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磺丁基β-环糊精研究综述
一、 产品基本信息
1、 历史背景: SBE-β-CD( 商品名Captisol) 是美国20世纪90年代由美国Cydex公司开发成功的阴离子、 高水溶性的β-CD衍生物, 能很好地与药物分子包合形成非共价复合物, 从而提高药物的稳定性、 水溶性、 安全性, 降低肾毒性、 缓和药物溶血性, 控制药物释放速率, 掩盖不良气味等。与β-CD相比, 其具有更好的水溶性, 且溶血作用小、 肾毒性低, 是一种应用前景非常广阔的新型药用辅料。
2、 结构特点: 磺丁基-β-环糊精SBE-β-CD是β-环糊精与1, 4-丁烷磺内酯发生取代的产物, 取代反应可发生在β-CD葡萄糖单元2, 3, 6碳羟基位置上, 由于β-CD是由7个吡喃葡萄糖经过α-( 1、 4) 糖苷键连接而成, 有21个可能发生取代反应的位点, 理论上能够到的取代度为21的β-环糊精衍生物( 7个伯羟基, 6-OH, 14个仲羟基2, 3-OH) , 但由于立体位阻既反应条件的限制, 取代度一般不超过10%, 因此经过该反应所得到的产物是非常复杂的混合物。
SBE-β-CD相对分子量和取代度关系为: MW=1135.01+CDs*157.09,其中CDs为取代度。常见SBE-β-CD取代度及分子量如下:
代号
SBE4-β-CD
SBE7-β-CD

取代度
4
7

分子量
1704
2241
1347
CAS.NO.
25167-62-8
194615-04-8
182410-00-0
3、 产品基本信息
通用名
磺丁基醚-β-环糊精
CDE
Sulfobutylether-β-Cyclodextrin
中文同义词:
磺丁基-β-环糊精
SBE-B-CD环糊精,
磺丁基醚-β-环糊精,
磺丁基醚倍她环糊精,
硫代丁基醚-β-环糊精钠,
硫代丁基醚倍她环糊精钠,
廿二碳六烯酸
磺丁基-β-环糊精钠盐
USP药典
英文名称
Betadex Sulfobutyl Ether Sodium
英文同义词:
Docosahexaenoic Acids, Docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid
CAS号:
25167-62-8, 182410-00-0(钠盐) ,194615-04-8
分子式
C42H70-nO35·( C4H8SO3Na) n
分子量
2-O-磺丁基
-β-环糊精
6-O-磺丁基
-β-环糊精
2,3,6-三
-O-磺丁基
-β-环糊精
n=4
n=6.5
n=7
C44H79O33S
C44H79O33S
C56H97O33S3

1217
1217
1393
1704
2163
2241
结构式1

结构式2

功能与应用
作为赋形剂, 主要用于含氮类药物中;
对于含氮类药物具有特殊的亲和力和包合性。
给药途径
注射药、 口服药、 鼻部用药、 眼部用药, 对于含氮类药物具有特殊的亲和力和包合性。
配伍禁忌
水溶液中, 环糊精的存在可能导致有些抗菌防腐剂的活性降低。
常见量
及最用量
最大用量为66.67kg/d。
放射性和口服、 静脉注射的最大维持剂量为320mg/kg/d
二、 理化性质
本品为白色或类白色无固定型粉末, 无臭, 微甜。
100ml水中溶解度大于50, 30%水溶液PH值为5.4~6.8。其它溶剂中溶解度信息如下:
溶剂
SBE-β-CD
加入量( g)
溶剂体积
( ml)
溶解结果
结果判定
水
0.1
0.1
D
Very soluble
pH6.8的磷酸缓冲液
0.1
0.1
D
Very soluble
pH7.4的磷酸缓冲液
0.1
0.1
D
Very soluble
0.1mol/L HCl
0.1
0.1
D
Very soluble
0.1mol/L NaOH
0.1
0.1
D
Very soluble
甲醇
0.01
10
N
Very lightly
99.9
D
soluble
乙腈
0.01
100
N
Scarcely soluble
丙酮
0.01
100
N
Scarcely soluble
三、 制备工艺
( 一) 工艺路线1
1、 工艺原理

2、 工艺说明: 以β-环糊精和1,4-磺丁内酯为原料, 经过向碱性水溶液中引入适量有机溶剂, 增加了1,4-磺丁内酯的溶解度, 提高了磺丁基醚-β-环糊精的合成收率;所得产品溶液经过超声透析, 活性炭脱色, 冷冻干燥等操作得到磺丁基醚-β-环糊精粉末产品。
( 二) 工艺路线2-磺丁内酯的制备
1、 工艺原理

