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血球计数板使用.doc

1、 血球计数板的使用 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造,它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 血球计数板的使用方法(

2、以计数酵母菌为例): 1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可。 2 将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入。多余的菌液用吸水纸吸取。稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。 4 计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数;如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 5 当遇到位于

3、大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。 6 对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 计算公式: (1) 16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数 (2) 25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数 血球计数板的清洁: 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷。洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必须重复清洗直到干净为止。 最近进行了很多细胞计数的实践,得到一些经验: 1、关于进样:向已经盖上玻片的计数板中加样品,需要注意:一次性完成,从一个地方进样,流速要均匀,不可向下压盖玻片。 2、如果进样用1ml的枪头,可将枪头尖端剪掉1~2mm,使开口变大,这样可以防止进样时液体冲力太大而从对边冲出去。 3、在进样前样品充分混合均匀的前提下,由于进样差异,最好能多次进样计数,而不是一次进样,然后根据两个计数室的细胞数量得出结果。

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