常见肿瘤免疫标记演示课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,常见肿瘤免疫标记的意义,江苏省肿瘤医院 病理科,张静渊,1,免疫组化的基本原理,抗原抗体反应,，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为,免疫组织化学,技术(immunohistochemistry)。,2,常用方法,EPOS（一步法）,SP法-链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法,二步EnVision（优点：敏感性大幅增强，不受内源性生物素干扰）,SABC法（三步法）,3,结果判定,每项指标都有其抗体结合的对应位点，如果定位不准确，则不能判为阳性。,结果中的“”有相当一部分为背景与肿瘤表达均呈阳性，无法区分，其原因大致有：孵育过长；抗原抗体交叉反应；冲洗不足；血清封闭不足或错误；二抗与组织非特异性结合。,标本没有按规范程序固定。（固定液、固定时间）,4,肠癌中P53的表达,5,肠癌中的MDR表达,6,肺癌中的Ki-67表达,7,胃癌中的EGFR表达,8,胃癌中的AFP表达,9,消化道癌的标记,我科常用胃癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GST-,Topo-,Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2,C-erbB-3,C-erbB-4,TS,TP.,我科常用大肠癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GST-,Ki-67,P53,MSH2,P21,TS,TP.,10,耐药相关基因的标记,P-糖蛋白（P-gp）,谷胱甘肽转移酶（GST-）,DNA拓扑异构酶（Topo-）,肿瘤产生耐药的生物学基础取决于肿瘤多药耐药基因的扩增，瘤组织生成GST-,、TOPO-和P-gp的含量升高，则耐药性增强。,影响化疗疗效的主要因素是细胞内耐药、抗肿瘤药的药代动力学/药效学、肿瘤血供、药物扩散Pgp-MDR及肿瘤细胞增殖能力等。其中MDR的关注点是mdri/Pgp、MDR、LRP、拓扑异构酶-、谷胱甘肽代谢和凋亡，或肿瘤细胞增殖活性介导细胞内多向耐药基因的扩增。,11,特别提醒,对应耐药关系：TOPO-阳性对应多柔比星、米托蒽醌、鬼臼类；P-gp阳性对应长春新碱、VP-6、蒽环类；GST-,阳性对应多种烷化剂耐药。,据某些学者统计，近一半的大肠癌对GST-,、TOPO-所介导的抗癌药物顺铂和拓扑异构酶抑制剂产生耐药倾向，并大多呈强耐药性，提示大肠癌联合化疗用药时，对顺铂和拓扑异构酶抑制剂的选择应慎重考虑。P-gp阳性表达者对P-gp相关的主要抗癌药长春新碱、阿霉素等有耐药倾向。,12,表皮生长因子受体相关标记,表皮生长因子受体（EGFR）、人类表皮生长因子受体-2（C-erbB-2）、血管内皮生长因子（VEGF）。,C-erbB-2为HER-2癌基因的表达产物，HER-2为原癌基因，广泛存在于各种组织中。通常处于非激活状态，被刺激激活后具有肿瘤转化活性，其表达越高，瘤株对化疗越不敏感，越易复发转移。,VEGF与消化道癌形成密切相关，并参与其侵袭和转移，可作为预后判断指标。,三者在消化道癌中的表达具有一致性，它们的联合检测可作为判断胃癌预后、筛选高危转移患者的有效指标,。,13,酪氨酸激酶,I,型受体家族,I,型表皮生长因子受体是广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，分享由细胞外结构域、跨膜结构域及胞浆结构域构成的分子信号传导通道。,其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、HER4四种同源受体。其受体及配体在多种实体瘤如NSCLC、BC、CC、NPC、GC等中过表达，正常组织中低表达。,据报道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌与胃肠道肿瘤中有明显表达。,14,p53,正常p53的生物功能好似“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。如果修复失败，P53蛋白则引发细胞凋亡。,如果p53基因突变，对细胞的增殖将失去控制(显性负调控)。,p53基因突变与人类50%的肿瘤有关。,15,p21,p21可以和p53共同构成细胞周期G1检查站，,减少受损,DNA,的复制，发挥抑癌作用,.,P,21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关.,当,P,21、,Cyclin,、,CDK,、,PCNA,四聚体的功能受到抑制,则使增殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变,.,16,PCNA:,Proliferating cell nuclear antigen,17,p53是G1期能否进入,S期的分子警察,复制,DNA,损伤,p53,p21,P21-cyclin-CDK,复合物,Rb-E2F,Rb-P+E2F,阻滞G1期,修复,无法修复,凋亡,诱导,（P21,CIP1,）,（,Cyclin-CDK,活性抑制）,启动增殖,18,联合表达意义,P,53、c-erbB-2、P21的表达与消化道癌的分化程度,浸润程度,转移程度及临床分期呈正相关.,多基因联合表达检测对消化道癌预后判断明显优于单基因表达检测.,据国外文献报道，分化差的大肠癌中，P53、P21蛋白的过表达常伴随着K ras、p53基因的高突变，所以该对应关系很可能参与了大肠癌的形成及演进。