高中生物实验的染色与颜色观察(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,高中生物实验的染色与颜色观察,周口一高,zkwanghai,1,染色剂的染色与显微镜的观察,显微镜观察的是透射光而不是反射光，所以对于大部分无色半透明的生物组织细胞结构来说，需用特殊的方法制片染色处理后才能用显微镜观察清楚。而且生物材料很少是单层细胞结构的，故还需要进行切片或压片、涂片等处理操作。,如果观察经过染色剂染色的生物材料，如观察洋葱根尖分生区有丝分裂实验时要用较强的光照。而不经染色的生物材料在显微镜下观察时，光线尽可能的较暗些。如观察质壁分离与复原实验时，如果光线太强，不容易观察到液泡。,2,碱性染料与染色体的观察,生物实验中所用的染料，按其来源可分为天然染料和人工染料两大类。人工染料根据其主要化学成分的性质，又分成碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，其碱性、酸性和中性是由染料中有色部分的性质所决定的。若染料的有色部分为阴离子，即为“酸性”染料；若染料的有色部分为阳离子，则称为“碱性”染料；若染料的阴、阳离子均有颜色，则称为“中性”染料。染色体,(,质,),是细胞核内容易被碱性染料染成深色的物质。,3,在观察植物细胞有丝分裂实验中，常用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。二者染色时间都不可过长。,龙胆紫溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。龙胆紫溶液的配制是将龙胆紫溶解在质量分数为,2,的醋酸溶液中配制而成。染色中使用的龙胆紫溶液略呈酸性，,l,醋酸洋红本身也是酸性，同样具有碱性的助色基团。配方中的醋酸是染料的溶剂，在染色时增加了细胞的通透性，利于染液的离子进入细胞而使细胞核内的染色体着色。,此外，改良苯酚品红溶液也可使染色体着色,。,应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂等。,4,DNA,和,RNA,的染色鉴定,甲基绿和吡罗红是混合染色剂。甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。稍溶于乙醇，不溶于戊醇。吡咯在盐酸作用下聚合成为吡罗红，可与,RNA,结合呈现红色。,这两种染色剂对,DNA,和,RNA,的亲和力不同，甲基绿使,DNA,呈现绿色，吡罗红使,RNA,呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以观察到,DNA,和,RNA,在细胞中的分布情况。,注意：盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中的,DNA,与蛋白质分离，有利于,DNA,与染色剂结合。,2,种染色剂要混合使用，而且要现配现用。,5,活体染色剂健那绿和亚甲基蓝,健那绿染液是专一性的线粒体的活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态,(,即有色状态,),呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。,线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。,6,亚甲基蓝是细胞的活体染色剂，,0.01,亚甲基蓝对细胞无毒害，亚甲基蓝是一种有机物小分子，在水中离解成亚甲基蓝的阳离子,(,呈蓝色,),和氯离子,(,无色,),，亚甲基蓝阳离子可通过主动运输进入到细菌体内，在酶的作用下被细菌分解成无色的小分子，使蓝色褪去。褪色程度越大，说明细菌越多，水污染越严重，因此可用于水污染程度指示剂。此外，亚甲基蓝是氧化还原指示剂，在有氧的环境中蓝色褪去，可用作氧气检测剂。,7,台盼蓝使死细胞染成蓝色,原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内,;,死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。,应用：区分活细胞和死细胞,;,检测细胞膜的完整性。,另有用红墨水鉴定种子发芽率实验同理。,8,9,苏丹红与脂肪鉴定,苏丹,、苏丹,是人工合成的苏丹红系列染料。常作为一种工业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光。近年有不法分子用于食品添加剂，对人体有害。,苏丹红为亲脂性化合物。在脂肪类物质中的溶解度大于在其他溶剂,(,如酒精、丙酮,),中的溶解度时，染料颗粒便大量进入脂肪类物质的结构内，在脂滴中溶解积累，并吸附在脂肪颗粒结构上，苏丹,遇脂肪显橘黄色，苏丹,遇脂肪显红色。苏丹,染液与脂肪的亲和力比较强，所以染色时间应比苏丹,短。,三（山）橘子丹四（是）红,10,斐林试剂检测可溶性还原糖,原理：还原糖,+,斐林试剂（加热后）砖红色沉淀,注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。,应用：检验和检测某糖是否为还原糖,;,不同生物组织中含糖量高低的测定,;,在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。,11,菲林试剂与双缩尿试剂的比较,12,13,14,15,16,DNA,的染色与鉴定,染色原理：,DNA+,甲基绿绿色,应用：可以显示,DNA,在细胞中的分布。,鉴定原理：,DNA+,二苯胺蓝色,应用：用于,DNA,粗提取实验的鉴定试剂。