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1、惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76—2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次:1/0 第 1 页 共 6 页 1.目的 规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。 2．适用范围 适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。 3. 职责 3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制,确保培养基符合相关标准的要求。 3.2 科室负责人:负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制. 4．使用前的质量控制 4。1生产企业提供的材料 培养基生产厂家随产品应提供下列文件： 培养基、独立
2、成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株;技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。 4.2验收 实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。 4.3 贮存及使用前质量确认 4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存. 4。3.2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单",使用前对容器密闭性进行复查。 4。3.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判
3、断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。 4.3.4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化？/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等.如果发生上述异常情况，则不应再使用。 5．制备好的成品培养基的质量控制 新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用. 成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单"。 5。1物理指标控制 5.1。1 测试20℃～25℃的pH值 5.1.2琼脂层厚度；色泽；透明度和(或）是否存
4、在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。 5.2微生物学指标控制 可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法(详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”. 5.2。1微生物污染的控制 从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%)平板或试管,置于37℃或按特定标准中规定的温度培养18h。 5。2。2生长特性 5。2。2.1生长率 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号:HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 2 页 共 6 页 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体
5、和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。 5。2.2。1。1定量方法 生长率PR的计算: PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。 N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）. 要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0。7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。 5.2。2。1.2 半定量方法 半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生
6、长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。 5.2。2.1.3 定性方法 定性方法采用划线法观察. 5。2.2.2选择性 将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。 5。2.2.2.1定量方法 选择因子SF: SF = DO — DS DO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度 DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求:非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。 5。2.3生理生化特性（选择性和特异性）
7、 规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。 5。3性能评价和结果解释 按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。 表1 计数用选择性培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 参考培 养基 控制方法 判定标准 特征反应 Baird- Parker [S] 生长率 37℃24—48h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 TSA 定量 PR≥0.5 黑色/灰色菌落,周围为一混浊带
8、其外有透明带 选择性 37℃48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 —— 定性 全部抑制 —— 特异性 37℃24-48h 表皮葡萄球菌ATCC12228 -— 定性 —- 黑色/灰色菌落，周围为一混浊带,其外无透明带 MYP ［S] 生长率 30℃24—48h 腊样芽胞杆菌ATCC11778 TSA 定量 PR≥0。7 具沉淀带的粉色菌落 选择性 37℃48h 大肠杆菌ATCC25922 —— 定性 全部抑制 —- 特异性 37℃48h 枯草芽胞杆菌ATCC6633 —— 定性 -— 不具沉淀带的粉色菌落