2、 工艺说明
将76mL干燥处理的四氢呋喃(THF)置于250mL烧瓶中, 加入50mgZnCl2,搅拌均匀后, 将65g重蒸处理的乙酰氯慢慢加入,加热回流反应1.5h后, 减压蒸馏(5.3~6.0 kPa), 收取沸点98~112℃的馏分, 得到乙酸δ-氯丁酯103.6g; (2量取60mL(65g,ρ=1.0805g/cm3)乙酸δ-氯丁酯置于500mL的三颈瓶中, 加入300mLH2O, 再加入100g的Na2SO3, 搅拌回流10 h, 然后将大部分的H2O减压蒸除,剩余部分加入270mL甲醇, 搅拌回流, 并通入过量的HCl气体, 反应持续8 h后, 使反应液冷却至室温,经过滤浓缩后减压蒸馏(2.7~3.3kPa), 收集152~165℃的馏分, 得到43g暗红色产物磺丁内酯, 产率73%。
( 三) 工艺路线3-多取代磺丁基-β-环糊精(SBE(4)-β-CD)的合成
称取5gβ-CD(4.4mmol)置于50mL烧瓶中, 加入10mL200g/LNaOH溶液, 搅拌加热至溶解, 量取2.3mL(3.1g, ρ=1.331g/cm3, 22.5mmol)磺丁内酯, 慢慢加到反应液中, 同时激烈搅拌,数小时后, 反应物成均相, 停止反应, 冷却至室温, 加入20 mL H2O稀释, 用HCl中和, 除水, 真空干燥, 得微黄色物质, 加少量水溶解, 过葡聚糖凝胶柱(G-25)除盐纯化, 得到4.3g微黄色产物。比旋度[α]D20=+325(2g/L水溶液)。元素分析:实测值wC32.80%, wH8.68%,wS5.77%, wC/wS=5.68, 计算值(取代度为3.8), wC/wS=5.64。
( 四) 工艺路线4--单取代磺丁基-β-环糊精(SBE(1)-β-CD)的合成
合成步骤同上, 10gβ-CD(8.8mmol), 25mL250g/LNaOH溶液加热搅拌至溶解, 慢慢加入1.8mL(2.4g, ρ=1.331g/cm3, 17.6mmol)磺丁内酯, 同时激烈搅拌, 数小时后,反应物呈均相, 停止反应, 冷却至室温, 加20mLH2O稀释, 用HCl中和, 过滤除去未反应的β-CD, 滤液浓缩, 过葡聚糖凝胶柱(G-25)除盐纯化, 得0.9g微黄色产物。[α]D20=+580(2g/L水溶液)。元素分析:实测值wC36.71%, wH6.22%, wS2.77%, wC/wS=13.25, 计算值(取代度为1.3)wC/wS=13.62
四、 质量研究及质量标准
(一)质量控制方法研究
第一部分SBE-7-β-CD单一取代组分的分离和制备
目的: 分离、 纯化和制备SB-7-β-CD单一取代组分, 确证其取代度。
方法: 采用DEAE SephadexA-25葡聚糖凝胶为填料, 玻璃砂芯色谱柱( 29cm×4cm) 为填装柱, 自制分离柱, 经过硫酸钠浓度梯度( 0~1.4mol/L) 洗脱对SBE-7-β-CD进行分离, 得到单一取代组分。采用SephadexG-25葡聚糖凝胶为填料, 玻璃砂芯色谱柱( 40cm×18mm) 为填装柱, 自制脱盐柱, 经过去离子水的洗脱将各单一取代组分脱盐纯化。分别采用核磁共振波谱法和质谱法对得到的各单一取代组分进行取代度的测定。
结果: 共得到6种SBE_7-β-CD单一取代组分, 其取代度分别为3、 4、 5、 6、 7、 8。核磁共振波谱法和质谱法取代度检测结果一致。
结论: 本实验成功分离、 纯化和制备了6种SBE-7-β-CD单一取代组分, 为SBE_7-β-CD的组分分析和平均取代度的测定奠定了物质基础。
第二部分SBE7-β-CD的高效毛细管电泳-间接紫外法组分分析和平均取代度测定
目的: 建立SBE-7-β-CD的组分分析和平均取代度测定方法。
方法: 采用高效毛细管电泳-间接紫外检测分析方法。未涂层熔融石英毛细管柱( 60.2cm×50μm×50cm) ; 运行缓冲液30mmol/L苯甲酸-Tris缓冲液( pH7.5) ; 温度25℃; 压力进样6s( 0.5psi) ; 分离电压30kV; 检测波长214nm, 间接检测模式。
平均取代度的计算:

经过比较校正峰面积百分比对各单取代组分进行组分分析。采用所建立的方法对11批供试品进行了测定, 并与美国药典论坛( PharmacopoeiaForum, PF) 规定的标准进行比较。
结果: SBE-7-β-CD中各组分的分离度符合要求, 峰形和基线良好; 该方法精密度和重复性良好, 供试品溶液在8h内基本稳定; SB-7-β-CD中检测到取代度分别为2~11的10种单取代组分, 11批SBE-7-β-CD供试品的平均取代度为6.7~6.9, 符合PF中的规定, 但其组分分析结果与PF的标准规定有一定的差异。
结论: 该方法准确、 快速、 分析成本低, 能够评价不同批次供试品的差异, 为
SBE-7-β-CD合成工艺的改进提供了帮助。
第三部分 毛细管气相色谱法测定SBE-7-β-CD中杂质1,4-丁烷磺内酯
目的: 建立SBE-7-β-CD中的杂质1,4-BS的测定方法。
方法: 采用气相色谱法。色谱柱: DB1701( 30m×0.32mm×0.25μm, Agilent Technologies) ; 氢火焰离子化检测器; 载气为氮气( 纯度99.999%) , 燃气为氢气, 助燃气为空气; 载气流速30ml/min; 进样口温度为200℃; 柱温为程序升温: 初始温度100℃, 以10℃/min的升温速率升到200℃, 恒温0min, 再以30℃/min的升温速率升到260℃, 恒温3min; 检测器温度为270℃; 柱前压为9.9psi; 分流比为10:1; 进样1μl。采用二乙砜作为内标。供试品处理: 取SBE_7-β-CD供试品约0.2g, 精密称定, 置10ml离心管中, 精密加入水1ml, 涡旋溶解, 再精密加入二氯甲烷1ml, 涡旋1min, 静置分层, 取有机相, 进样分析, 以标准曲线法计算含量。
结果: 二乙砜与1,4-BS的保留时间分别为6.131min和8.615min, 分离度远大于1.5; 1,4-BS的检测限为0.1126ng, 定量限为0.2599ng; 1,4-BS在2.984μg/ml~8.952μg/ml范围内线性关系良好( r=0.9989) ; 仪器精密度( n=9) 的RSD为4.7%; 高、 中、 低三种浓度的加样回收率分别为101.5%、 99.3%、 100.3%, 精密度分别为1.6%、 1.2%、 1.2%; 1,4-BS高、 中、 低三种浓度的平均萃取率分别为68.7%、 68.4%、 70.0%, RSD分别为15.2%、 23.5%、 17.4%; 二乙砜高、 中、 低三种浓度的平均萃取率分别为56.1%、 57.7%、 52.8%, RSD分别为18.8%、 24.8%、 13.9%。
结论: 本实验所建立的方法简单、 快速、 准确, 灵敏度可满足检测要求, 避免了PF规定的标准加入法的繁琐计算, 可作为SBE-7-β-CD中的杂质1,4-BS的有效检测方法。
第四部分 高效液相离子对色谱-液质联用同时测定SBE-7-β-CD中杂质4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠
目的: 建立SBE-7-β-CD中的杂质4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的测定方法。
方法: 采用高效液相离子对色谱-液质联用法。
色谱柱: ODS-SPC18(4.6×250mm, 5μm, GL Sciences Inc. Inertsil), 柱温为30℃;
流动相: 甲醇-10mmol/L正戊胺水溶液( pH5.45) ( 30:70) ; 流速1.0ml/min, 进样量10μl。离子源: 电喷雾离子( ESI) 源; 检测方式: 多反应监测( MRM) 模式; 负离子监测模式。4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的监测离子对分别为m/z153.0/79.8和m/z289.0/152.9。
结果: 4-羟基丁磺酸钠与二磺烷基化醚钠的保留时间分别为3.41min和4.24min, 能够完全分离; 4-羟基丁磺酸钠的检测限为0.005294ng, 定量限为0.01018ng, 定量限的回收率在101.9%~108.8%之间, RSD为3.4%; 二磺烷基化醚钠的检测限为0.02054ng, 定量限为0.03950ng, 定量限的回收率在97.3%~107.8%之间, RSD为4.0%; 4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠分别在1.018ng/ml~3.583ng/ml和3.950ng/ml~13.90ng/ml范围内线性关系良好, r分别为0.9997和0.9996; 方法精密度( n=6) 的RSD不大于3.8%; 加样回收率( n=6) 为95.4%~96.2%, RSD不大于4.2%; 仪器精密度( n=6) 的RSD不大于3.5%。
结论: 该方法专属性强、 灵敏度高, 是一种新的4-羟基丁磺酸钠和二磺烷基化醚钠的检测方法, 同时也为其它烷基磺酸钠盐化合物的分析提供了参考。
第五部分 高效液相凝胶色谱-示差折光检测法测定SBE-7-β-CD的含量
目的: 建立SBE-7-β-CD的含量测定方法。
方法: 采用高效液相色谱法。Phenomenex PolySep-GFC-P3000凝胶柱, 柱温35℃; 示差折光检测器, 检测温度35℃; 流动相: 乙腈-0.1mol/L硝酸钾水溶液( 35:65) , 流速1.0ml/min; 进样量10μl。
结果: SBE_7-β-CD的保留时间为6.8min, 主峰与相邻杂质峰的分离度均不小于1.94; 方法的检测限为0.32μg, 定量限为0.48μg; SBE-7-β-CD在0.4985mg/ml~1.495mg/ml范围内线性关系良好( r=0.9998) ; 方法精密度( n=6) 的RSD为
1.4%; 平均回收率( n=6) 的平均值为98.0%, RSD为1.3%; 6批供试品的含量均在95.8%~99.3%之间。
结论: 该方法准确度和重复性良好, 适合SBE-7-β-CD的含量测定, 为SBE_7-β-CD质量标准的建立奠定了基础。
( 二) 离子色谱法测定磺丁基醚-β-环糊精中4-羟基丁磺酸
目的:建立磺丁基醚-β-环糊精中4-羟基丁磺酸的离子色谱检测方法。
方法:采用IonPac AS23阴离子型交换柱(250mm×4mm)为分析柱, IonPac AG23(50mm×4mm)为保护柱, 7mmol.L-1NaHCO3水溶液为淋洗液, 流速为1.0 mL.min-1,以电导检测器检测。
结果:在建立的色谱条件下, 磺丁基醚-β-环糊精样品中4-羟基丁磺酸与其它杂质离子实现基线分离, 4-羟基丁磺酸在2～20mg.L-1范围内线性良好(r=0.9998),平均回收率为100.2%(RSD=1.3%,n=9), 检测限与定量限分别为2和5ng。
结论:该方法操作简便,结果准确、 可靠, 适用于磺丁基醚-β-环糊精中4-羟基丁磺酸的限量检查。
(三) 离子色谱法测定磺丁基倍她环糊精中４－羟基丁烷磺酸钠
采用离子色谱法, 以阴离子分析柱为分离手段, 采用电导检测器, 洗脱液为碳酸钠－碳酸氢钠系统或者碳酸钠( 钾) －氢氧化钠( 钾) 系统, 以此来解决磺丁基倍她环糊精中４－羟基丁烷磺酸( 钠) 的限度检测问题。步骤⑴配制适当浓度的洗脱液, 洗脱液是碳酸钠－碳酸氢钠系统或者碳酸钠( 钾) －氢氧化钠( 钾) 系统; ⑵配制适当浓度的磺丁基倍她环糊精样品溶液和４－羟基丁烷磺酸( 钠) 对照品溶液; ⑶离子色谱采用阴离子色谱柱、 电导检测器, 样品溶液和对照品溶液分别进样检测, 样品溶液中４－羟基丁烷磺酸( 钠) 的峰面积低于对照品峰面积为样品合格。本检测方法灵敏, 样品用量少、 重现性高、 结果可靠, 可对磺丁基倍她环糊精进行质量控制和检验, 从而提高产品的品质。
( 四) 气相色谱法检测磺丁基倍她环糊精中1,4-丁烷基磺酸内酯
方法:⑴.样品的前处理-1, 将磺丁基倍她环糊精样品用水溶解, 配制成样品的水溶液; ⑵.样品的前处理-2, 采用有机溶剂对样品水溶液进行液液萃取, 合并有机相萃取液, 浓缩到适当体积, 得到待测样品溶液; ⑶.对照品溶液的配制, 将1, 4-丁烷基磺酸内酯对照品用有机溶剂溶解, 配制成对照品溶液, 所用有机溶剂与步骤⑵的有机溶剂相同; ⑷.分别将待测样品溶液和对照品溶液注入气相色谱仪, 根据结果, 计算得样品中1, 4-丁烷基磺酸内酯的含量。本检测方法灵敏、 重现性高、 结果可靠, 可对磺丁基倍她环糊精中的1, 4-丁烷基磺酸内酯进行检验和质量控制, 从而保证产品的质量。
( 五) 高效液相色谱法测定磺丁基-β-环糊精中的β-环糊精残留含量
方法:采用Waters XTerraMs-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱; 流动相:甲醇-水(8∶92); 检测器:示差折光率检测器; 流速:0.8 mL·min-1; 柱温:25℃。
结果:在所选定的色谱条件下,磺丁基-β-环糊精与β-环糊精能分离完全; β-环糊精在0.1～1.6 mg·mL-1内, 峰面积与浓度线性关系良好, r=0.9999; 最低检测限为2μg。
结论:方法简便, 准确, 专属性强, 可用于磺丁基-β-环糊精中的β-环糊精检测及含量测定质量控制。
( 六) 质量指标
序号
检验项目
方法
限度
1
外 观

