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完整word)巴比妥类药物的分析
第五章 巴比妥类药物的分析

第五章 巴比妥类药物的分析
基本要求
  1、掌握本类药物的结构与理化性质.
  2、掌握典型药物苯巴比妥、司可巴比妥钠、硫喷妥钠的法定鉴别和含量测定方法(包括原理、方法和计算）。
  3、熟悉本类药物的特殊杂质检查和其他定量分析方法。
  4、了解生物样品中本类药物的测定方法。

学习要点
一、典型药物的鉴别、检查和含量测定
典型药物
化学鉴别
特殊杂质检查
含量测定
苯巴比妥
银盐反应(白色↓）、
铜盐反应(紫色或紫色↓)、
NaNO2-H2SO4反应(橙黄色
甲醛-硫酸反应（玫瑰红色环)
酸度、
溶液的澄清度、
中性或碱性物质
原料:银量法
制剂：银量法
司可巴比妥钠
银盐、铜盐反应（同上）、
烯丙基反应（使碘褪色)、
测定衍生物熔点、Na+反应
溶液的澄清度、
中性或碱性物质
原料:溴量法
胶囊：溴量法
硫喷妥钠
银盐、铜盐反应(同上）、
硫元素反应(碱性下与铅生成白色↓，加热，产生黑色PbS↓）、
测定衍生物熔点、Na+反应

紫外法

 注:
  (1）银盐反应和铜盐反应——为含丙二酰脲结构药物的反应,巴比妥类药物与硝酸银反应产生白色↓，与硫酸铜—吡啶反应，产生紫色(区别：硫喷妥钠的铜盐反应结果为绿色）。
  （2)制备衍生物测定熔点:是利用巴比妥类药物的钠盐易溶于水,而其游离酸难溶于水的性质.在钠盐中加酸使巴比妥类游离析出，过滤、干燥后测定熔点。
  （3）苯巴比妥的银量法--在碳酸钠溶液中用硝酸银滴定，以电位滴定法指示终点。硝酸银与苯巴比妥的摩尔比为1：1。
  （4)司可巴比妥钠的溴量法——司可巴比妥钠分子中含有一个双键，可与溴（或碘)发生加成反应，1个双键消耗1分子Br2（或I2），所以滴定剂与被测物的摩尔比为1:1。

二、巴比妥类药物的紫外性质
    巴比妥类药物具弱酸性，在不同碱性条件下可发生不同程度的电离,具有不同的紫外吸收特征.在酸性条件下不电离,无紫外吸收。而含硫巴比妥在酸性、碱性条件下均有紫外吸收，据此可以区别。

内容

第一节 基本结构与特征

    代表性药物：
      1、苯巴比妥 （Phenobarbital ）
      2、司可巴比妥钠 （Secobarbital sodium)
      3、硫喷妥钠(Thiopental sodium)
      4、巴比妥、异戊巴比妥、戊巴比妥（barbital，Amobarbital，pento barbital）

    一、弱酸性——与强碱成盐

    二、水解反应--—与碱液共沸→NH3↑

    三、与重金属离子反应
      与钴、铜→ 有色↓，与银、汞→白色↓

    四、紫外吸收光谱特征
      （一）、硫代巴比妥的紫外吸收

      （二）、5,5—取代巴比妥的紫外吸收特征

    五、显微结晶
     （一)、药物本身的晶形
      1、巴比妥——长方形结晶
      2、苯巴比妥——球形-〉—>花瓣状结晶

     （二)、反应产物的晶形
      1、巴比妥与铜—吡啶形成十字形紫色结晶
      2、苯巴比妥形成浅紫色不规则或菱形结晶

      其他巴比妥类与铜—吡啶不形成结晶，可区别.

