LC-20AT高效液相色谱仪验证方案.doc

LC-20AT高效液相色谱仪
验 证 方 案

规格型号
LC-20AT
设备编号
023
使用岗位
中药制剂室药检岗位

制造厂商
岛津企业管理(中国)有限公司

目录
1. 参与验证的相关部门及其职责 2
1.1验证小组成员及职责 2
1.2验证方案起草 2
1.3验证方案批准 2
2. 验证目的 2
3. 验证依据判断标准： 3
3.1验证依据 3
3.2验证评判标准 3
4.验证内容 3
4.1安装环境的确认 3
4.2运行确认 4
4.3性能确认 5
4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定 6
4.5 紫外检测器 8
4.6整机性能 9
5.验证结果及分析评价 10
6.再验证要求 10
6.1再验证周期 10
6.2 再验证内容 10

本公司所用的LC-20AT高效液相色谱仪是由工作站软件（N2000）、二元泵(LC-20AT)、手动进样器（20微升定量环）、控制器(CBM-20A)、柱温箱(IN-150)、紫外检测器（SPD-20AT）以及相关管路等组成。主要用于本公司在药物含量检测。
1. 参与验证的相关部门及其职责
1.1验证小组成员及职责
部门
验证人员
职务
验证分工
药检科

温铭刚
组长
负责起草验证方案审核、组织协调验证
王凯
化验员
负责撰写LC-20AT型高效液相色谱仪及验证报告
刘丹妮
化验员
保证设备正常运转

1.2验证方案起草

起草部门
签名
日期
药检科

年 月 日

1.3验证方案批准

批 准 人
签 名
日 期
药剂科主任

年 月 日

2. 验证目的
确认LC-20AT高效液相色谱仪的运行环境、性能等各项指标符合器所设计的性能指标。确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为日常检验提供准确的检测结果。
3. 验证依据判断标准：
3.1验证依据
3.1.1《药品GMP指南》2010年版
3.1.2《LC-20AT型高效液相色谱仪标准操作规程》
3.1.3《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》
3.1.4《中国药典》2010年版二部附录
3.2验证评判标准
3.2.1安装环境确认判断标准
确认安装符合《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》说明书要求。
3.2.2运行确认判断标准
安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
3.2.3性能确认判断标准
使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求和LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。
4.验证内容
4.1安装环境的确认
项 目
要 求
检查情况
位 置
应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环
境
洁净度
室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度
15～35℃，全天温度变化较小

光线
无阳光直射

相对湿度
45～85%

电
路
电源
AC220V±22V、50HZ±1HZ

接地
应接地

单项结论：_________________________________________________________
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日

4.2运行确认：
严格按《LC-210AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。
操作 步骤
合 格 标 准
结 果
操作前准备
1.打开电源，仪器自动完成初始化
2.将排液阀旋钮逆时钟旋转180°以打开排液阀，按“purge”，泵运行，泵指示灯亮
3.清洗完成后，按一次“func”，以改变流速，将流速设定为5ml/min,顺时针方向旋转排液阀旋钮关闭排液阀
4.按“pump”，泵运行，泵指示灯亮；约15分钟后，再次按“pump”，泵停止，泵指示灯灭
5.以上程序完成后，操作的准备工作完成

检查压力值
1.将流动相倒入贮液瓶，吸滤头放入贮液瓶中，排液管的一端放入废液瓶中
2.打开排液阀，逆时钟方向旋转排液阀旋钮180°，按“CE”返回初始屏幕，检查显示压力值是否在-0.3至0.3MPa之间
3.检查压力上下限的值是否合适，必要时更改这些值到符合要求
4.按“purge”以记录的流速开始送液，观察从排液管末端流出的流动相约10秒钟，流动相应持续流动且没有气泡，按“purge”泵停止，泵指示灯灭

单项结论：
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.3性能确认
4.3.1 泵性能确认
1) 流量准确性确认
泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3
3
流动相收集时间（min）
10
5
5
允许误差
SS
5%
3%
2%
SR
3%
2%
2%
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算SS和SR，结果记录在下表中；
流量（ml/min）
次数
W1
W2
W2-W1
SS
SR
0.5
1

2

3

1.0
1

2

3

2.0
1

2

3

注：Ss=(-Fs)/Fs×100% 式（1）
SR=(Fmax-Fmin)/ ×100% 式（2）
式中：Fm ——Fm=(W2-W1)/(ρ•t)，流量实测值，ml/min；
W2—— 容量瓶+流动相的质量，g；W1—— 容量瓶的质量，g；
ρ—— 试验温度下流动相的密度，g/mL；t—— 收集流动相的时间，min；
—— 同一组测量的算术平均值，mL/min；FS—— 流量设定值，mL/min；
Fmax ——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin ——同一组测量中流量最小值，ml/min。