9、 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC—76-2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 3 页 共 6 页 表1计数用选择性培养基(续) 培养基 用途 培养条件 测试菌株 参考培 养基 控制方法 判定标准 特征反应 VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂） ［S］ 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0。5 带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 选择性 37℃20h 粪链球菌ATCC29212/19433 —- 定性
10、 全部抑制 —— VRBL(紫红胆汁乳糖） ［S］ 生长率 30℃20h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0.5 带有或不带沉淀带的淡紫色菌落 选择性 30℃20h 粪链球菌ATCC29212/19433 -— 定性 全部抑制 —— 特异性 30℃20h 铜绿假单胞菌ATCC27853 —— 定性 —- 无色至浅棕色菌落 CT—SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂） ［S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌O157：H7 ATCC43894/43895 TSA 定量 PR≥0.5 透明菌落，表面淡黄棕色，菌落
11、直径约1mm 选择性 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 定性 全部抑制 —— 特异性 37℃24h 大肠杆菌ATCC11775/25922 —— 定性 —— 粉色菌落 BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤） ［L] 生长率 30℃24-48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 半定量 浊度2+,导管1/3产气 产气并浑浊 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC25922/8739 选择性 粪链球菌ATCC29212/19433 定性 不生长 —- EC [L] 生长率 44℃24~48h 大肠杆菌ATCC25
12、922 -— 半定量 浊度2+，导气管1/3产气 产气并浑浊 选择性 44℃24～48h 铜绿假单胞菌ATCC27853b —— 定性 不生长 —— EC—MUG/ LS—MUG [L] 生长率 44℃24~48h 大肠杆菌ATCC25922 -— 半定量 浊度2+，导气管1/3产气 产气并浑浊，产生荧光 选择性 44℃24～48h 铜绿假单胞菌ATCC27853b —— 定性 不生长 —— 乳糖胆盐发酵培养 [L］ 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 -— 半定量 导气管1/3产气 产气并变黄色 选择性
13、 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 —— 定性 -— 不产气、仍为紫色 LST（月桂酸肉汤） ［L］ 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 -- 半定量 导气管1/3产气 —— 选择性 37℃24h 福氏志贺氏菌CMCC51572 -— 定性 —— —— 表2 计数用非选择性培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 参考培 养基 控制方法 判定标准 特征反应 PCA（平板计数琼脂) [S］ 生长率 30℃72h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA 定量 PR≥0。7 —-
14、金黄色葡萄球菌ATCC6538 枯草芽孢杆菌ATCC6633 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 4 页 共 6 页 表3 选择性增菌培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 EE ［L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 半定量 VRBG上＞10CFU 粉红至红色菌落，有或没有沉淀带 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 选择性 粪肠球菌ATCC29212 全部抑制 RVS [L]
15、 生长率 41。5℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其他选择性培养基上＞10CFU —— 肠炎沙门氏菌ATCC13076 铜绿假单胞菌ATCC27853 选择性 41。5℃24h 大肠杆菌ATCC25922 半定量 TSA上全抑制 -- 粪链球菌 ATCC29212 TSA上＜10CFU SC(亚硒酸盐胱氨酸) ［L］ 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其他选择性培养基上＞10CFU 不同培养基上菌落特征不同（见标准） +大肠杆菌ATCC25922 +铜绿假单胞菌ATCC27853
16、b 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 半定量 TSA上＜10CFU —— 粪链球菌 ATCC29212 TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液) [L] 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 半定量 XLD或其他选择性培养基上＞10CFU 不同培养基上菌落特征不同（见标准） 伤寒沙门菌CMCC50071 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 TSA上＜10CFU —— 碱性蛋白胨水 ［L] 生长率 37℃24h 霍乱弧菌CMCC16109 半定量 TCBS或其他选择性培养基上＞10CFU 不同培养基上
17、菌落特征不同（见标准） 副溶血性弧菌CMCC20001 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 TSA上＜10CFU —— 福氏志贺氏菌CMCC51572 7.5%氯化钠肉汤［L］ 生长率 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538 半定量 B-P平板或其他培养基上＞10CFU 不同培养基上菌落特征不同（见标准） 表4 非选择性增菌培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 BHI 生长率 37℃24h 金黄色葡萄球菌ATCC6538 定性 浊度1～2 —- 蛋白胨盐 [L]
