实验四果蝇的单因子和双因子杂交.doc

实验四 果蝇的单/双因子杂交实验（6学时）
一． 实验目的
1 掌握果蝇单/双因子的杂交方法和杂交结果的统计处理方法，验证并加深理解遗传的自由组合定律和分离定律的原理．
2 记录单/双因子杂交结果，掌握数据统计处理方法．

二． 实验原理
按照孟德儿第一定律，即分离定律，基因是一个独立的单位。基因完整地从一代传递到下一代，有该基因的显隐性决定其在下一代的形状表现．一队杂合状态的等位基因保持相对的独立性，在减数分裂形成继配子时，等位基因随同源染色体的分离而分配到不同的配子衷曲。理论上配子的分离比是１∶１，即产生带Ａ和a基因的配子数相等，因此，等位基因杂合体的自交后代表现为基因型分离比ＡＡ:Aa:aa是1:2:1，如果显性完全，其表型分离比为3:1，这就是分离定律的基本内容。通过果蝇一队因子的杂技哦啊实验，即可以验证它．
位于非同源染色体上的两对基因，在减数分裂形成配子时可以自由组合；又由于配子的随机结合，导致它们所决定的两对相对性状在杂种第二代是自由组合的．一对基因所决定的性状在杂种二代是３：１之比，两对不相互连锁的基因所决定的性状，在杂种二代就呈９：３：３：１之比．

三． 材料与用品
１． 材料
饲养的野生型和几种常见突变型果蝇。
单因子杂交实验可选用黑腹果蝇的长翅纯合体、残翅纯合体作为实验材料．
双因子杂交实验可选用黑腹果蝇的长翅灰体、残翅黑檀体作为实验材料．
２．用具及药品
⑴． 用具
双筒解剖镜、显微镜、放大镜、小镊子、麻醉瓶、培养瓶、白瓷板、毛笔、棉塞、软木塞或橡胶塞、恒温培养箱、小滴瓶、载片、盖片、吸水纸、纱布等．
⑵． 药品
琼脂、蔗糖、乙醇、氯仿、丙酸、玉米粉、酵母粉．
四． 实验步骤（一）
⑴． 选择处女蝇
将长翅果蝇和残翅果蝇培养瓶内已羽化的成蝇全部杀死，此后凡羽化后未超过８h的雌营即是处女蝇．
⑵． 杂交
正交：长翅果蝇（母）×残翅（公）；反交：残翅果蝇（母）：长翅果蝇（公）．各做两瓶，每瓶性培养基中各移入３～５对种蝇．贴好标签，注明杂交组合、杂交日期及实验者姓名．
⑶． 移去亲本
７～８天后移去亲本
⑷． 观察Ｆ１
４～５天后Ｆ１成虫出现，观察其翅膀形态后处死．连续观察记录３d，各自记录正、反交．
观察结果统计日期

正交
反交

长翅数
残翅数
长翅数
蚕翅数
月　日

合　计

⑸．F1互交
在新培养瓶内，每瓶各放入３～５对Ｆ１果蝇，培养．
⑹．移去Ｆ１
７～８天后，移去Ｆ１成蝇，麻醉致死，放入废蝇盛留瓶．
⑺观察Ｆ２
４～５天后Ｆ２成蝇出现，观察翅膀形态后处死，隔天记录一次，连续观察统计４次正、反交的结果并记录．
⑻数据处理及χ2测验
χ2=Σ (O-E) 2/E式中，Ｏ是观察值，Ｅ是预期值
根据χ2自由度，查表，若P≥5%,说明观察值与理论值相符合.可以认为观察值是符合分离定律的．

长翅
残翅
合计
观察值（Ｏ）
预期值（Ｅ）（３：１）
(O-E) 2/E

实验步骤（二）
1 选择处女蝇
将长翅果蝇和残翅果蝇培养瓶内已羽化的成蝇全部杀死，此后凡羽化后未超过８h的雌蝇即是处女蝇．选取野生型处女蝇和突变型处女蝇，分别放于含新鲜培养基的培养瓶内保存备用．
２．杂交
正交：野生处女蝇（母）×黑檀体、残翅雄蝇（公）；
反交：黑檀体、残翅处女蝇（母）×野生型雄蝇．各做２瓶，每瓶中分别移入３～５对种蝇．贴好标签，注明杂交组合、杂交日期及实验者姓名．
３．移去亲本　　７～８d后移去亲本果蝇处死．
４．观察Ｆ１　　４～５d后Ｆ１成蝇出现，观察其性状后处死．连续观察并记录正、反交３d
５．Ｆ１互交　　按原来的正、反交各选３～５对Ｆ１成蝇，移入新培养瓶中，继续培养．
６．移去Ｆ１　　７～８d后移去Ｆ１成蝇．
７．观察Ｆ２及实验结果记录　　４～５d后Ｆ２成蝇出现，观察Ｆ２性状后处死，隔天观察记录一次，连续观察统计４～５次，正、反交结果各自就．
子代类型
统计日期
正交
反交
灰长
黑长
灰残
黑残
灰长
黑长
灰残
黑残

合计

⑻数据处理及χ2测验
χ2=Σ (O-E) 2/E式中，Ｏ是观察值，Ｅ是预期值
根据χ2自由度，查表，若P≥5%,说明观察值与理论值相符合.可以认为观察值是符合分离定律的．
子代类型
参数
灰长
黑长
灰残
黑残
合计
观察值（Ｏ）
预期值（Ｅ）
（９：３：３：１）
(O-E) 2/E

五 实验报告

1 统计分析果蝇实验结果，并用χ2测验验证实验结果是否与分离/自由组合规律相符？
2 根据你的实验结果记录，对所做杂交过程作一遗传分析，对所研究的性状及基因可得出哪些结论？
3 果蝇杂交时，为什么要选择处女蝇？Ｆ１代是否要选择处女蝇，为什么？

4 在做果蝇杂交时会出现表型分离比不符合３：１的比例．为什么？分析此次实验成败原因
5 果蝇麻醉时的注意事项有哪些？
6 在进行亲本杂交和Ｆ１自交后一定时间为什么要倒去杂交亲本？