4、所需能量降低， lmax移向长波长，并伴随吸收强度的增加。
（3）芳香化合物
芳香化合物具有环状共轭体系，通常具有E1带、 E2带和B带三个吸收峰。
影响紫外可见吸收光谱的因素
Ø 共轭效应：共轭体系增大，lmax红移，吸收强度增加。
Ø 立体化学效应：由于空间位阻、构象、跨环共轭等导致吸收光谱的红移或蓝移，本质是分子共轭程度受到影响所致。
Ø pH值的影响：对于酸碱性化合物，pH值影响其离解情况从而影响其紫外可见吸收光谱的产生。
Ø 溶剂的影响：溶剂的性质可能对吸收峰的位置、形状和强度有影响，因此溶剂的选择很重要，一般要求选择具有良好的化学和光化学稳定性、极性小、在样品吸收
5、光谱区无明显吸收的溶剂。
Ø 化合物溶剂化后分子的自由转动受到限制，使得自由转动引起的精细结构消失，若想获得吸收光谱的精细结构，应在气态或非极性溶剂中测定。另外，溶剂极性的增大往往会使化合物中的p®p*跃迁红移，np®*跃迁蓝移，这种现象称为溶剂效应。
三、紫外可见分光光度计
光源、单色器、吸收池、检测器和读数装置
四、定量分析依据
朗伯－比尔定律:
如果浓度c以g/L表示时，k的单位为：L·g-1·cm-1;若c以mol/L表示，吸光系数采用摩尔吸光系数ε表示,单位为：L·mol-1·cm-1，则有：
k与ε的关系：
Ø ε可以作为定性鉴定的参数,不随浓度和吸收光程的
6、改变而改变，也就是在温度和波长条件一定时，仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物质浓度无关；
Ø 同一个吸收物质在不同波长下ε是不同的，在最大吸收波长处ε最大，它表明了待测物质最大吸光能力，也反映了测定该物质所能达到的最高灵敏度。ε值愈大，方法的灵敏度愈高。
比尔定律的偏离
(1)使用非单色光的影响：比尔定律只适用于单色光，但在实际测定中无论是用滤光片或棱镜分光，所得的光源仍是含有不同波长光线的复合光带。因此，首先要求入射光纯度要高。其次，选择波长范围应在吸收曲线斜率变化小的部位。
(2)能使比尔定律产生偏离的化学因素：首先是溶液浓度的影响，当溶液浓度c>0.01mol/L时，吸收粒子
7、可能缔合影响对光的吸收，故比尔定律只使用于稀溶液。另一种影响来自化学平衡,与浓度、pH值和其他条件有关。
五、显色反应
进行光度分析时，首先要将待测组分转变成有色化合物，然后测定其吸光度。将待测组分转变成有色化合物的反应叫显色反应。与待测组分形成有色化合物的试剂称为显色剂。显色反应的选择应考虑的因素：
（1）灵敏度高：生成的有色物质的e较大的显色反应。
（2）选择性好：显色剂仅与一个组分或是少数组分反应。
（3）显色剂在测定的波长处无明显吸收：两种有色物质最大吸收波长之差称为“对比度”。要求显色剂与有色化合物的对比度在60nm以上。
（4）反应生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳
8、定
显色剂种类：
无机显色剂：例如，SCN-；MoO42-；H2O2，一般无机显色剂与金属离子生成的化合物不稳定，灵敏度和选择性也不高，应用不多。
有机显色剂：大多数有机显色剂与金属离子生成极其稳定的配合物，灵敏度和选择性都很高，被广泛的应用于吸光度分析中。
三元（多元）配合物是显色反应时加两种显色剂形成的三个组分的混合配合物。这种方法大大的提高了显色剂的稳定性、灵敏性、选择性。
六、定量分析条件的选择
1. 测量条件的选择
(1) 入射光波长的选择
一般选择lmax,因为在此波长处的摩尔吸收系数e值最大，使测定有较高的灵敏度，同时，此波长处的一个较小的范围内，吸光度变化不大，不会造成对比尔定律的偏离，使得测定有较高准确度。
若lmax不在仪器可测波长内,或干扰物质在此处有强烈的吸收，就不能选择lmax ，应尽可能选择e随波长改变而变化不大的区域内的波长。
(2)出射狭缝宽度的选择
应确保一定入射光强度时，选择小的狭缝宽度。
2. 显色条件的选择
显色剂用量、酸度、显色温度、显色时间、溶剂等
3. 参比溶液的选择原则
溶剂参比、试剂参比及试样参比
4. 干扰及消除方法（1）加入掩蔽剂（2）选择适当的显色条件（3）分离干扰离子—沉淀，离子交换，溶剂萃取等。
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