白色粉末,无嗅,微甜
2
鉴别

A
IR
符合规定

B
HPLC
符合规定

C
取代度
符合规定

D
钠盐
符合规定
3
检查

3-1
PH

4.0~6.8
3-2
β-环糊精
离子色谱法或HPLC
≤0.1%
3-3
1,4-丁烷基磺酸内酯
GC毛细管气相色谱法
≤0.5ppm
3-4
氯化钠
离子色谱法
≤0.2%
４－羟基丁烷磺酸钠
离子色谱法
≤0.09%
二磺烷基化醚钠
离子色谱法
≤0.05%
3-5
溶液澄清度

符合规定
3-6
取代度
毛细管电泳法
高效毛细管电泳
-间接紫外法
6.2~6.9
3-7
干燥失重

≤10.0%
3-8
灼烧残渣

≤20%
3-9
重金属

≤5ppm
3-10
砷盐

≤4ppm
3-11
氯化物

≤0.02%
3-12
细菌总数( 个/g)

≤1000
霉菌总数( 个/g)

≤100
致病菌

不得检出
4
含量
高效液相凝胶色谱
-示差折光检测法
95.0~105%
高效液相离子对色谱
-液质联用
高效毛细管电泳
-间接紫外法
( 七) 美国药典USP35分析方法
Betadex Sulfobutyl Ether Sodium
磺丁基醚-β-环糊精钠

