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临床医学检验中级考试—免疫.doc

1、 免疫 PEG 1. 可用来检测CIC,特点是简便,特异性差,易受温度影响,PEG最终浓度为3-4%(分子量越大,PEG浓度越小); 2. 是最常用的细胞融合剂,分子量大约6000。 3. 可加速IC的形成; 补体: 1. 由肝脏或巨噬细胞产生。(抗原刺激机体不可产生!!)属于β球蛋白 2. 灭活:56℃ 30min。低温不能灭活。 3. 补体降低: a) 消耗:SLE,冷球蛋白血症,自免性溶贫,类风关,移植排斥等; b) 丢失:烧伤,失血,肾脏病变; c) 合成不足:肝病,营养不良; d) 细菌感染(G-尤甚),替代途径激活(凝聚的Ig、内毒素,菌体多糖

2、水解蛋白酶等可激活替代途径); 4. 补体升高:感染恢复期,恶性肿瘤(C2/3/4);心梗、病毒肝炎、糖尿病、正常妊娠则升高。 5. 补体活化:①经典:IC激活C1q,进一步激活C1r和C1s;激活顺序,142356789;经典途径激活可用C1q结合试验来检测;②MBL:MBL结合至细菌启动的途径,激活物是MBL或CRP,绕过C1途径;③旁路:C3开始。 6. CH50测定:检测的是经典途径的溶血总活性。 7. 单个补体测定:①免疫溶血法:非检测含量,而检测活性;②免疫化学法:单向免疫扩散,火箭免疫电泳,透射比浊法,散射比浊法; 8. 补体结合试验(cft):不检测补体,而是利用补

3、体检测抗原抗体。不溶血为阳性。所用补体多为豚鼠血清; 9. 溶血反应和补体结合试验所用溶血素多为兔抗羊RBC抗体;溶血试验用2个单位的溶血素; 10. C1抑制分子缺陷,导致遗传性血管神经性水肿; 11. C3a和C5a叫做过敏毒素,可作用于肥大细胞和嗜碱性粒细胞,引起过敏反应。 12. C3b与C3b受体结合后促使B细胞活化。 基因工程抗体的优点: 非异源性。 人鼠嵌合体指:Ig的人(C区)和鼠(V区)连接。 白介素 1. IL-1、6刺激肝脏细胞分泌急性时相反应蛋白; 2. IL-2:T细胞生长因子。活化T细胞产生,促进淋巴细胞增殖。可促B细胞分泌抗体;激活NK

4、细胞; 3. IL-4:可促进免疫球蛋白的类型转换,促进IGE转换; 4. IL-5刺激EO增殖分化; 5. IL-6支持浆细胞增殖分化,以及B细胞杂交瘤细胞增殖; 6. IL-8对中性粒有趋化作用; 7. IL4/10是Th2细胞分泌的细胞因子,可负调节细胞免疫应答;IL-10抑制IL-2合成; 细胞因子 1. 多数细胞因子以单体形式存在,以非特异方式发挥作用,不受到MHC的限制。 2. TGF-α刺激靶细胞产生IL-1,IL6;激活NK细胞; 3. TGF-β可负调节免疫应答; 4. 干扰素可抑制TH0细胞向TH2细胞转换,激活NK细胞; B细胞 1. B细

5、胞: ① 不成熟B细胞仅表达SmIgM; ② 成熟B细胞表面表达SmIgM, SmIgD;CD21 ③ B2是外周血中的主要B细胞。 2. 功能:B1主要和免疫调节、免疫病、B细胞源性肿瘤密切相关;B2是体液免疫的执行细胞。 3. B1:CD5/19/20/22 4. B2:CD23/12/20/22 5. CD21可与EB病毒结合; 6. B细胞到浆细胞发育发生障碍,可发生选择性免疫缺陷症; T细胞 1. Th1细胞:分泌IL-2/IFN-γ/IFN-β;Th2细胞:分泌IL-4/5/6/10; 2. 全部T细胞都表达CD2; 3. 成熟T细胞表达CD3; 4.

6、 部分T细胞表达CD4, CD8; 5. 与绵阳红细胞结合的是CD2; 6. 记忆性T细胞表面是CD45RO; 7. 部分NK细胞表达CD2; 8. CD28主要表达在T细胞 免疫球蛋白 1. IgA: 2. IgD:低;0.2% 3. IgE:最少。 4. IgG:Fc段可与SPA结合。 5. IgM:①可激活补体;②原发性巨球蛋白血症可增高; 冷球蛋白 4℃自发沉淀 免疫球蛋白测定 1. IgG/M/A:①单向环状免疫扩散法;②免疫比浊法; 2. IgD: M蛋白 1. 良性单克隆丙球蛋白常见骨髓中M蛋白;轻链病尿中增高的主要为M蛋白;

7、2. 多发性骨髓M蛋白不具免疫活性; 3. 理化性质单一,多无免疫活性; 4. 血清蛋白区带电泳:经典分析方法。 5. 免疫球蛋白定量:粗筛 6. 免疫电泳:鉴定的方法。取代电泳和免疫扩散电泳的结合。 7. 免疫固定电泳:鉴定的常用方法。区带电泳和特异抗血清免疫沉淀反应相结合。 k-Ig和入-Ig定量测定 主要为单项免疫扩散法和免疫比浊法。 抗原抗体反应 1. 前带现象:抗体过剩; 2. 后带反应:抗原过剩; 抗原呈递细胞: 初次应答多为DC和单核巨噬,再次应答主要是B细胞。 中性粒细胞 1. 趋化能力下降(小室法,皮窗试验):糖尿病 2. 吞噬

