培养基的质量控制.doc

惠山疾控
作 业 指 导 书
编号：HSCDC/GC-76—2009
培养基质量控制规程
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1.目的
规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。
2．适用范围
适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。
3. 职责
3.1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制,确保培养基符合相关标准的要求。
3.2 科室负责人:负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制.
4．使用前的质量控制
4。1生产企业提供的材料
培养基生产厂家随产品应提供下列文件：
培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株;技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。
4.2验收
实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。
4.3 贮存及使用前质量确认
4.3.1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存.
4。3.2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单",使用前对容器密闭性进行复查。
4。3.3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。
4.3.4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化？/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等.如果发生上述异常情况，则不应再使用。
5．制备好的成品培养基的质量控制
新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用.
成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单"。
5。1物理指标控制
5.1。1 测试20℃～25℃的pH值
5.1.2琼脂层厚度；色泽；透明度和(或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。
5.2微生物学指标控制
可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法(详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”.
5.2。1微生物污染的控制
从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%)平板或试管,置于37℃或按特定标准中规定的温度培养18h。
5。2。2生长特性
5。2。2.1生长率

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将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。
5。2.2。1。1定量方法
生长率PR的计算: PR = NS/NO
NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。
N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu ）.
要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0。7，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。
5.2。2。1.2 半定量方法
半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。
5.2。2.1.3 定性方法
定性方法采用划线法观察.
5。2.2.2选择性
将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。
5。2.2.2.1定量方法
选择因子SF: SF = DO — DS
DO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度
DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度
要求:非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。
5。2.3生理生化特性（选择性和特异性）
规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。
5。3性能评价和结果解释
按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。
表1 计数用选择性培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
参考培
养基
控制方法
判定标准
特征反应
Baird-
Parker
[S]
生长率
37℃24—48h
金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923
TSA
定量
PR≥0.5
黑色/灰色菌落,周围为一混浊带,其外有透明带
选择性
37℃48h
大肠杆菌ATCC25922/8739
——
定性
全部抑制
——
特异性
37℃24-48h
表皮葡萄球菌ATCC12228
-—
定性
—-
黑色/灰色菌落，周围为一混浊带,其外无透明带
MYP
［S]
生长率
30℃24—48h
腊样芽胞杆菌ATCC11778
TSA
定量
PR≥0。7
具沉淀带的粉色菌落
选择性
37℃48h
大肠杆菌ATCC25922
——
定性
全部抑制
—-
特异性
37℃48h
枯草芽胞杆菌ATCC6633
——
定性
-—
不具沉淀带的粉色菌落

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表1计数用选择性培养基(续)
培养基
用途
培养条件
测试菌株
参考培
养基
控制方法
判定标准
特征反应
VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）
［S］
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
定量
PR≥0。5
带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
选择性
37℃20h
粪链球菌ATCC29212/19433
—-
定性
全部抑制
——
VRBL(紫红胆汁乳糖）
［S］
生长率
30℃20h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
定量
PR≥0.5
带有或不带沉淀带的淡紫色菌落
选择性
30℃20h
粪链球菌ATCC29212/19433
-—
定性
全部抑制
——
特异性
30℃20h
铜绿假单胞菌ATCC27853
——
定性
—-
无色至浅棕色菌落
CT—SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）
［S]
生长率
37℃24h
大肠杆菌O157：H7
ATCC43894/43895
TSA
定量
PR≥0.5
透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm
选择性
37℃24h
金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923