C42H70-nO35( C4H8SO3Na) n 分子量2163, 当n=6.5
磺丁基醚β环糊精钠; 磺丁基醚β环糊精硫酸钠[182410-00-0]。
[定义]
磺丁基醚β环糊精钠是由β环糊精和1,4-丁烷磺内酯在碱性条件下制备而成。
β环糊精的取代度应不小于6.2和不高于6.9。它包含磺丁基醚-β-环糊精钠C42H70-nO35·( C4H8SO3Na) n按无水物计算应不小于95.0％和不高于105.0％。
[鉴别]
A.红外吸收<197K>
B在含量测定条件下, 样品溶液的主峰的保留时间应与标准溶液一致。
C.它满足了测试平均取代度的要求。
D.鉴别试验, 钠<191>
[含量测定]
•程序
流动相: 乙腈和0.1M硝酸钾溶液( 1: 4)
标准溶液: 10mg/ml的USP磺丁基醚-β-环糊精钠RS
样品溶液: 10mg/ml的磺丁基醚-β-环糊精钠
色谱系统
( 见色谱<621>, 系统适用性。)
模式: LC
检测器: 折射率
检测器温度: 35±2°
列: 7.8mm×30cm的分析柱;填料L37。 [注-冲洗柱, 用乙腈和水的溶液( 1: 9) 在完成运行的系列]
流速: 1.0ml/min
进样量: 20μl
系统适用性
示例: 适用性要求标准的解决方案
相对标准偏差: 不高于2.0％
分析
样本: 标准溶液和样品溶液计算磺丁基醚-β-环糊精钠的比例, [C42H70-nO35·( C4H8SO3Na) n]的百分比部分磺丁基醚-β-环糊精钠采取:
结果=( RU/ RS) ×( CS/ CU) ×100
RU=磺丁基醚-β-环糊精钠的样品溶液峰值响应
RS =标准溶液的磺丁基醚-β-环糊精钠峰值响应
CS=USP对照品标准溶液中磺丁基醚-β-环糊精钠浓度RS( mg/ml)
CU=样品溶液中磺丁基醚-β-环糊精钠浓度( mg/ml)
验收标准: 基于无水95.0％-105.0％
[杂质检查]
----重金属: 方法II<231>: 不高于5 PPM
---β-环糊精( BETADEX)
溶液A: 25 mMol的氢氧化钠
溶液B: 250mMol的氢氧化钠和1M硝酸钾
流动相: 见表1。
时间
A(%)
B(%)
0
100
0
4
100
0
5
0
100
10
0
100
11
100
0
20
100
0
标准溶液: USP β-环糊精的2μg/mlRS
样品溶液: 磺丁基醚-β-环糊精钠2mg/ml
色谱系统
( 见色谱<621>, 系统适用性和离子色谱<1065>。)
模式: IC
检测器: 脉冲安培( 金工作电极和银参考电极电化学电池)
柱
保护柱: 4.0毫米×5厘米的阴离子交换;包装L61
分析柱: 4.0毫米×25厘米阴离子交换;包装L61
柱温度: 50±2°
流量: 1.0ml/分钟
注射量: 20μL
波形脉冲安培检测器: 见表2。
时间
电压( V)
0.00
0.1
0.30
整合开始
0.50
0.1
0.5
整合结束
0.51
0.6
0.59
0.6
0.60
-0.6
0.65
-0.6
系统适用性
示例: 标准溶液
适用性要求
相对标准偏差: 不大于5.0％
分析
样本: 标准溶液和样品溶液
计算的β-环糊精在磺丁基醚-β-环糊精钠中所占的百分比:
结果=( RU/ RS) ×( CS/ CU) ×F×100
RU=测试环糊精的样品溶液峰值响应
RS =测试环糊精标准溶液峰值响应
CS=在标准溶液USP β-环糊精RS浓度( μg/ml)
CU=在样品溶液磺丁基醚-β-环糊精钠浓度( mg/ml)
F =转换系数( 10-3mg/μg)
验收标准: 不大于0.1％
----1,4-丁烷磺内酯
内标溶液: 0.25μg/ml二乙砜
标准储备溶液A: 0.5μg/ml的1,4-丁烷磺内酯
标准储备溶液B: 1.0μg/ml的1,4-丁烷磺内酯
标准储备溶液C: 2.0μg/ml的1,4-丁烷磺内酯
样品原液: 磺丁基醚-β-环糊精钠的内标溶液250mg/ml
空白溶液和样品溶液A, B, C, D
遵循表3放置的内标溶液, 每个标准储备溶液, 样品原液, 水, 或二氯甲烷的数量在各玻璃试管用塞子。
[注-A 10ml试管是合适的。]混合在涡流混合器上的每个试管30秒, 并允许它静置至少5分钟, 或直至相完全分离。萃取有机相到GC小瓶中, 并密封。 [注-小心翼翼拿水相的最低量可能]加入1,4-丁磺内酯批量样品溶液A, B, C和D是0.5, 1.0, 2.0和0μg, 分别。