单项结论：
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
2) 压力范围
可执行标准：±0.2MPa设定值
测试方法：在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。
次数
设置压力
（Mpa）
停止压力
（Mpa）
误差
（Mpa）
1
10

2
20

3
30

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日

4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃、40℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；
设定温度
（℃）
次数
首测温度
（℃）
平均温度
（℃）
ΔTS
（℃）
TC
结 果
35℃
1

2

3

4

5

6

7

40℃
1

2

3

4

5

6

7

45℃
1

2

3

4

5

6

7

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.5 紫外检测器
4.5.1 基线噪音和基线漂移
选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，二极管阵列检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4；
衰减倍数
测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线噪音
结 果

注：Nd=KB
式中：K：衰减倍数；B：测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线漂移在1h内偏离原点的值为 （AU/h），应不超过5×10-3AU/h。
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.5.2最小检测浓度
采用依替巴肽分析色谱条件，进样量20µl；取适量的依替巴肽，用甲醇稀释制成1×10-6g/ml的溶液，连续进样6次，记录依替巴肽/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-6g/ml，结果记录在下表；
依替巴肽的称样量
稀释倍数
依替巴肽的色谱峰高
平均峰高
最小检测浓度
结 果

注：CL
2Nd×c×V
H×20
式中：Nd：基线噪声峰—峰高；c：标准溶液浓度；H：标准溶液的色谱峰高；V：进样体积
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.6整机性能
在4.4.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中；
品 名

称样量

项目指标
实 验 结 果
结 果
分离度（R）≥1.5

Rsd≤2%
图谱文件名
峰面积（A）
平均数（M）
Rsd值
结 果

注：M=(A1+A2+……An)/n
Rsd=
式中：M：峰面积平均数；A：峰面积；n：测量次数
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
5.验证结果及分析评价
结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
6.再验证要求
6.1再验证周期
6.1.1 设备大修后需再校验。
6.1.2 由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。
6.1.3 高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。
6.2 再验证内容
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

验证证书

名称：LC-20AT高效液相色谱仪
编号：023
经验证：LC-20AT高效液相色谱仪各项技术指标符合要求，准许投入生产。
总负责人：
时 间：

LC-20AT高效液相色谱仪
验 证 方 案

规格型号
LC-20AT
设备编号
023
使用岗位
中药制剂室药检岗位

制造厂商
岛津企业管理(中国)有限公司

目录
1. 参与验证的相关部门及其职责 2
1.1验证小组成员及职责 2
1.2验证方案起草 2
1.3验证方案批准 2
2. 验证目的 2
3. 验证依据判断标准： 3
3.1验证依据 3
3.2验证评判标准 3
4.验证内容 3
4.1安装环境的确认 3
4.2运行确认 4
4.3性能确认 5
4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定 6
4.5 紫外检测器 8
4.6整机性能 9
5.验证结果及分析评价 10
6.再验证要求 10
6.1再验证周期 10
6.2 再验证内容 10

本公司所用的LC-20AT高效液相色谱仪是由工作站软件（N2000）、二元泵(LC-20AT)、手动进样器（20微升定量环）、控制器(CBM-20A)、柱温箱(IN-150)、紫外检测器（SPD-20AT）以及相关管路等组成。主要用于本公司在药物含量检测。
1. 参与验证的相关部门及其职责
1.1验证小组成员及职责
部门
验证人员
职务
验证分工
药检科

温铭刚
组长
负责起草验证方案审核、组织协调验证
王凯
化验员
负责撰写LC-20AT型高效液相色谱仪及验证报告
刘丹妮
化验员
保证设备正常运转

1.2验证方案起草

起草部门
签名
日期
药检科

年 月 日

1.3验证方案批准

批 准 人
签 名
日 期
药剂科主任

年 月 日

2. 验证目的
确认LC-20AT高效液相色谱仪的运行环境、性能等各项指标符合器所设计的性能指标。确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为日常检验提供准确的检测结果。
3. 验证依据判断标准：
3.1验证依据
3.1.1《药品GMP指南》2010年版
3.1.2《LC-20AT型高效液相色谱仪标准操作规程》
3.1.3《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》
3.1.4《中国药典》2010年版二部附录
3.2验证评判标准
3.2.1安装环境确认判断标准
确认安装符合《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》说明书要求。
3.2.2运行确认判断标准
安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
3.2.3性能确认判断标准
使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求和LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。
4.验证内容
4.1安装环境的确认
项 目
要 求
检查情况
位 置
应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环
境
洁净度
室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度
15～35℃，全天温度变化较小