定性
全部抑制
——
特异性
37℃24h
大肠杆菌ATCC11775/25922
——
定性
——
粉色菌落
BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）
［L]
生长率
30℃24-48h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
半定量
浊度2+,导管1/3产气
产气并浑浊
弗氏柠檬酸杆菌
ATCC25922/8739
选择性
粪链球菌ATCC29212/19433
定性
不生长
—-
EC
[L]
生长率
44℃24~48h
大肠杆菌ATCC25922
-—
半定量
浊度2+，导气管1/3产气
产气并浑浊
选择性
44℃24～48h
铜绿假单胞菌ATCC27853b
——
定性
不生长
——
EC—MUG/
LS—MUG
[L]
生长率
44℃24~48h
大肠杆菌ATCC25922
-—
半定量
浊度2+，导气管1/3产气
产气并浑浊，产生荧光
选择性
44℃24～48h
铜绿假单胞菌ATCC27853b
——
定性
不生长
——
乳糖胆盐发酵培养
[L］
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
-—
半定量
导气管1/3产气
产气并变黄色
选择性
37℃24h
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
——
定性
-—
不产气、仍为紫色
LST（月桂酸肉汤）
［L］
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
--
半定量
导气管1/3产气
——
选择性
37℃24h
福氏志贺氏菌CMCC51572
-—
定性
——
——
表2 计数用非选择性培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
参考培
养基
控制方法
判定标准
特征反应
PCA（平板计数琼脂)
[S］
生长率
30℃72h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA
定量
PR≥0。7
—-
金黄色葡萄球菌ATCC6538
枯草芽孢杆菌ATCC6633

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表3 选择性增菌培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
EE
［L]
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
半定量
VRBG上＞10CFU
粉红至红色菌落，有或没有沉淀带
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
选择性

粪肠球菌ATCC29212
全部抑制
RVS
[L]
生长率
41。5℃24h
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
半定量
XLD或其他选择性培养基上＞10CFU
——
肠炎沙门氏菌ATCC13076
铜绿假单胞菌ATCC27853
选择性
41。5℃24h
大肠杆菌ATCC25922
半定量
TSA上全抑制
--
粪链球菌
ATCC29212
TSA上＜10CFU
SC(亚硒酸盐胱氨酸)
［L］
生长率
37℃24h
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
半定量
XLD或其他选择性培养基上＞10CFU
不同培养基上菌落特征不同（见标准）
+大肠杆菌ATCC25922
+铜绿假单胞菌ATCC27853b
选择性
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
半定量
TSA上＜10CFU
——
粪链球菌
ATCC29212
TTB(四硫磺酸钠煌绿增菌液)
[L]
生长率
37℃24h
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
半定量
XLD或其他选择性培养基上＞10CFU
不同培养基上菌落特征不同（见标准）
伤寒沙门菌CMCC50071
选择性
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
TSA上＜10CFU
——
碱性蛋白胨水
［L]
生长率
37℃24h
霍乱弧菌CMCC16109
半定量
TCBS或其他选择性培养基上＞10CFU
不同培养基上菌落特征不同（见标准）
副溶血性弧菌CMCC20001
选择性
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
TSA上＜10CFU
——
福氏志贺氏菌CMCC51572
7.5%氯化钠肉汤［L］
生长率
37℃24h
金黄色葡萄球菌ATCC6538
半定量
B-P平板或其他培养基上＞10CFU
不同培养基上菌落特征不同（见标准）
表4 非选择性增菌培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
BHI
生长率
37℃24h
金黄色葡萄球菌ATCC6538
定性
浊度1～2
—-
蛋白胨盐
[L]
稀释
20~25℃45min
大肠杆菌ATCC25922
定量
+/-50%菌落数/至（+/-50%原始菌落数
——
金黄色葡萄球菌ATCC25923

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表4 非选择性增菌培养基（续）
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
乳糖蛋白胨肉汤
［L]
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
——
定性
导气管1/3产气
选择性
37℃24h
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
——
定性
——
SCDLP液体培养基
[L］
生长率
37℃24h
铜绿假单胞菌ATCC27853
定性
浊度1～2
—-
大肠杆菌ATCC25922
金黄色葡萄球菌ATCC6538
液体沙氏培养基［L]
生长率
26℃5天
白色念珠菌CMCC98001
定性
浊度1～2
——
真菌培养基[L］
生长率
26℃5天
白色念珠菌CMCC98001
定性
浊度1～2
——
表5 选择性分离培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
亚硫酸酸铋琼脂（BS）
[S］
生长率
37℃48h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028
定性
良好生长（2)
菌落呈黑色，有金属光泽
福氏志贺氏菌CMCC51572
菌落呈棕色
选择性
大肠杆菌ATCC25922/8739
全部或部分抑制（0～1）
无典型菌落
粪链球菌ATCC29212/19433
全部抑制（0）
—-
XLD
[S］
生长率
37℃24h