遵循表3放置的内标溶液, 每个标准储备溶液, 样品原液, 水, 或二氯甲烷的数量在各玻璃试管用塞子。[注-A螺旋盖, 10ml试管是合适的。]在涡流混合器上混合每个试管30秒, 并静置至少5分钟, 或直至相完全分离。萃取有机相到GC小瓶中, 并密封。 [注-尽可能小心翼翼使水相为最低量]分别加入1,4-丁烷磺内酯样品溶液A, B, C和D是0.5, 1.0, 2.0和0μg。
样品名称
溶液1添加( ml)
溶液2添加( ml)
加入二氯甲烷( ml)
空白溶液
内标溶液, 4.0
水, 1.0
1.0
样品溶液A
样品原液, 4.0
标准储备液A, 1.0
1.0
样品溶液B
样品原液, 4.0
标准储备液B, 1.0
1.0
样品溶液C
样品原液, 4.0
标准储备液C, 1.0
1.0
样品溶液D
样品原液, 4.0
水, 1.0
1.0
[注: 使用前立即准备。]
色谱系统
( 见色谱<621>, 系统适用性。)
模式: GC
检测器: 氢火焰离子化
柱: 0.32mm×25m熔融石英毛细管柱;的0.5μm的G46相涂层
温度
检测器: 270℃
注入口: 200℃
柱: 温度方案见表4。
初始温度( ℃)
升温( ℃/min)
最终温度( ℃)
保持时间( min)
100
10
200
---
200
35
270
5
载气: 氦气, 入口压力一般在12psi
进样量: 1.0μL
进样方式: 不分流注入0.5min, 然后以50ml/min分流。 [注意-建议使用合适的不分流进样衬管。]
系统适用性
样品: 样品溶液B
[注-二乙基砜和1,4-丁烷磺内酯的相对保留时间分别为0.7和1.0。]
适用性要求
相对标准偏差: 不大于10.0％
分析
样品: 空白溶液, 试样溶液A、 B、 C和D较正的1,4-丁烷磺内酯的峰响应值与样品溶液A, B, C或D中二乙基砜峰响应值的比值减去空白溶液中1,4-丁烷磺内酯与乙基砜比值。
以试样溶液A, B, C或D中1,4-丁烷磺内酯校正峰响应值比二乙砜的比值, 对所添加的1,4-丁烷磺内酯量( μg) 。绘制标准曲线, 曲线和轴线的交点与原点之间的距离代表1,4-丁烷磺内酯的量, 计算在样品母液4ml中含有多少A(μg)。计算1,4-丁磺酸内酯中β环糊精磺丁基醚钠含量:
结果= A /( VEXT×CU×F)
A =如上确定
VEXT=在提取步骤中使用样品储备溶液的体积, 4.0ml
CU=样品原料溶液中β环糊精磺丁基醚钠浓度( mg/ml)
F =换算系数( 10-3克/mg) 验收标准: 不大于0.5.ppm
-----氯化钠, 4-羟基-1-磺酸, 和双( 4-磺丁基) 醚二钠
溶液A: 5mM的氢氧化钠, 在密闭容器中脱气15分钟
溶液B: 25mM的氢氧化钠, 在一个封闭容器脱气15分钟
流动相: 见表5。
时间( min)
溶液A( %)
溶液B( %)
0
100
0
4
100
0
10
70
30
24
70
30
25
100
0
40
100
0
柱洗涤液A: 50 mM柠檬酸钠
柱洗涤液B: 150mM的氢氧化钠
标准溶液: 配制一个溶液含有USP氯化钠RS 8μg/ml, 4-羟基丁烷-1-磺酸浓度4μg/ml的的, 和4μg/ml的双( 4-磺丁基) 醚二钠。
样品溶液: 磺丁基醚-β-环糊精钠4mg/ml
色谱系统
( 见色谱<621>, 系统适用性和离子色谱<1065>。)
模式: IC
检测器: 电导率
范围: 30μS
当前: 100mA
柱: [注-在每次运行结束, 用柱洗涤液A以1mL/分钟的流速冲洗35分钟, 然后使用柱洗涤液B以同样的流速清洗色谱柱35分钟。]
保护柱: 4.0mm×5.0cm阴离子交换;包装L61
分析: 4.0mm×25cm阴离子交换;包装L61
柱温度: 30℃
抑制器: 微膜负离子自动抑制1或合适的化学灭火系统
抑制剂: 自动抑制
流量: 1.0ml/min
注射量: 20μL
系统适用性
样品: 标准溶液
[注, 提供相对保留时间供参考。相对保留时间分别是1.0, 1.4和8.6的为4-羟基丁烷-1-磺酸根离子, 氯离子, 和双( 磺丁基) 醚离子。]
适用性要求
分辨率: 不小于2.0
相对标准偏差: 不大于10.0％
