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1、硅胶的活化： DCM（CH2CL2清洗硅胶）(进口的不需要清洗，国产的要清洗)： 将硅胶装于玻璃柱中 3倍于硅胶体积的甲醇清洗（大约800－1000mL的甲醇） 同体积的DCM清洗（大约500ML的DCM） 将硅胶置于铝箔纸上，通风厨过夜让溶剂挥发干净（或者N2吹干） 马福炉中550℃烘烤至少12hrs,然后降温到180℃停留至少1hr 取出在干燥器中降温后，转制烧瓶中加塞密闭，于干燥器中备用。 Note: 在玻璃柱中清洗时防止硅胶有断层出现 酸性硅胶的配制 30％酸性硅胶的配制 于烧瓶中称取100g活化硅胶
2、 于硅胶上逐滴滴入浓H2SO4共40g(硫酸密度为1.84g/mL) 计算公式为 x/(x+100)=30％， x=42.86g, 42.86/1.84=23.3mL Note 边加边摇，以防结块，或置于摇床上至硅胶为均匀流动状态 置于干燥器中保存 若配制时用50g硅胶，那么H2SO4取11.65mL(大约为21.4g) 22%酸性硅胶：8mL浓H2SO4加50g活化硅胶 44%酸性硅胶：43mL浓H2SO4加100g活化硅胶 44%酸性硅胶：21.5mL浓H2SO4加50g活化硅胶 43×1.84/(100+43×1.84)= 44% N
3、ote: 楼上的方法不能用于楼下，因为所用的硅胶不同，色谱行为就不同，即使柱形一样。因为楼上用的硅胶与楼下的不同，所以不能方法混用。楼上硅胶是国产，楼下的是进口的。 碱性硅胶的配制（1.2%） 100g活化硅胶 滴入30g 1 N的NaOH(1N NaOH: 1.2gNaOH溶于30mL水) 注意：不要使硅胶沾到烧瓶的内磨口上，否则盖子关上后容易粘住打不开 楼上用的是33%的碱性硅胶 （水＋NaOH）/(水＋NaOH+硅胶)＝33% 1g NaOH 加到25mL水里，即配制成了1mol/L的溶液，然后加入到50g活化硅胶中。 氧化铝： 酸性氧
4、化铝的活化 酸性氧化铝装于烧瓶中（体积不超过一半） 用铝箔纸疏松的盖住瓶口 在干燥烘箱中130℃过夜（至少12hrs） 干燥器中加塞密闭 干燥器中备用 碱性氧化铝：（最好在两周内使用，后者最好在5天内用完，否则易失活，可能需要重新活化） 碱性氧化铝盛于蒸发皿中 马福炉中600℃烘至少24hrs 降温到130℃停留至少3hrs 干燥器中降温后转至烧瓶中，于干燥器中备用 弗罗里土：Florisil(硅酸镁) 150mm×5mmID小柱底部用玻璃棉轻轻塞住
5、 取1g 弗罗里土装于柱子中，并且轻轻拍动柱子让填料均匀沉降 上层再装约1cm的无水Na2SO4 50mL DCM清洗小柱 卸去四氟阀，放于通风橱中过夜，让溶剂挥发干 整个柱子置于干燥烘箱中，140℃至少24hrs 如不使用则在140℃下存放 Note：使用时将柱取出降至室温，90分钟内使用，否则重新活化。 AgNO3 硅胶（10%）的配制 5.6g AgNO3溶于21mL超纯水中 逐滴加入到50g活化硅胶中（或者11.2g AgNO3+35mL水+100g硅胶） 用铝箔纸将装AgNO3
6、硅胶的烧瓶全部包裹住，烧瓶口用铝箔纸疏松地盖住，置于干燥烘箱中 烘箱中30℃烘5hrs(至少5hrs) 升温到60℃停留3hrs 中间慢点升温 升温到180℃至少12hrs 干燥器中降温后加塞密闭（保存在棕色干燥器中备用） Note:如果在制作过程中发现AgNO3硅胶颜色加深或者局部变为灰黑色，应该弃去此次配制。变色原因：升温过快。 Note:装AgNO3的小烧杯要尽快用超纯水洗净，否则AgNO3会粘到烧杯上，不容易洗干净。 Na2SO4： 660℃下马福炉中烘至少6 hrs（优级纯） 注意：提取筒
7、洗过后要在马福炉里420℃烘一段时间 纯化注意事项： 1 所有纯化柱均采用干法装制； 2 装好填料后轻拍柱子至填料表层平整； 3 一旦加上洗脱液后，则不要再拍动柱子； 4 一定量的hexane预淋洗进行稳定，并且除去部分污染杂质； 5 预淋洗时流速控制在2滴/S; 6 填料若出现断层则不能再使用； 7上柱样品后，用1mL正己烷清洗烧瓶； 8 要等上一组分液面约1mm时再上样； 9 若是做流出曲线，对体积要求就会严格一些，接流出物的量筒用铝箔包上，防止溶剂挥发。 酸洗or酸性硅胶柱：1.5cm内径（15mmID） 结构式 －Si－O－ 玻璃毛填充