鼠伤寒沙门菌ATCC14028
定性
良好生长（2）
菌落呈黑色
福氏志贺氏菌CMCC51573
菌落呈无色
选择性
大肠杆菌ATCC25922/8739
全部或部分抑制（0~1）
无典型菌落
粪链球菌ATCC29212/19433
全部抑制（0)
—-
血琼脂平板
［S］
生长率
37℃24～48h
金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923
定性
良好生长
β溶血，透明溶血环
粪链球菌ATCC29212
定性
良好生长
α溶血,草绿色溶血环
TCBS
[S］
生长率
37℃24~48h
霍乱弧菌CMCC16109
定性
良好生长
菌落较大，呈黄色
副溶血性弧菌CMCC20001
定性
良好生长
菌落较大，呈绿色
4号琼脂
[S]
生长率
37℃24～48h
霍乱弧菌CMCC16109
定性
良好生长
菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色
非O1群霍乱弧菌CMCC17045
定性
良好生长
菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色
选择性
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
定性
全部或部分抑制（0～1）
-—

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表5 选择性分离培养基(续）
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
伊红美兰琼脂
［S]
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922/8739
定性
良好生长
菌落紫黑色带金属光泽
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
定性
良好生长
菌落灰白色半透明
福氏志贺氏菌CMCC51573
定性
良好生长
菌落灰白色半透明
TSI（三糖铁琼脂)
［S］
生长率
37℃24-48h
大肠杆菌ATCC25922/8739
定性
良好生长
斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性
普通变形杆菌
CMCC49001
定性
良好生长
斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性
福氏志贺氏菌CMCC51573
定性
良好生长
底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性
鼠伤寒沙门菌ATCC14028
定性
良好生长
底层变黄，斜面变红，产气,硫化氢阳性
表6 非选择性分离培养基
培养基
用途
培养条件
测试菌株
控制方法
判定标准
特征反应
营养琼脂
[S]
生长率
37℃24h
大肠杆菌ATCC25922
定性
良好生长（2）
—-
鼠伤寒沙门菌ATCC14028c
小肠耶尔森氏菌ATCC23715
5．记录
培养基验收检查记录单 HSCDC/ZJ—19-29A
商品化培养基目录清单 HSCDC/ZJ—19-30A
成品培养基目录清单 HSCDC/ZJ-19-31A
实验室制备培养基测试结果记录单 HSCDC/ZJ-19-33A
6．参考文献
6。1 GB/T27405—2008。实验室质量控制规范 食品微生物检测[S］。
6.2 SN/T1538.1—2005.培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则［S]。
6。3 SN/T1538.2—2007.培养基制备指南 第2部分:培养基性能测实用指南［S］。
6。4纪绍梅。微生物培养基质控与图解[M］.北京:北京科学技术出版社，2006。
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批准

日期

日期

日期

日期

培养基验收检查记录单
HSCDC/ZJ-19—29A 共 页 第 页
序号
名称
编号
生产厂家
批号
数量
接收日期
有效期限
验收记录
储存条件
备注

MR08001

20瓶
20091014

包装完好,标识清晰

验收者: 复核者：
商品化培养基目录清单
HSCDC/ZJ-19-30A 共 页 第 页
序号
名称
编号
批号
有效期限
首次开封日期
容器密封性复查
内容物感官检查
储存条件
备注
密封
不密封
正常
受潮
变色

制单者： 复核者：
成品培养基目录清单
HSCDC/ZJ—19-31A 共 页 第 页
序号
名称
编号
配制日期
有效期限
首次使用日期
末次使用日期
培养基质量检查
储存条件
备注
正常
脱水
变色
长菌

制单者： 复核者：