光线
无阳光直射

相对湿度
45～85%

电
路
电源
AC220V±22V、50HZ±1HZ

接地
应接地

单项结论：
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日

4.2运行确认：
严格按《LC-210AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。
操作 步骤
合 格 标 准
结 果
操作前准备
1.打开电源，仪器自动完成初始化
2.将排液阀旋钮逆时钟旋转180°以打开排液阀，按“purge”，泵运行，泵指示灯亮
3.清洗完成后，按一次“func”，以改变流速，将流速设定为5ml/min,顺时针方向旋转排液阀旋钮关闭排液阀
4.按“pump”，泵运行，泵指示灯亮；约15分钟后，再次按“pump”，泵停止，泵指示灯灭
5.以上程序完成后，操作的准备工作完成

检查压力值
1.将流动相倒入贮液瓶，吸滤头放入贮液瓶中，排液管的一端放入废液瓶中
2.打开排液阀，逆时钟方向旋转排液阀旋钮180°，按“CE”返回初始屏幕，检查显示压力值是否在-0.3至0.3MPa之间
3.检查压力上下限的值是否合适，必要时更改这些值到符合要求
4.按“purge”以记录的流速开始送液，观察从排液管末端流出的流动相约10秒钟，流动相应持续流动且没有气泡，按“purge”泵停止，泵指示灯灭

单项结论：
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.3性能确认
4.3.1 泵性能确认
3) 流量准确性确认
泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3

3
流动相收集时间（min）
10
5
5
允许误差
SS
5%
3%
2%
SR
3%
2%
2%
启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算SS和SR，结果记录在下表中；
流量（ml/min）
次数
W1
W2
W2-W1
SS
SR
0.5
1

2

3

1.0
1

2

3

2.0
1

2

3

注：Ss=(-Fs)/Fs×100% 式（1）
SR=(Fmax-Fmin)/ ×100% 式（2）
式中：Fm ——Fm=(W2-W1)/(ρ•t)，流量实测值，ml/min；
W2—— 容量瓶+流动相的质量，g；W1—— 容量瓶的质量，g；
ρ—— 试验温度下流动相的密度，g/mL；t—— 收集流动相的时间，min；
—— 同一组测量的算术平均值，mL/min；FS—— 流量设定值，mL/min；
Fmax ——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin ——同一组测量中流量最小值，ml/min。

单项结论：
检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4) 压力范围
可执行标准：±0.2MPa设定值
测试方法：在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。
次数
设置压力
（Mpa）
停止压力
（Mpa）
误差
（Mpa）
1
10

2
20

3
30

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日

4.4 柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃、40℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；
设定温度
（℃）
次数
首测温度
（℃）
平均温度
（℃）
ΔTS
（℃）
TC
结 果
35℃
1

2

3

4

5

6

7

40℃
1

2

3

4

5

6

7

45℃
1

2

3

4

5

6

7

单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.5 紫外检测器
4.5.1 基线噪音和基线漂移
选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，二极管阵列检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4；
衰减倍数
测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线噪音
结 果

注：Nd=KB
式中：K：衰减倍数；B：测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度
基线漂移在1h内偏离原点的值为 （AU/h），应不超过5×10-3AU/h。
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.5.2最小检测浓度
采用依替巴肽分析色谱条件，进样量20µl；取适量的依替巴肽，用甲醇稀释制成1×10-6g/ml的溶液，连续进样6次，记录依替巴肽/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-6g/ml，结果记录在下表；
依替巴肽的称样量
稀释倍数
依替巴肽的色谱峰高
平均峰高
最小检测浓度
结 果

注：CL=
2Nd×c×V
H×20
式中：Nd：基线噪声峰—峰高；c：标准溶液浓度；H：标准溶液的色谱峰高；V：进样体积
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
4.6整机性能
在4.4.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中；
品 名

称样量

项目指标
实 验 结 果
结 果
分离度（R）≥1.5

Rsd≤2%
图谱文件名
峰面积（A）
平均数M）
Rsd值
结 果

注：M=(A1+A2+……An)/n
Rsd=
式中：M：峰面积平均数；A：峰面积；n：测量次数
单项结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
5.验证结果及分析评价
结论：

检测人： 日期： 年 月 日
复核人： 日期： 年 月 日
6.再验证要求
6.1再验证周期
6.1.1 设备大修后需再校验。
6.1.2 由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。
6.1.3 高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。
6.2 再验证内容
进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

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