分析
样本: 标准溶液和样品溶液
计算氯化钠, 4-羟基丁烷-1-磺酸, 二( 磺丁基) β环糊精醚百分比
钠含量
结果 = (rU/rS) × (CS/CU) × F × 100
RU=氯化钠, 4-羟基丁烷-1-磺酸, 或样品溶液中双( 磺丁基) 醚二钠峰值响应
RS =氯化钠, 4-羟基丁烷-1-磺酸, 或标准溶液中双( 磺) 乙醚二钠峰值响应
CS =氯化钠, 4-羟基丁烷-1-磺酸, 或标准溶液中双( 磺丁基) 醚二钠浓度( μg/ml)
CU=样品溶液中磺丁基醚-β-环糊精钠浓度( mg/ml)
F =转换系数( 10-3mg/微磺丁基醚-β-环糊精钠g)
验收标准
氯化钠: 不大于0.2％
4-羟基丁烷-1-磺酸: 不大于0.09％
双( 磺丁基) 醚二钠: 不大于0.05％
[特定实验]
----细菌内毒素检查<85>: 细菌内毒素的水平是这样的, 根据有关的剂型专著( 多个) , 其中使用β环糊精磺丁基钠的规定都能得到满足。其中, 该文章指出β环糊精磺丁基钠的注射剂型的必须在制备过程中进行进一步的处理, 使得细菌内毒素的水平符合相关剂型的专著( 多个) 的要求, 其中使用β环糊精磺丁基钠的规定能够得到满足。
----微生物计数试验<61>和指定微生物试验<62>: 总需氧细菌数不超过100个/g, 总霉菌和酵母菌数不超过50个/g。它满足了不应该检测出大肠杆菌的需求。
[澄明度试验]
样品溶液: 30％( 重量/体积) 溶液
分析: 使用白色和黑色的背景光箱样品溶液检查, 并记录任何阴霾, 荧光, 纤维, 斑点, 或其它异物的存在。
验收标准: 该试验方案是明确的, 基本上不含异物颗粒。
平均取代度
运行电解质:
用100 mmol三( 羟甲基) 氨基甲烷缓冲液调节30mmol苯甲酸至pH值适用该仪器。[由于不同毛细管之间的差别, 没有指定一个单一的普遍适用的电解液的pH值。相反, 每个毛细管相关的最佳pH值应根据仪器说明书确定。]
标准溶液: 10mg/ml的USP磺丁基醚-β-环糊精钠RS
样品溶液: 10mg/ml的磺丁基醚-β-环糊精钠
毛细管冲洗过程: 使用单独的运行电解质的小瓶进行毛细管冲洗和样品分析。每天进行分析前及每个分析之前的冲洗: 用0.1N氢氧化钠冲洗毛细管30分钟, 而且用水冲洗不少于2 h, 并运行电解质不少于1小时。执行预喷射冲洗每次进样之前。用0.1N氢氧化钠冲洗毛细管不少于1分钟, 而且运行电解质不少于3分钟。如果正在使用新的毛细管中, 除了上述的常规冲洗, 新的毛细管, 需要在第一次使用之前漂洗。新毛细管用1M氢氧化钠冲洗1小时, 接着用水冲洗2小时。
电泳系统( 见毛细管电泳1053。)
模式: 高效毛细管电泳
检测器: 反相紫外检测波长200 nm, 具有20 nm的带宽。【注-A 205 nm检测波长10 nm带宽, 能够作为替代。]
柱: 50µM×50厘米的熔融石英柱
柱温: 25
电压: 10分钟电压从0线性升到30 kV, 然后在30 kV维持20分钟
注射量: 等量在0.5psi 压力差下维持10秒
系统适用性
示例: 标准溶液
[注: 见表6中近似的相对迁移时间磺丁基醚-β-环糊精钠峰I–X( 磺丁基醚-β-环糊精钠峰I, II, III, ……, X, 含有β-环糊精分子与1, 2, 3, ……, 10磺丁基取代的( S) , 分别) 。相对迁移时间仅供参考帮助峰识别。
表 6
磺丁基醚-β-环糊精钠峰 I–X
相对迁移时间
I
0.58
II
0.63
III
0.69
IV
0.77
V
0.83
VI
0.91
VII
1.00
VIII
1.10
IX
1.20
X
1.30
适用性要求
分辨率: 磺丁基醚-β-环糊精钠IX和磺丁基醚-β-环糊精钠峰X不小于0.9, 分析:
样品: 运行电解质, 水, 标准溶液和样品溶液,
注入标准溶液和样品溶液经过施加0.5psi的压力差, 相当于34mbar, 持续10秒, 然后注射运行电解质在0.5 psi压力差下持续2秒[注-压力注射应用水的小瓶或运行电解质在毛细管出口端。]
记录电泳, 并测量每个磺丁基醚-β-环糊精钠峰的峰值响应( I-X) 。计算校正后的峰面积, AI, 在电泳图每个峰:
校正峰面积=峰面积*有效的毛细管长度( cm) /迁移时间
经过呈现各自的总校正替代包络面积的百分比来归一化校正峰面积:

n= 最高取代度
确定的平均取代度:
平均取代度
验收标准: 6.2–6.9平均取代度
每个磺丁基醚-β-环糊精钠峰I–X的限制范围( %峰面积) 见表7。
磺丁基醚-β-环糊精钠I–X
限制范围( %的峰面积)
I
0–0.3
II
0–0.9
III
0.5–5.0
IV
2.0–10.0
V
10.0–20.0
VI
15.0–25.0
VII
20.0–30.0
VIII
10.0–25.0
IX
2.0–12.0
X
0–4.0
[pH] ( 791) : 4–6.8, 30%( w/v) 的无二氧化碳水溶液。
[水分测定]: 方法( 921) : 10%以下
[附加要求]
•包装及贮运: 保存在密闭良好的容器中, 并在室温下存储。防止受潮。
•标签: 标签是指示其在注射剂型的生产中使用。
•USP参考标准<11>
USP β环糊精RS
USP 磺丁基醚-β-环糊精钠RS
USP内毒素RS
USP氯化钠RS■1S( NF30)
( 四) 结构解析

五、 产品应用
1、 在注射剂中的应用
1-1、 作用: 增溶剂、 稳定剂, 提高难溶药物的溶解度和稳定性, 使难溶药物开发成注射剂。
1-2、 实例: 用SBE-7-β-CD提高112859-71-9 Fluasterone、 多西她赛、 伏立康唑、 布洛芬、 吲哚美辛的溶解性; 用SBE-7-β-CD提高卡莫司汀稳定性;
2、 在口服制剂中的应用
2-1、 作用: 增溶剂、 稳