红。,培养微生物,倒平板,5.,刚果红染色法,挑选产生透明圈菌落，普通即为分解纤维素菌落。,第12页,这两种方法各有哪些优点与不足？,染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反应基本上是纤维素分解菌作用,操作繁琐,刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便不存在菌落混杂问题,1.,产生淀粉酶微生物也产生含糊透明圈,2.,有些微生物能降解色素，形成显著透明圈。,第13页,比较,项目,分解尿素细菌,纤维素分解菌,选,择,培养,原理,培养基类型,目标,鉴,定,培养基,原理,现象,方法,在细菌分解尿素化学反应,中，细菌合成脲酶将尿素,分解成了氨，氨会使培养基,碱性增强，,pH,升高。在培,养基中加入酚红指示剂，如,果,pH,升高指示剂会变红,刚果红能够与纤维素形成,红色复合物，当纤维素被,纤维素酶催化分解后红色,复合物无法形成，培养基,上就会出现以纤维素分解,菌为中心透明圈,观察菌落周围是否有,着色,环,带出现来判定尿素分解菌,观察菌落周围是否出现,透明圈,来筛选纤维素分解菌,脲酶检测法,刚果红染色法,第14页,在,产生显著透明圈,菌落，挑取并接种到纤维素分解菌选择培养基上，在,30,0,C,37,0,C,培养，可取得,纯化培养,。,6,、纯化培养,第15页,为了确定分离得到是纤维素分解菌，还需要进行,_,试验，纤维素酶发酵方法有,_,发酵和,_,发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生,_,含量进行定量测定。,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,五、课题延伸,第16页,
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