1、 板蓝根提取液对小鼠免疫机能的影响
(一) 材料:
1.板蓝根提取液(直接可灌胃)(蒸馏水一瓶,生理盐水一瓶,95%乙醇一瓶,量筒小3支,量筒大1支,烧杯3个,玻璃棒3个,吸管10个,注射器一天预计三支总数为3x试验天数,托盘天平2个,培养基3套)
2.酒精灯3个,消毒酒精棉一套
3.大小镊子各3把,小剪刀3把
4.小鼠(4-6周,18-22g 20只,雌雄随机分两组)
5.鸡细胞悬液
6.移液枪3把(大小规格),枪头1盒,EP管10个,滤纸10张,试管10个,胶头滴管3个
7.染色装置,(瑞氏染色)
8.显微镜,解剖盘,固定针,载破片盖破片(各6个),平皿(6个),
2、96孔培养板3个,离心机,培养箱
9.试验用手套(20个)口罩(20个)
10.计数板(3个),计数器(3个)
(二) 方法
将20只小鼠随机分成两组,每组10只,A组定时灌胃50㎎|板蓝根提取液,B组灌胃等量蒸馏水为对照组;续灌胃10天,第11天分别对两组小鼠进行称重,然后脱颈处死,测定下述各项免疫指标
1.板蓝根提取液对小鼠免疫器官重量的影响
(测定免疫器官指数)
灌胃结束后,对两组小鼠进行称重,剖杀,无菌条件下去下胸腺,脾脏后,除去器官表面杂质,在天平上将器官称重,并测定免疫器官数:免疫器官指数=免疫重量(mg)|体重(g)
2.小鼠巨噬细胞吞噬实验
鸡翼下
3、静脉取血后,加生理盐水离心两次,然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水,调至鸡红细胞浓度为1%。向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。脱颈处死小鼠后,解剖小鼠,在腹膜剪开小口,,灭菌吸管吸取腹腔液,在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水,向其中滴加一滴腹腔液,静置10分钟,使腹水细胞贴壁,弃去生理盐水,待其稍干后,进行瑞氏染色。油镜观察吞噬细胞数量,计算指数,鸡红细胞为淡黄色椭圆形有核的细胞,数量多体积较大不规则的细胞,表面有许多似毛刺装的小突起即为吞噬细胞。
3.小鼠淋巴细胞转化实验
无菌条件下分别取出A组B组小鼠脾脏,放入培养液中稀释,用 RPMI-1640 培养液稀释至细胞浓度为 2
4、×106 个/mL,各 取 400 μL 至 96 孔培养板中,加入 200 mg/L ConA 溶 液 10 μL,培养基代替 ConA 溶液做对照,于 37 ℃、5 % CO2 培养箱中培养 72 h。培养结束前 4 h 各取上清液 200 μL,加入已除菌的 5 mg/mL MTT 溶液 40 μL,继续 培养至结束。离心保留沉淀,各加入 37 ℃ DMSO 300μL, 振荡 10 min,酶标仪测定 570 nm 处吸光值,计算淋巴 细胞增殖指数,淋巴细胞增殖指数按式(4)计算。 脾淋巴细胞增殖指数/% =([ A 处理 - A 对照)/A 对照] × 100 (4) 式中:A 处理为加 ConA 孔吸光值;A 对照为空白孔吸