18、 稀释 20~25℃45min 大肠杆菌ATCC25922 定量 +/-50%菌落数/至（+/-50%原始菌落数 —— 金黄色葡萄球菌ATCC25923 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号：HSCDC/GC-76-2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 5 页 共 6 页 表4 非选择性增菌培养基（续） 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 乳糖蛋白胨肉汤 ［L] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 —— 定性 导气管1/3产气 选择性 37℃24h
19、 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 —— 定性 —— SCDLP液体培养基 [L］ 生长率 37℃24h 铜绿假单胞菌ATCC27853 定性 浊度1～2 —- 大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538 液体沙氏培养基［L] 生长率 26℃5天 白色念珠菌CMCC98001 定性 浊度1～2 —— 真菌培养基[L］ 生长率 26℃5天 白色念珠菌CMCC98001 定性 浊度1～2 —— 表5 选择性分离培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 亚硫酸酸铋琼脂（BS）
20、[S］ 生长率 37℃48h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性 良好生长（2) 菌落呈黑色，有金属光泽 福氏志贺氏菌CMCC51572 菌落呈棕色 选择性 大肠杆菌ATCC25922/8739 全部或部分抑制（0～1） 无典型菌落 粪链球菌ATCC29212/19433 全部抑制（0） —- XLD [S］ 生长率 37℃24h 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性 良好生长（2） 菌落呈黑色 福氏志贺氏菌CMCC51573 菌落呈无色 选择性 大肠杆菌ATCC25922/8739 全部或部分抑制（0~1） 无典型菌落 粪
21、链球菌ATCC29212/19433 全部抑制（0) —- 血琼脂平板 ［S］ 生长率 37℃24～48h 金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923 定性 良好生长 β溶血，透明溶血环 粪链球菌ATCC29212 定性 良好生长 α溶血,草绿色溶血环 TCBS [S］ 生长率 37℃24~48h 霍乱弧菌CMCC16109 定性 良好生长 菌落较大，呈黄色 副溶血性弧菌CMCC20001 定性 良好生长 菌落较大，呈绿色 4号琼脂 [S] 生长率 37℃24～48h 霍乱弧菌CMCC16109 定性 良好生长 菌落较大、扁平
22、透明、湿润、中心带有黑色 非O1群霍乱弧菌CMCC17045 定性 良好生长 菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色 选择性 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/8739 定性 全部或部分抑制（0～1） -— 惠山疾控 作 业 指 导 书 编号:HSCDC/GC-76—2009 培养基质量控制规程 版本 / 修改次：1/0 第 6 页 共 6 页 表5 选择性分离培养基(续） 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 伊红美兰琼脂 ［S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922/
23、8739 定性 良好生长 菌落紫黑色带金属光泽 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性 良好生长 菌落灰白色半透明 福氏志贺氏菌CMCC51573 定性 良好生长 菌落灰白色半透明 TSI（三糖铁琼脂) ［S］ 生长率 37℃24-48h 大肠杆菌ATCC25922/8739 定性 良好生长 斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性 普通变形杆菌 CMCC49001 定性 良好生长 斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性 福氏志贺氏菌CMCC51573 定性 良好生长 底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性 鼠伤寒沙门菌ATCC14028 定性
24、 良好生长 底层变黄，斜面变红，产气,硫化氢阳性 表6 非选择性分离培养基 培养基 用途 培养条件 测试菌株 控制方法 判定标准 特征反应 营养琼脂 [S] 生长率 37℃24h 大肠杆菌ATCC25922 定性 良好生长（2） —- 鼠伤寒沙门菌ATCC14028c 小肠耶尔森氏菌ATCC23715 5．记录 培养基验收检查记录单 HSCDC/ZJ—19-29A 商品化培养基目录清单 HSCDC/ZJ—19-30A 成品培养基目录清单 HSCDC/ZJ-19
25、31A 实验室制备培养基测试结果记录单 HSCDC/ZJ-19-33A 6．参考文献 6。1 GB/T27405—2008。实验室质量控制规范 食品微生物检测[S］。 6.2 SN/T1538.1—2005.培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则［S]。 6。3 SN/T1538.2—2007.培养基制备指南 第2部分:培养基性能测实用指南［S］。 6。4纪绍梅。微生物培养基质控与图解[M］.北京:北京科学技术出版社，2006。 更改 编制 审核 批准 日期 日期 日期 日期 培养基验收检查记录单 H
26、SCDC/ZJ-19—29A 共 页 第 页 序号 名称 编号 生产厂家 批号 数量 接收日期 有效期限 验收记录 储存条件 备注 MR08001 20瓶 20091014 包装完好,标识清晰
27、 验收者: 复核者： 商品化培养基目录清单 HSCDC/ZJ-19-30A
28、 共 页 第 页 序号 名称 编号 批号 有效期限 首次开封日期 容器密封性复查 内容物感官检查 储存条件 备注 密封 不密封 正常 受潮 变色
29、 制单者： 复核者：
30、 成品培养基目录清单 HSCDC/ZJ—19-31A 共 页 第 页 序号 名称 编号 配制日期 有效期限 首次使用日期 末次使用日期 培养基质量检查 储存条件 备注 正常 脱水 变色 长菌
31、 制单者： 复核者：
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