,19,Ki-67,增殖细胞核抗原(Ki-67)对于研究肿瘤细胞的生物化学特性、恶性程度及预后判断等具有一定的价值。Ki-67是真核细胞G1和S期合成的一种36kD的核蛋白，是DNA聚合酶辅助蛋白，直接参与细胞增殖过程中DNA的复制。在静止期的细胞内含量很少，从G1晚期开始增加，S期达到高峰，G2期和M,期呈明显下降，其表达程度能客观反映瘤细胞增殖活性。,20,AFP,AFP（甲胎蛋白）是在体液中发现的70kD的癌胚抗原，正常表达于胎肝，常态下成人组织中呈阴性。在部分生殖细胞肿瘤（尤其卵黄囊瘤）和多数肝细胞肝癌中高表达。,依据其病理组织形态学特点和癌细胞内AFP染色阳性表达，并对比3个月胚胎胃肠组织学的改变，将组织学类型分为4个亚型：肝样型（34.9），胎儿胃肠型（23.8）和肝样型伴肠胚分化混合型（38.1）以及卵黄囊瘤样型（3.2）。,结论：AFP阳性胃癌与普通型胃癌不同，是一组具有独特临床病理特征的高度恶性肿瘤。,21,MSH2,MSH2基因是错配修复基因的重要成员之一,其表达的蛋白参与DNA的错配修复反应。MSH2等错配修复基因缺陷导致错配修复蛋白的失表达及微卫星不稳定性(MSI+)进而引起基因组的不稳定,诱发肿瘤,尤其是在遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)常见有MSH2基因缺陷。,Muir-Torre 综合征、卵巢癌也与该基因密切相关。,有文献称，若错配修复蛋白2在回肠与结肠中隐窝细胞有失表达，隐窝细胞会快速更新，产生分化细胞迁移至隐窝腺腔内，参与了肿瘤的形成。,22,HNPCC的遗传因素：(1)家庭成员中有三人以上患有结直肠癌，其中两人以上为同一代；(2)至少相近的两代人均有发病；(3)其中至少有一人是在50岁以前诊断为结直肠癌。若满足上述因素中一条，一级亲属亦应进行HNPCC突变检测。携带MLH1和MSH2突变者罹患结直肠癌的一生累计风险高达80%。,若免疫组化检测出肿瘤细胞核为阴性，提示该基因失活，发生了hMLH1和hMSH2的基因的胚系突变。,23,TS,&,TP,5-FU代谢(DPD，TP，dUTPase)、DNA修复(ERCC2，XRCC1)，血管生成(COX-2，EGFR，IL-8，PLA2)以及药物解毒(GST-,)基因的mRNA水平影响着晚期消化道癌患者的预后。,TS（胸苷酸合成酶）是DNA合成中的限速酶，在DNA合成与修复中起重要作用，并与细胞分裂和增生关系密切。TS的高表达预示着肿瘤的高侵袭性。TS与ERCC1（切除修复交叉互补基因）分别为标志氟尿嘧啶(5-Fu)、奥沙利铂(L-OHP)耐药的指标。,TP（胸苷磷酸化酶）基质TP表达对肿瘤微血管密度产生显著影响,。TP表达对预测5-FU化疗疗效、判断结肠癌预后有一定的指导意义。,24,肺癌的标记,我科常用肺癌标记：VEGF-C3,EGFR,P-gp,p53,Ki-67,PE,CD24,CA125,bcl-2,Tslc1.,25,VEGF-C3,血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growthfactor,VEGF-C)是迄今发现的最重要的淋巴管生成因子,VEGF-C诱导的淋巴管生成与肿瘤淋巴结转移密切相关。因此,以VEGF-C为靶点抑制淋巴管生成已成为抗肿瘤转移的重要策略之一。,26,CA125,CA125（糖链抗原125）又称卵巢癌抗原（OCA）是由一组糖基转移酶综合作用而产生，主要存在于癌组织中。肺癌中CA125敏感性56.43%、特异性84.72%。,CA125的检测在对NSCLC的诊断、NSCLC与SCLC的鉴别诊断中具有一定价值,对肺癌的疗效观察、转移、复发监测及预后有较大的辅助诊断意义.,27,bcl-2,Bcl-2蛋白是bcl-2 原癌基因的编码产物,，,是一种定位于线粒体、内质网和连续的核周膜的,25kD膜蛋白，广泛分布。,Bcl-2蛋白家族是一个特别的家族，成员中有些促进凋亡，如Bad、Bid、Bax，有些成员阻止细胞凋亡,如Bcl-2、Bcl-x、Bcl-w。Bcl-2能够阻止细胞色素c从线粒体释放到细胞质，从而抑制了细胞凋亡。,有文献称，Bcl-2蛋白过度表达在肺癌发生中起重要作用,是肺癌的早期表现,有可能成为肺癌早期诊断的重要参考指标。,28,Tslc1,TSLC1（肿瘤阻抑基因1）是一种新的抑癌基因,其失活与消化系肿瘤的发生,浸润转移及预后有着重要的关系.,TSLC1的失活重要机制之一是基因甲基化.,TSLC1抑癌机制目前还不完全明确,认为与细胞黏附,细胞间信号传导,参与肿瘤免疫,诱导细胞凋亡和抑制细胞生长周期有关.,29,CD24,CD24是一种低分子量高度糖基化的黏蛋白样的黏附分子，通过糖基磷脂酰肌醇黏附在细胞膜上，最初被认为是一种B细胞标志物，在B细胞分化早期阶段表达。,最近国外一些研究发现，CD24在上皮细胞来源的肿瘤如非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等肿瘤中呈高表达，同时还发现CD24的表达和肿瘤的侵袭性有一定的关系，可能可以进一步提示预后。,30,PE,选择素(Selectins)是新近被发现的细胞粘附分子中的一个家族,其中主要成分之一的 P-选择素(granular membrane protein 140,Gmp 140)在肺癌组织中表达,，可能可用做肺癌转移的指标。,P选择素不仅在血管的内皮细胞上有阳性表达，在部分肿瘤细胞的细胞膜上亦可见阳性表达，提示P选择素可能在癌细胞与血管内皮细胞间存在双重作用，P选择素阳性表达的肿瘤细胞可能更利于浸润和转移。,31,