8、 5g 44%酸性硅胶 5g 22%酸性硅胶（这个是为了防止44%硅胶发生炭化） 2g活化硅胶 2 cm无水Na2SO4 50mL---70mL的Hexane淋洗 样品上样 70mL---100mLHexane洗脱 旋转蒸发至2---3mL 2 cm无水Na2SO4 2g活化硅胶 5g 22%酸性硅胶 5g 44%酸性硅胶 淋洗用的Hexane量由所加的硅胶量决定，若酸性硅胶（22%+44%）一共才10克，就不用100mLHexane洗脱，70mL足够，太多反而将杂质洗脱下来了。预淋洗用溶剂量
9、也不一定要50mL—70mL,由硅胶量决定。 酸洗前一定要记住：一定要将溶剂置换为Hexane再酸洗。 硫酸硅胶柱净化容量不足，杂质易与dioxin 及PCBs竞争氧化铝及florisil的活性基位（Active sites），使dioxin 及PCBs在流洗过程中损失，降低了回收率。故acid silica要不能被穿透为止（由管柱的颜色外观可以判定是否被穿透） Note：酸洗前，若样品溶剂为DCM，要将DCM置换成Hexane，CH2CL2不能与H2SO4混合，过酸性柱前将甲苯溶剂也要置换为Hexane,甲苯剩下的越少越好。 酸洗：（注意酸洗最多次数不要超过3次，否则影响回收
10、率） 在溶液中加入15g酸性硅胶和搅拌磁子，在磁力搅拌器上搅拌30mins 取上清液过无水Na2SO4小柱 剩下的硫酸硅胶用10－20 ML的Hexane清洗两次（于磁力搅拌器上搅拌各10分钟） 每次清洗后过无水Na2SO4小柱，一并收集 合并后收集浓缩 酸性硅胶柱可以吸附许多离子或者非离子性官能基化合物，包括生物碱，糖脂，配糖物（醣），染料，碱金属离子，脂质，甘油，类固醇，可塑剂，多环芳香族化合物及酚类衍生物等。 酸碱硅胶柱纯化（复合硅胶柱）30cm×15mmID 底部有200目玻璃砂芯和
11、四氟磨口阀 1g活化硅胶 1g活化硅胶 4g碱性硅胶 4g碱性硅胶 1g活化硅胶 1g活化硅胶 8g酸性硅胶 8g酸性硅胶 2g活化硅胶 1g活化硅胶
12、 1cm无水Na2SO4 2gAgNO3硅胶 100mLHexane预淋洗 2cm无水Na2SO4 75mLHexane洗脱 100mLHexane预淋洗 上样后用150mL (DCM/Hexan
13、e=5/95)洗脱 2 cm无水Na2SO4 2cm无水Na2SO4 1g活化硅胶 2 g AgNO3硅胶 8g 44%酸性硅胶 1g活化硅胶 8g酸性硅胶 1g活化硅胶 3g碱性硅胶 1g活化硅胶 1g活化硅胶 4g碱性硅胶 1.5g－2 g AgNO3硅胶 1g活化硅胶 1g活化硅胶 楼下的方法 ：先用100mLHexane 预淋洗，
14、上样后用150mL洗脱。 DCM/Hexane＝5/95 楼上的方法 ：先用70mL---90mLHexane预淋洗，上样后，用100mLHexane洗脱。 注意：AgNO3硅胶不要加得太多，它对PCBs有吸附作用，AgNO3硅胶尽量称得准确些，它对流出曲线影响较大些（AgNO3有一定的极性） 分析PBDE时，要用铝箔纸将层析柱包上，防光（PBDE与AgNO3都要防光） 分析PBDE时是一样的柱子，一样的填料，洗脱是先100mLHexane预淋洗，上样后先用70mLHexane洗，弃去，再用70mL 1：1（DCM/Hexane）洗，这时洗下的就是含有PBDE的成分。
15、1cm无水Na2SO4 6 g 酸性or 碱性氧化铝 氧化铝纯化柱： 30cm×15mmID玻璃柱 6 g 酸性or 碱性氧化铝 1cm无水Na2SO4 100mL Hexane 预淋洗 酸性氧化铝 碱性氧化铝 DCM : Hexane (1:1,V:V) DCM:Hexane(1:1, V:V) 40mL洗脱 30mL－40mL洗脱 旋蒸时留1mL左右，因为弗罗里土纯化柱太细，要减小上样的高度，洗脱时注意控制流速，不能太快，塞子不要垂