  第二节 鉴别试验

    一、丙二酰脲试验：
     (一）、巴比妥类 + Na2CO3·TS+ 过量AgNO3 →白色↓
     (二)、巴比妥类 + 吡啶溶液 + Cu2+ → 紫色（↓）
     （含硫巴比妥类为绿色,可与之区别)

    二、钠盐的鉴别试验： （钠离子的焰色反应）
     (一）、在无色火焰中燃烧，呈现黄色火焰。

    三、取代基试验
     （一)、苯环取代基反应：
      1、硝化反应
      2、亚硝酸钠-硫酸反应
      3、硫酸—甲醛反应
       苯巴比妥 + KNO3+H2SO4 →黄色
       苯巴比妥 + NaNO2+H2SO4 →橙黄色
       苯巴比妥 + 甲醛+ H2SO4 →玫瑰红色
      4、硫元素反应：
      (1)、硫喷妥钠+NaOH+Pb2+ →白色↓
      (2）、加热→PbS↓（黑色）
      5、与香草醛反应：

     （二）、不饱和取代基（烯丙基）反应：
      1、司可巴比妥钠 + I2( Br2)→碘（溴)褪色
      2、或在碱性溶液中与高锰酸钾反应，使后者褪色

  第三节 特殊杂质检查

   一、苯巴比妥的特殊杂质
    (一)、酸度
    （二)、溶液的澄清度
    (三)、中性或碱性物质
    控制酸性杂质苯丙二酰脲，利用其酸性较苯巴比妥强,能使甲基橙显红色，规定一定量供试品溶液加甲基橙后不得显红色。
    利用杂质苯巴比妥酸在醇中溶解度小，观察苯巴比妥乙醇溶液的澄清度。要求溶液澄清。司可巴比妥钠也作此项检查，但溶剂为水
    控制合成副产物或分解产物.利用这类杂质不溶于氢氧化钠试液而溶于醚，而苯巴比妥溶于氢氧化钠试液的性质差别，将他们分离提取,挥干乙醚,称重残渣重量,确定是否超过限量司可巴比妥钠也有此检查）

  第四节 含量测定
   一、银量法
    (一）、原理：在碳酸钠溶液中巴比妥类与硝酸银首先生成可溶性一银盐，继续滴定,稍过量的银离子就和巴比妥类的一银盐形成难溶性二银盐沉淀,使溶液变浑浊而指示终点。

    （二)、方法的改进
     1、以甲醇替代水—丙酮为溶剂，
     2、电位法替代目视法指示终点，克服了温度变化影响和目视法的主观性倾向

    (三）、注意事项
     1、无水碳酸钠需新鲜配制，银电极使用前用硝酸浸洗,再用水洗净。

    （四)、应用：苯巴比妥、异戊巴比妥等采用该法。

   二、溴量法
    (一)、原理:司可巴比妥钠含有不饱和双键，可与溴定量发生加成反应，中国药典采用剩余溴量法测定原料和其胶囊的含量.
    (二）、方法：KBrO3 + 5KBr + HCl→3Br2（标准液1）
    (三)、巴比妥类+Br2（定量过量) →加成物
    (四）、Br2 (剩余）+KI （过量) →I2
    （五）、I2 +2Na2S2O3（标准液2)→2NaI+Na2S4O6
    (六)、同时做空白试验
    (七)、计算：
     (1)、1molBr相当于M/2司可巴比妥钠
     (2)、M=260。27
     (3）、所以 T=M样品/2 ×mol / L标准液=13。01
      （(V空白—V样品）×F×T)/（W（mg）)×100%
      F=C实际/C理论

   三、紫外分光光度法
    （一)、直接紫外分光光度法（注射用硫喷妥钠
     (1）、取相当于硫喷妥钠0。25g，用水稀释至500ml，再用0。4％氢氧化钠溶液稀释至5ug/ml.另取硫喷妥为对照品，用0.4%氢氧化钠溶液稀释至约5ug/ml.分别测定吸收度，计算含量。
     （2)、取样量中硫喷妥钠的mg数=(A样/A对)×C对×1.091×50
     (3)、1。091=硫喷妥钠分子量/硫喷妥分子量
     (4）、50=（500 ×100）/1000

