病毒感染的检查方法与防治原则演示课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 病毒感染的检查方法,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒,病毒抗原,病毒核酸,病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察,光镜检查包涵体,分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，还特别注意以下原则：,采集急性期标本,使用抗生素：,标本用,“,双抗,”,或两性霉素,B,处理,冷藏保存、快速送检,采集双份血清,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养,细胞培养（cell,culture）,鸡胚接种（egg inoculation）,动物接种（animal inoculation）,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种,鸡胚培养,细胞培养,指标,阳性,指标,阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,1.,细胞培养,根据生长方式分类：,单层细胞培养（monolayer cell culture）,悬浮细胞培养（suspended cell culture）,从细胞来源、染色体特征及传代次数分类：,原代细胞（primary cell）,二倍体细胞（diploid cell）,传代细胞系（continuous cell line）,（一）病毒的分离培养,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,1.,细胞培养,（,1,）原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎,培养基,(,原代细胞,),单层细胞,(,次代细胞,),传代培养,蛋白酶,特点：对多种病毒敏感,生长能力有限,获取成本高,可携带潜伏病毒,（,2,）二倍体细胞培养,体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。,特点：,对多种病毒敏感,不带异种蛋白(人源性),不带病毒，无致瘤潜能,可传50代左右,1.,细胞培养,（,3,）传代细胞培养,特点：,对多种病毒敏感性高,繁殖能力高，传代时间长,有致癌危险，不能用于疫苗生产,1.,细胞培养,病毒在培养细胞中增殖的指征：,致细胞病变效应（,cytopathic effect,CPE,）,红细胞吸附（,hemadsorption,）,病毒干扰作用（,viral interference,）,细胞代谢改变,（一）病毒的分离培养,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,（,1,）致细胞病变效应（CPE）,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,（,1,）致细胞病变效应（CPE）,形成包涵体,(,inclusion body,),（,1,）致细胞病变效应（CPE）,腮腺炎病毒感染细胞,（,2,）红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素,(,HA,),红细胞表面HA受体,（,3,）干扰现象（interference）,风疹病毒猴肾细胞 病毒增殖，CPE,(,),埃可病毒猴肾细胞 病毒增殖，CPE,(,),猴肾细胞,风疹病毒,埃可病毒,埃可病毒被抑制，CPE(),（,4,）细胞代谢改变,THANK YOU,SUCCESS,2025/5/16 周五,17,可编辑,2.,鸡胚培养,采用孵化,914,天的鸡胚,绒毛尿囊膜（allantocherion）,痘苗病毒、人类疱疹病毒,尿囊腔（allantoic cavity）,接种部位,流感病毒、腮腺炎病毒,羊膜腔（amniotic cavity）,流感病毒的初次分离,卵黄囊（yolk sac）,嗜神经病毒,2.,鸡胚培养,优点：,易管理，不带微生物，成本较低,缺点：,操作程序复杂,3.动物接种,应用：,尚无敏感细胞的病毒培养,动物：,兔、鼠、黑猩猩、猴等,优点：,结果易观察，可建立动物模型,缺点：,有饲养条件要求，费用高，动物,体内常带有潜伏病毒,（二）病毒的鉴定,1.,形态学鉴定：,电子显微镜,2.,血清学鉴定：,鉴定病毒种、型、亚型，,免疫标记法、血凝抑制试验等。,血凝抑制试验,正粘病毒型与亚型鉴定,病毒鸡红细胞凝集,（血凝试验）,病毒,特异性抗体,鸡红细胞,不凝集,（血凝抑制试验）,（二）病毒的鉴定,3.,分子生物学鉴定：,抗原变异病毒基因的鉴定,核酸扩增,核酸杂交,基因芯片,基因测序,1.,血凝试验：,病毒总量,（活病毒死病毒）,2.50%,组织细胞感染量（,50,tissue culture infectious dose,TCID,50,）测定,3.,空斑形成试验（,plaque formation test,）：,空斑形成单位（,plaque formation unit,，,PFU,）,（三）病毒数量与感染性测定,感染性病毒量,三、病毒感染的诊断,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查,普通光学显微镜检查：,包涵体,三、病毒感染的诊断,（二）病毒成分检测,1.,病毒蛋白抗原检测：,免疫标记技术,2.,病毒核酸检测,：,核酸扩增技术、核酸杂交技术、,基因芯片技术、基因测序,三、病毒感染的诊断,（三）病毒感染的血清学诊断,中和试验,血凝抑制试验,特异性,IgM,抗体检测,其他：早期抗原的抗体检测,第二节 病毒感染的特异性预防,生物制品：,微生物及其代谢产物、动物免疫血清、免疫细胞、细胞因子。,防治和诊断感染性疾病。,第二节 病毒感染的特异性预防,一、人工主动免疫常用生物制品,灭活疫苗（inactivated vaccine）,减毒活疫苗（,attenuated,vaccine）,重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）,亚单位疫苗（subunit vaccine）,基因工程疫苗（,genetically engineering,vaccine）,核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,第二节 病毒感染的特异性预防,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白,：血清丙种球蛋白,细胞免疫制剂：,IFN-,、,、,细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,TNF、CSF,第三节 病毒感染的治疗,（一）抗病毒化学制剂,核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（,AZT,）,非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮,蛋白酶抑制剂：沙奎那韦,其他抗病毒药物：金刚烷胺,（二）干扰素和干扰素诱生剂,（三）中草药防治病毒感染,（四）新抗生素类,（五）治疗性疫苗,（六）治疗性抗体：帕利珠,（七）基因治疗剂：,反义寡核苷酸、干扰,RNA,、核酶,THANK YOU,SUCCESS,2025/5/16 周五,33,可编辑,