16、直，倾斜既可 弗罗里土纯化柱： 柱型 150mm×5mmID 玻璃棉 1g弗罗里土 1cm无水Na2SO4 50mL DCM清洗 溶剂挥发（要卸下塞子） 140℃下至少烘24hrs 冷却后90min内使用（装上塞子） 50mLHexane预淋洗 35mL收集PCBs（30mL-35mL洗脱）DCM:Hexane(5:95,V:V) DCM（二氯甲烷）40mL-45mL收集dioxins 生物组织脂肪含量测定和去除： 提取脂肪前烧瓶称重 提取液转移至此烧瓶旋转浓缩近干后移至N2流下将多余溶剂吹走，直至天平
17、称重无变化（百分位天平） 称量提取后烧瓶重 两次重量差即为脂肪含量 脂肪含量＝【（提取后烧瓶重－提取前烧瓶重）/提取样】×（1－组织水分百分含量） 称脂后加50mLHexane溶解提取物 15g酸性硅胶，搅拌磁子 搅拌30mins 过无水Na2SO4小柱 5mLHexane清洗两次 合并收集后浓缩 楼上氧化铝0.8 cmID,细柱，半湿法装柱 若是1.0cmID,则Al2O3用10g 柱中加30mLHexane 8g Al2O3 1cm Na2SO4 预淋洗（30mL-40mLHexane洗脱）
18、 上样 DCM/Hexane＝5：95 100mL洗脱PCBs DCM/Hexane＝1:1 50mL洗脱dioxins 凝胶渗透色谱 GPC 填料： Bio-Beads SX3 GPC 柱型 30cm×25mmID(柱子下面有砂芯) 填料 30g于烧杯中 加入DCM:Hexane（1：1，V：V）全部盖住 铝箔纸盖住烧杯置于通风橱过夜，至少12hrs,填料充分溶胀 搅动填料，并用吸管逐步将填料转移到柱中，中间打开四氟阀放去多余的溶剂 全部转移后，上部留有10cm溶剂 上端加塞，底部关阀 整个柱子倒置后打开阀门 振荡柱体，使
19、填料逐渐整体均匀倒置 关闭阀门，将柱子缓慢扶正，并且打开上面的磨口塞，可以看到填料均匀沉降直至完全 应该无断层，无气泡，无沉降分界层 500mL DCM：Hexane（1:1 ,V:V）淋洗，（注意要将溶剂混合均匀） 滴速 2－3滴/S 不用时关阀加塞密闭，上层留有5CM以上的溶剂，GPC使用溶剂均为DCM：Hexane（1：1，V:V）若长时间没用，纯化前用100mL溶剂预淋洗 GPC洗脱 DCM：Hexane(1:1,V:V) 100mL 预淋洗（量筒接）量筒1 上样后，先用50 mL DCM：Hexane(1:1,V:V)去掉大分子（量筒
20、接）量筒2 另外量筒接70mL(DCM/Hexane=1/1)为PCB 量筒3 另外量筒接50mL,量筒4 量筒4与量筒2 50mL合并保存，以防重复实验时回收再分析 注意： 1若GPC柱中物料层有气泡，则上面用塞子堵上，稍微晃一下柱子可以去除。若溶剂干了会造成断层。 2GPC柱用前由于重心作用，上层发胀，所以需要释放一段洗脱溶剂，将发胀部分压下去，再上样。 N2吹 纯化后样品旋转蒸发 转移入KD管后N2吹 剩下0.2-0.3mL左右 进样小瓶瓶芯中加15uL的壬烷 Kd管中样品转移至瓶芯 N2吹（温度不要太高30℃－60
21、℃，太高有损失） 洗KD管用DCM or Hexane至少洗2次，合并到进样小瓶瓶芯中 N2吹至瓶芯拐弯处上1mm－2mm处 加入回收标保证进样小瓶中最后溶液约为20µL左右 涡轮 注意 进样小瓶与瓶芯大小要搭配 加标前标准溶液需要提前从冰箱中拿出来平衡大约10几分钟 配制标准溶液： 举例 PBB标样转移到棕色小瓶A 小瓶A用DCM清洗3次（涡轮） 贴标签纸（标签纸不要贴太大，用透明胶贴一下） 称空瓶重量W0 将装标样的安培小瓶B按划线掰开 DCM清洗一下滴管，晾干，用滴
22、管将标样安培瓶里的标准溶液吸出转移入小瓶A 称量装标后的小瓶与标的重量W1 那么W1-W0即为取的标的重量 C18柱结构式： －Si－C18H37 目的：清除极性物质，ex: 蛋白，脂质 铜粉去S前铜粉的准备 铜粉置于烧瓶中 6MHCL倒入清洗，不锈钢药勺搅拌 倒掉HCL，超纯水清洗数次，洗净HCL为止 倒入丙酮清洗数次，将水洗净 将铜粉晾干备用（晾干的方法可以用N2吹干） 分析PBDE时所用的方法 1.5 g AgNO3装到柱子里（30cm×15mmID玻璃柱） 50mL or 30 mL Hexane预淋洗 100mL Hex洗PCB+dioxin 50mL 10%DCM+90% Hexane洗PBDE
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