8、能力下降:补体缺陷 3. 代谢能力下降:慢性肉芽肿 4. NBT(+):细菌感染(NBT测试杀菌能力),正常为5-10%; 5. 中性粒发育不良可出现慢性肉芽肿 巨噬细胞 1. 巨噬细胞直接参加2,4型超敏反应,不直接参加1.3型超敏反应。 2. 具有ADCC效应。 3. 表面受体有清道夫受体,FcγR,TLR,补体受体。 1型超敏反应 1. 变应原:选择性激活CD4+Th2细胞、B淋巴细胞; 2. 效应抗体:IgE 3. 效应细胞:BASO, EO, 肥大细胞 4. 举例:过敏性休克,皮肤过敏,呼吸道过敏。 5. 特点:具有明显的特体差异。 2型超敏反

9、应(细胞毒型) 1. 抗体:IgG, IgM。 2. 细胞:NK, 补体,巨噬细胞。 3. 举例:新生儿溶血 3型超敏反应(循环免疫复合型) 1. 抗体等:IgG, IgM,复合物,补体。 2. 细胞:中性粒细胞浸润 3. 举例:血清病、链球菌感染肾小球肾炎、SLE,类风关。 4型超敏反应 1. 反应物质:无补体、抗体 2. 细胞:巨噬细胞,淋巴细胞 3. 举例:接触性皮炎 4. 备注:关键作用的细胞还是T细胞,活化的CD4+Th1可招募单核巨噬细胞并活化, 脱敏治疗 诱导机体产生的封闭抗体是IgG 乙肝 1. HBV DNA感染第一个出现的为H

10、BsAg; 2. HBV存在和复制活跃的直接指标为HBcAg; SLE IgG,IgA升高较多 类风关 IGM增高为主 标志性抗体 SLE:①抗Sm抗体:不与活动度相关;②抗dsDNA抗体:活跃期明显升高; DiGeorge综合征: 先天性胸腺发育不良,胚胎胸腺移植治疗有效。 结核分枝杆菌: 抗PPD抗体+,结核菌活动的重要标志。 HLA抗原 1. HLA分子多态性主要体现在多肽结合区上,而非Ig样区; 2. 1类分布较广,有核细胞。淋巴、WBC表面最多。而RBC、神经细胞、滋养层细胞则不表达。 3. 2类分布较窄,主要在B细胞,单和巨噬细

11、胞,DC及其他APC上。 4. 检测淋巴细胞HLA抗原:微量淋巴细胞毒试验。 5. 移植 1. ① 超急性排斥反应:数分钟,数小时,长至24-48小时发生; ② 急性排斥反应:数周——数月,免疫抑制剂治疗后可缓解; ③ 亚急性排斥反应: ④ 慢性排斥反应:数月——数年,免疫抑制剂治疗后常无效; 2. 同种异体移植:排斥反应最主要,受者T细胞,针对移植物抗原发生免疫应答。 3. 移植物抗宿主反应:常见于骨髓移植,骨髓中的免疫细胞攻击受体(严重免疫抑制状态)。 4. 受者对供体MHC识别,间接识别被激活的T细胞以CD4+为主。 原发性巨球蛋白血症 浆细胞恶性增殖,

12、分泌IgM增多。 遗传性血管性水肿 补体系统缺陷病,缺乏C1/NH,导致炎症介质产生失控。 普通易变型免疫缺陷 B细胞功能缺陷病,信号转导异常。 慢性肉芽肿: 属于原发性吞噬细胞功能缺陷。中性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬、杀伤能力受损。 ADA缺陷病 联合免疫缺陷病,ADA下降,多见于婴幼儿。 沉淀反应 1. 免疫浊度反应:要保持抗体过量,若抗原过量则不准确; 2. 单向扩散:单抗结果偏低,多抗偏高; 3. 双向扩散法:①可测定抗体效价;②抗体多,线靠近抗原孔;抗原多,线靠近抗体孔; 免疫电泳 1. 对流免疫电泳:双向免疫扩散+电泳;

13、2. 火箭免疫电泳:单向免疫扩散+电泳 3. 免疫电泳:定性试验:分析成分的种类和性质。 4. 免疫固定电泳:用于蛋白质的鉴定 5. 交叉免疫电泳:抗原蛋白质的定量 免疫散射比浊 颗粒直径如远小于入射波长,成为Rayleigh散射。 化学发光 1. (直接)吖啶酯类 2. (催化)碱性磷酸酶标记:底物为AMPPD。 3. (能量传递)参与氧化反应,非酶标记物,三联吡啶钌; 4. 辣根过氧化物酶标记:底物为鲁米诺。 放免与免放 1. 放免标记抗原,竞争性抑制, 2. 免放标记抗体,非竞争抑制,抗体过量。 时间分辨荧光免疫测定 1. 特异光信号是长寿命荧光; 2. 蛋白质、激素、药物、肿瘤标志物、病原体抗原抗体等; 间接免疫荧光 1. 公认最有效的检测疟疾抗体的方法; 荧光抗体染色法 1. 可检测病毒及其繁殖情况 荧光染色 1. 四乙基罗丹明:橘红色,吸收570 2. 四甲基乙硫氰酸罗丹明:橙红,吸收620nm; 3. 藻红蛋白:可与FITC共用488nm激发光; 免疫应答 初次应答的APC为DC和单核巨噬细胞, 再次应答的APC为B细胞

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