    （二)、提取分离后紫外分光光度法（苯巴比妥钠）
     （1）、酸化：苯巴比妥钠加水使溶解 + HCl →析出沉淀
     (2）、提取:沉淀+ 氯仿→苯巴比妥，蒸发至近干→ 残渣
     （3)、碱化:残渣+醇+ pH10溶液→测定溶液(发生一级电离）
     （4）、测定：λ240nm处测定吸收度，以苯巴比妥为对照。

   四、差示分光光度法
    (一）、原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化,而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（ΔA值），根据ΔA与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。
    （二）、特点:简便、直观，具备一般分光光度法直接读数的优点,无需事先分离，又能消除干扰；提供一个近似理想的参比溶液.
    （三）、方法：
     (1)、取供试品一定量，做成溶液，分成2等分
     （2）、1份+酸 → 一定体积 (测定）→ A测
     (3）、另1份+碱 → 同样体积 （参比)→ A参
     (4）、A测－A参=△A样
     （5）、∵干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即△A杂=0,
     (6)、∴ △A样只与样品浓度C呈线性关系.
     (7)、另取对照品同法操作，得△A对，按标准对照法计算含量.

    (四）、巴比妥类药物的差示光谱

    1、ΔA240= A pH10 – 酸性，
    2、ΔA260=A pH13- A pH10
    3、方法：
     (1）、样品、对照-—->同样操作,⊿A样、⊿A标
     （2）、计算：（⊿A样/⊿A标)× C标 = C样
     （3）、注意:不同pH溶液中被测物的浓度必须相等
    4、作业:
     （1)、根据巴比妥类药物在不同pH条件下的光谱图，设计差示光谱的几种组合。
     2）、差示光谱的目的?应用范围？
     （3）、举例见教材：复方苯巴比妥散、血清中巴比妥类药物的测定

   五、酸碱滴定法
    (一）、醇—水混合溶剂中，用氢氧化钠溶液滴定，以麝香草酚酞为指示剂
     （增加溶解度，防止滴定过程中产生的弱酸盐水解而影响终点观察）
    （二)、在胶束水溶液中，用氢氧化钠溶液滴定，以麝香草酚酞为指示剂
     （在表面活性剂的胶束水溶液中巴比妥类药物酸性增强,使终点明显）
    (三）、非水溶液滴定：在非水溶剂“二甲基甲酰胺、甲醇、氯仿等”中，用甲醇钠—甲醇溶液等滴定(非水酸量法）
    (四）、非水碱量法—-在酸性溶剂中用高氯酸滴定剂滴定弱碱性药物。
     1、常用溶剂-—冰醋酸；
     2、滴定剂——高氯酸滴定液；
     3、指示剂——结晶紫；
    （五）、非水酸量法-—在碱性溶剂中用甲醇钠滴定剂滴定弱酸性药物。
     1、常用溶剂：乙二胺、二甲基甲酰胺；
     2、滴定剂：甲醇钠滴定液.

    （六)、非水碱量法
     1、原理：BH+·A— +HClO4→ BH+· ClO4+HA
     2、滴定剂： HClO4-冰HAc溶液
     3、非水溶剂：根据被测物的碱性强弱，常用的非水溶剂有冰醋酸、醋酐、两者混合物。
     4、温度影响:
      (1)、标准液须注明标定时温度，
      (2)、标定与测定温度不一致，须校正（温差﹤10℃）或重新标定(温差﹥10℃) .
      （3)、N测=N标/[1+0.0011（t测—t标）]
     5、指示剂终点颜色——由电位法确定

V（ml）
E(mv)
0
150
7.00
236
7。10
247
7.20；
263
7。25
278
7。30
305
7.35
380
7。40
408