ImageVerifierCode 换一换
格式:PPT , 页数:29 ,大小:1.32MB ,
资源ID:12560080      下载积分:10 金币
快捷注册下载
登录下载
邮箱/手机:
温馨提示:
快捷下载时,用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号,方便查询和重复下载(系统自动生成)。 如填写123,账号就是123,密码也是123。
特别说明:
请自助下载,系统不会自动发送文件的哦; 如果您已付费,想二次下载,请登录后访问:我的下载记录
支付方式: 支付宝    微信支付   
验证码:   换一换

开通VIP
 

温馨提示:由于个人手机设置不同,如果发现不能下载,请复制以下地址【https://www.zixin.com.cn/docdown/12560080.html】到电脑端继续下载(重复下载【60天内】不扣币)。

已注册用户请登录:
账号:
密码:
验证码:   换一换
  忘记密码?
三方登录: 微信登录   QQ登录  

开通VIP折扣优惠下载文档

            查看会员权益                  [ 下载后找不到文档?]

填表反馈(24小时):  下载求助     关注领币    退款申请

开具发票请登录PC端进行申请

   平台协调中心        【在线客服】        免费申请共赢上传

权利声明

1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,个别因单元格分列造成显示页码不一将协商解决,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前可先查看【教您几个在下载文档中可以更好的避免被坑】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时联系平台进行协调解决,联系【微信客服】、【QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【版权申诉】”,意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:0574-28810668;投诉电话:18658249818。

注意事项

本文(生化实验-电泳.ppt)为本站上传会员【w****g】主动上传,咨信网仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知咨信网(发送邮件至1219186828@qq.com、拔打电话4009-655-100或【 微信客服】、【 QQ客服】),核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载【60天内】不扣币。 服务填表

生化实验-电泳.ppt

1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式文本样式文本,样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生化实验2 电泳,实验,思路,蛋白质的理化性质有哪些?,蛋白质的分离方法有哪些?,本次实验利用了哪个性质?,生物化学教研室 朱欣婷,生物化学教研室 朱欣婷,生物化学教研室 朱欣婷,电场强度越大或支持物越短,电流将随之增加,产热也增

2、加,影响分离效果。,离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定,生物化学教研室 朱欣婷,I越大,电动电势越小,u越小;,生物化学教研室 朱欣婷,1球蛋白,血清蛋白依次分为清蛋白,,离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定,生物化学教研室 朱欣婷,生物化学教研室 朱欣婷,2.缓冲溶液:,pH值:(pH-pI)越大,Q越多,u越大,离子强度(I):,I越大,电动电势越小,u越小;,I越小,电动电势越大,u越大,但样品易扩散。,离子强度如果过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定,0.2之间。,生物化学教研室 朱欣婷,电场强度:电泳支持物上每厘米的电位降,也称电势梯度。,

3、3.电场强度(X),X越大,u越快。,支持物越短,X越大,u越快。,电场强度越大或支持物越短,,电流将随之增加,产热也增加,影响分离效果。,在进行高压电泳的时候必须用冷却装置,否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。,生物化学教研室 朱欣婷,4.支持介质:,目前常用的电泳支持物:,纤维薄膜(玻璃纤维薄膜,醋酸纤维薄膜),凝胶(琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶),生物化学教研室 朱欣婷,负极,正极,表面带负电荷,带正电荷的水层携带粒子向负极移动,如果样品原本是移向负极的,则泳动的速度加快;,如果样品原本是,移向正极的,则泳动的速度减慢。,电渗作用,:,电渗:,在电场作用下液体对固体支持物相对移动的

4、现象。,生物化学教研室 朱欣婷,以纸电泳为例:,(一)按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:,1滤纸及其它纤维(如玻璃纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯纤 维薄膜)电泳,2粉末电泳:如纤维素粉、淀粉电泳;,3凝胶电泳:如琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳;,4丝线电泳:尼龙丝、人造丝电泳。,三、区带电泳的分类,生物化学教研室 朱欣婷,(二)按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:,1平板式电泳:支持物水平放置;,2垂直板式电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳;,3垂直柱式电泳:聚丙烯酰胺盘状电泳,生物化学教研室 朱欣婷,(三)按pH 的连续性不同,区带电泳可分为:,1连续pH 电泳:即整个电泳过程pH

5、 保持不变,如常用的纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳等。,2非连续pH 电泳:缓冲液和电泳支持物间有不同的pH 的电泳,如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉,等电聚焦电泳等。,生物化学教研室 朱欣婷,(二)血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳,生物化学教研室 朱欣婷,【实验原理】,血清蛋白质,等电点,分子量,占总蛋白的,清蛋白,4.64,69,000,57,72,1,球蛋白,5.06,200,000,2,5,2,球蛋白,5.06,300,000,4,9,球蛋白,5.12,90,000,150,000,6.5,12,球蛋白,6.85,7.3,156,000,950,000,12,20,缓冲液,pI,pH,血清蛋白,带负电荷,在

