板蓝根提取液对小鼠免疫机能的影响.docx

板蓝根提取液对小鼠免疫机能的影响

（一） 材料：
1.板蓝根提取液（直接可灌胃）（蒸馏水一瓶，生理盐水一瓶，95%乙醇一瓶，量筒小3支，量筒大1支，烧杯3个，玻璃棒3个，吸管10个，注射器一天预计三支总数为3x试验天数，托盘天平2个，培养基3套）
2.酒精灯3个，消毒酒精棉一套
3.大小镊子各3把，小剪刀3把
4.小鼠（4-6周，18-22g 20只，雌雄随机分两组）
5.鸡细胞悬液
6.移液枪3把（大小规格），枪头1盒，EP管10个，滤纸10张，试管10个，胶头滴管3个
7.染色装置，（瑞氏染色）
8.显微镜，解剖盘，固定针，载破片盖破片（各6个），平皿（6个），96孔培养板3个，离心机，培养箱
9.试验用手套（20个）口罩（20个）
10.计数板（3个），计数器（3个）

（二） 方法
将20只小鼠随机分成两组，每组10只，A组定时灌胃50㎎|板蓝根提取液，B组灌胃等量蒸馏水为对照组；续灌胃10天，第11天分别对两组小鼠进行称重，然后脱颈处死，测定下述各项免疫指标

1.板蓝根提取液对小鼠免疫器官重量的影响
（测定免疫器官指数）
灌胃结束后，对两组小鼠进行称重，剖杀，无菌条件下去下胸腺，脾脏后，除去器官表面杂质，在天平上将器官称重，并测定免疫器官数：免疫器官指数=免疫重量（mg）|体重（g）

2.小鼠巨噬细胞吞噬实验
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。脱颈处死小鼠后，解剖小鼠，在腹膜剪开小口，，灭菌吸管吸取腹腔液，在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。油镜观察吞噬细胞数量，计算指数，鸡红细胞为淡黄色椭圆形有核的细胞，数量多体积较大不规则的细胞，表面有许多似毛刺装的小突起即为吞噬细胞。

3.小鼠淋巴细胞转化实验
无菌条件下分别取出A组B组小鼠脾脏，放入培养液中稀释，用 RPMI-1640 培养液稀释至细胞浓度为 2×106 个/mL，各 取 400 μL 至 96 孔培养板中，加入 200 mg/L ConA 溶 液 10 μL，培养基代替 ConA 溶液做对照，于 37 ℃、5 % CO2 培养箱中培养 72 h。培养结束前 4 h 各取上清液 200 μL，加入已除菌的 5 mg/mL MTT 溶液 40 μL，继续 培养至结束。离心保留沉淀，各加入 37 ℃ DMSO 300μL， 振荡 10 min，酶标仪测定 570 nm 处吸光值，计算淋巴 细胞增殖指数，淋巴细胞增殖指数按式（4）计算。 脾淋巴细胞增殖指数/% ＝（[ A 处理 － A 对照）/A 对照] × 100 （4） 式中：A 处理为加 ConA 孔吸光值；A 对照为空白孔吸