植物组织培养技术流程.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,实验室仪器设备,2,实验基本操作,3,植物组织培养流程,植物组织培养操作流程,1,1,实验室仪器设备,2,3,2,实验基本操作,一、母液的配制,1.MS,母液的配制,2.,激素母液的配制,大量元素,(20,倍,),、微量元素,(1000,倍,),、铁盐,(100,倍,),、有机元素,(100,倍,),6-BA,、,KT,、,ZT,等浓度为,0.5mg/ml,；,NAA,浓度为,0.1mg/ml,4,二、培养基的配制与灭菌,MS+6-BA 2 mg/L+,琼脂粉,5.5 mg/L+,糖,30 mg/L pH 6.0 1L,适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。,121,维持,2030min,注意点：加足水、排尽气、气压降到,0,时，才能开盖。,1.,培养基配制,2.,培养基灭菌,5,三、外植体的消毒与无菌操作,消 毒 剂,使用浓度,(%),消毒时间,(min.),效 果,残液去除难易,乙醇,70-75,0.1-3,好,易,新洁尔灭,10,20,5,30,好,易,氯化汞,0.1,1,2,15,最好,最难,过氧化氢,10,12,5,15,较好,最易,抗菌素,4,50mgl,-1,30,60,较好,较难,次氯酸钙,/,纳,9,10,5,30,好,易,1.,外植体消毒,6,正,确,错,误,取流水冲洗（至少,5min,）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗,3-4,次，放入无菌培养皿中，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。,7,1,、用,75%,的酒精喷洒超净工作台。,2,、打开室内及超净工作台用紫外灯、无菌风及刀剪镊杀菌,20min-30min,。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。,3,、关空间紫外灯，过,5-10min,进入缓冲间，以,75%,洗手和手臂，进入接种台。,4,、关闭超净台紫外灯，打开照明灯。,5,、试验操作。,6,、完毕后关闭照明灯、刀剪镊、无菌风开关。,7,、收拾无菌纸、材料瓶等。,。,2.,无菌操作,8,注意（,1,）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（,2,）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要重新消毒。（,3,）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧。（,4,）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口，直立可增加落菌机会。,9,接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中,正,确,错,误,10,3.,植物组织培养流程,路,线,一,11,路,线,二,12,路,线,三,13,灭菌难，接种难，用心都不难,身体好，学习好，品质更需好,14,