6、电场中向正极移动,生物化学教研室 朱欣婷,血清蛋白依次分为清蛋白,,球蛋白的,1,、,2,、五个区带,请预测血清蛋白电泳区带图,清蛋白,1,2,生物化学教研室 朱欣婷,膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带。,生物化学教研室 朱欣婷,各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比。,可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中。,用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。,3.,血清蛋白电泳结果的临床意义:,生物化学教研室 朱欣婷,临床上还可用A/G比来表示清球蛋白的量的关系:,可能相关疾病,清蛋白,1,球蛋白,2,球蛋白,球蛋白,球蛋白,骨髓瘤,*,肾病综合症,*,*,肾炎,*,肝硬化,*,急性肝坏死,*,传染性肝

7、炎,*,*,急性感染初期,*,*,*,慢性炎症/感染后期,*,低,球蛋白血症,*,1准备与点样,:,取两条2.58cm的膜条,充分浸透在巴比妥缓冲液中,取出膜条,滤纸吸去多余的缓冲液,点样器下端粘上薄层血清,垂直,点样,生物化学教研室 朱欣婷,放置,膜条,平衡5,分钟,通,电,关闭,电源,2电泳,点样面向下,点样端置于阴极,膜条贴,紧滤纸,拉直膜条,电压:160v,时间:60 min,生物化学教研室 朱欣婷,通 电,完 毕,浸于染色液(氨基黑10B)中,取出,膜条,浸于漂,洗液,3染色、脱色,取出,膜条,5min,浸于漂,洗液,2min,5min,浸于漂,洗液,滤纸吸,干薄膜,5min,直至,

8、漂净,生物化学教研室 朱欣婷,取试管6支,编号16,(两人的膜条共用),试管编号,A,1,2,0,0.4mol/LNaOH,6.0ml,3.0ml,3.0ml,3.0ml,3.0ml,3.0ml,蛋白条带,清蛋白,1,球蛋白,2,球蛋白,球蛋白,球蛋白,无蛋白区,充分振荡,脱净染料,比 色,定 量,生物化学教研室 朱欣婷,1计算出各部分蛋白质占总蛋白质的百分数。,清蛋白(2A/,T)100,1,球蛋白(,1,/,T)100,2,球蛋白(,2,/,T)100,球蛋白(/T)100,球蛋白(/T)100,光密度总和T2A,1,2,2计算出清蛋白与球蛋白之比值(2A/G),G=,1,2,生物化学教研

9、室 朱欣婷,I越大,电动电势越小,u越小;,2非连续pH 电泳:缓冲液和电泳支持物间有不同的pH 的电泳,如聚丙烯酰胺凝胶盘状电脉,等电聚焦电泳等。,4mol/LNaOH,1在本实验电泳过程中,正负电极各发生什么反应?电极附近的缓冲液有什么变化?,电泳后各区带应明显分开,如分离不清或不整齐,试分析其可能存在的原因。,简单绘制血清蛋白电泳后的谱图。,血清蛋白电泳结果的临床意义:,4丝线电泳:尼龙丝、人造丝电泳。,pH值:(pH-pI)越大,Q越多,u越大,在进行高压电泳的时候必须用冷却装置,否则可引起蛋白质等样品发生热变性而无法分离。,球蛋白的1、2、五个区带,蛋白条带,层析技术的分类及各自的原

10、理。,生物化学教研室 朱欣婷,90,000150,000,(一)按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:,球蛋白,1.,点样面为不光滑面,勿用手触摸感知;,2.,点样量适中,垂直点样;,3.,点样端接电泳仪负极;,4.,膜条与滤纸需贴紧,拉直;,5.,谨防触电。,生物化学教研室 朱欣婷,1在本实验电泳过程中,正负电极各发生什么反应?电极附近的缓冲液有什么变化?,2.电泳时,点样端置于电场的正极还是负极?为什么?,3.除利用电泳法分离蛋白质以外,还有哪些分离方法?,4.,简单绘制血清蛋白电泳后的谱图。,5.电泳后各区带应明显分开,如分离不清或不整齐,试分析其可能存在的原因。,思考与练习,生物化学教研室 朱欣婷,1.蛋白质的理化性质?,2.蛋白质的盐析?,3.蛋白质的显色反应有哪些?,4.分离蛋白质的方法有哪些?,5.层析技术的分类及各自的原理。,6.透析的原理?,下次课预习内容,生物化学教研室 朱欣婷,感谢观看,

移动网页_全站_页脚广告1

关于我们      便捷服务       自信AI       AI导航        抽奖活动

©2010-2025 宁波自信网络信息技术有限公司  版权所有

客服电话:0574-28810668  投诉电话:18658249818

gongan.png浙公网安备33021202000488号   

icp.png浙ICP备2021020529号-1  |  浙B2-20240490  

关注我们 :微信公众号    抖音    微博    LOFTER 

客服