,17,一些化学物质的检验方法,18,19,20,21,吲哚酚试剂与维生素,C,溶液呈褪色反应,原理：吲哚酚即,2,，,6-,二氯酚靛酚钠，其水溶液为蓝紫色，维生素,C,具有还原性，能将其褪色。,应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素,C,。,22,亚硝酸盐的检测出现玫瑰红,原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与,N-1-,萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。,应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。,23,脲酶的检测,原理：细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，使,PH,升高，从而使酚红指示剂变红。,应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素。,24,刚果红检测纤维素分解菌,原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红,-,纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。,25,伊红美蓝检测大肠杆菌,原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的代谢产物,(,有机酸,),与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色。,应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量。,26,例题分析,例,1,只有在保持细胞活性的条件下，才能显示细胞中某物质或结构的实验是（）,A.,苏丹,染色剂观察花生种子子叶细胞中的脂肪,B.,龙胆紫染色观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂,C.,健那绿（詹纳斯绿,B,）染色观察动物细胞的线粒体,D.,甲基绿、派洛宁（吡罗红）染色观察动物细胞中的,DNA,和,RNA,C,27,解析：本题考查有关染色剂的使用。苏丹,染色剂用于观察花生子叶细胞中的脂肪颗粒。观察洋葱根尖分生区细胞的实验在解离时细胞已死亡，甲基绿、吡罗红用于观察,DNA,和,RNA,健那绿染液是专一性的线粒体的活细胞染料，其染色原理是：线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态,(,即有色状态,),呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。所以只有在保持细胞活性的条件下，才能显示细胞中线粒体结构。答案为,C,。,28,例,2,下表是根据实验目的，所选用的试剂与预期的实验结果正确的是,实验目的,试剂,预期的实验结果,A,观察,DNA,和,RNA,在细胞中的分布,斐林试剂 吡罗红,斐林试剂将,DNA,染成绿色，吡罗红将,RNA,染成红色,B,检测植物组织中的脂肪,双缩脲试剂,脂肪颗粒被染成紫红色,C,检测植物组织中的葡萄糖,甲基绿,葡萄糖与甲基绿作用，生成绿色沉淀,D,观察根尖分生组织细胞的有丝分裂,醋酸洋红,染色体被染成紫红色,D,29,解析,：本题主要考查生物教材中不同实验的染色或某些颜色变化。植物脂肪的鉴定用苏丹,（或苏丹,）试剂呈橘黄色（或红色）；观察,DNA,和,RNA,在细胞中的分布应该选用甲基绿和吡罗红染色剂，甲基绿将,DNA,染成绿色，吡罗红将,RNA,染成红色；葡萄糖用斐林试剂鉴定呈现砖红色沉淀。答案为,D,30,例,3,使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学对有关实验做了如下归纳：,实验,观察对象,染色剂,实验结果,花生子叶细胞的脂肪颗粒,苏丹,脂肪颗粒被染成橘黄色,人口腔上皮细胞中的,DNA,和,RNA,分布,吡罗红甲基绿,细胞内染成绿色的面积显著大于染成红色的面积,人口腔上皮细胞中的线粒体,健那绿,线粒体呈现蓝绿色,洋葱根尖分生组织细胞的有丝分裂,龙胆紫,间期细胞不着色，分裂期细胞染色体着色,31,（,1,）上述实验结果的归纳，正确的有,_,（实验序号）。,（,2,）实验和实验在染色之前，都使用了一定浓度的盐酸处理。其中，实验用盐酸可改变,_,通透性，加速染色剂进入细胞；实验用盐酸与酒精混合，对材料进行解离。在两个实验操作中，都要注意盐酸浓度，处理材料时的温度和,_,。,（,3,）健那绿使线粒体着色与线粒体内膜的酶系统有关。线粒体内膜上的酶主要催化有氧呼吸的第,_,阶反应，该反应变化是,_,_,_,。,细胞膜,时间,三,H,与氧结合形成水，同时释放大量的能量,32,解析：,使用甲基绿和吡罗红进行染色体色时，甲基绿使,DNA,呈现绿色，吡罗红使,RNA,呈现红色。,DNA,主要存在于细胞核，而,RNA,存在于细胞质中，因此应该是呈现红色的面积较大。使用龙胆紫对洋葱根尖分生区细胞进行染色时，染色体被染色，在间期细胞核被染成深色，在分裂期可看到染色体。不正确。,在高中生物实验中有多处用到盐酸，观察,DNA,和,RNA,的实验中盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中的,DNA,与蛋白质分离，有利于,DNA,与染色剂结合。在根尖分生组织细胞的有丝分裂实验中，盐酸和酒精混合液起解离作用。解离时间过短根尖分生区的细胞不易分散开，解离时间过长细胞太酥软不易取出。在线粒体在内膜上进行有氧呼吸的第三阶段，前两阶段产生的,H,在第三阶段与氧气结合生成水同时释放大量的能量。,33,