HIV抗体检测方法10月—刘经凤.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,HIV抗体检测,十堰市疾病预防控制中心,刘经凤,2016,年,10,月,规范性文件引用,艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准,（中华人民共和国卫生行业标准，,WS293-,有效版本）,艾滋病病毒抗体快速检测技术手册,（中国疾病预防控制中心，,2011,年版）,HIV,抗体检测实验室要求,应符合国家对实验室生物安全的,有关要求,实验室的质量控制按本规范相关章节规定,HIV,抗体检测的目的和要点,HIV,抗体检测的目的,HIV,抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等,。,HIV,抗体检测的要点,1.,严格遵守实验室标准操作程序（,SOP,）。,2.,结果判定以试剂盒说明书为标准。,HIV,抗体检测的目的和要点,3.,筛查试验,有反应,，须作,补充试验,。,补充试验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带,/,线性免疫试验，,特定条件,*,下的,替代检测,，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。,HIV,抗体检测的目的和要点,4.,筛查试验无反应，不应做补充试验。,5.,对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。,常规,HIV,抗体检测方法,试剂和样品,试剂,必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。,样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。,筛查方法,酶联免疫吸附试验,（,ELISA,）,化学发光或免疫荧光试验,（,CIA/IFA）,：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果,快速检测,（,RT,）,及其它检测试验,(1),明胶颗粒凝集试验,(PA),(2),免疫渗滤试验,(3),免疫层析试验,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,HIV,抗体检测试剂（第三代）：检测,HIV-1/2,抗体,HIV,抗原抗体联合检测试剂（,第四代,）：可同时检测血液中,HIV-1P24,抗原,和,HIV-1/2,抗体,用,酶标仪测定,结果,有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,ELISA,试验中可能出现的问题和原因分析,问题,可能的原因（非试剂盒本身的原因）,测定的重复性差,1.,加样本及试剂量不准,2.,加样过快，孔间发生污染,3.,加错样本,4.,加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区,5.,温育时间、洗板、显色时间不一致,6.,酶标仪滤光片问题,ELISA,试验中可能出现的问题和原因分析,问题,可能的原因（非试剂盒本身的原因）,白板（阳性对照不显色）,1.,漏加酶结合物,2.,洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物,3.,漏加显色剂,A,或,B,4.,终止液当显色剂使用,全部板孔都有显色,1.,洗板不干净,2.,加底物的吸头被酶污染,3.,洗板液受酶污染,4.,由于仪器或加样头造成的交叉污染,ELISA,测定中的干扰因素,内源性干扰因素,外源性干扰因素,内源性干扰因素,人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等,外源性干扰因素,常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存,用途：流行病学监测及临床大量标本的检测,化学发光或免疫荧光试验,采用,发光或荧光底物,既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体,酶或荧光标记的,HIV,抗原或抗体，加发光或荧光底物,用,发光仪或荧光仪,测定结果,全血样品,加,50ul,样品于样品垫中,手指血方法,静脉血方法,加一滴缓冲液,15,分钟内读取结果,快速检测（,RT,）及其它检测试验,病人条,质控条,快速检测（,RT,）及其它检测试验,优点,:,快速,单份标本检测,不需额外试剂或设备,操作简便,缺点,:,肉眼判断较主观,价格较贵,结果不易保存（,建议拍照保存,）,HIV筛查试剂的选择,检测目的,实验设施条件,价格,其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等,HIV抗体筛查结果的意义及处理,阴性：真阴性 未感染或暴露于HIV病毒,假阴性 注意窗口期,阳性：真阳性 感染或暴露于HIV病毒,假阳性 非特异性反应,操作失误,处理：筛查试验无反应报告为“,HIV,抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“,HIV,抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“,补充试验,”；报告为“,HIV,感染待确定”，不能出具阳性报告。,HIV,抗体确证试验,确证试验的试剂：,必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。,确证样品：,可采用血清、血浆、滤纸干血斑,确证试验方法：,免疫印迹试验,(WB),和条带,/,线性免疫试验（,RIBA/LIA,）。,国内常用的确证试验方法是,WB,和,RIBA,。,HIV,确证试剂产品,公司,试剂,原理,新加坡,MP,亚太私人医药有限公司,人类免疫缺陷病毒（,HIV1+2,型）抗体检测试剂盒（免疫印迹法）,WB,杭州澳亚生物技术有限公司,人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（免疫印迹法）,WB,上海英旻泰生物技术有限公司,人类免疫缺陷病毒,(HIV 1+2,型,),抗体检测试剂盒,(,免疫印迹法,),WB,北京万泰生物药业股份有限公司,人类免疫缺陷病毒,(HIV 1+2,型,),抗体检测试剂盒,(,重组免疫印迹法,),RIBA,Abbott,Slot immunoblot strip,RIBA,Innogenetics,INNO-LIA HIV I/II Score,RIBA,HIV,抗体,WB,确证实验结果（,MP）,a,强阳性对照（,HIV-1,和,HIV-2,）,b,弱阳性对照（,HIV-1,）,c,阴性对照,d,典型的,HIV-2,血清阳性反应,a b c d,gp160,gp120,p66,p55,p51,gp41,p39,p31,P24,p17,血清对照,HIV-2,特异带,IMT,MP,确证试剂盒判定标准：,WB不确定结果,原因：HIV感染早期、HIV感染晚期、非特异性反应、污染,依据：流行病学资料；临床表现；WB条带等,处理：核酸检测、,2-,4周后随访、带型消失或无进展、出现新带型、重采血,HIV,抗体,母亲,HIV,抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染,出生时母亲的抗体，,8090%,在生后,912,个月消失，出生后,18,个月基本上全部消失,18,个月后儿童,HIV,抗体仍然阳性，视为自身感染产生的抗体,18,个月以下婴幼儿的,HIV,诊断,婴幼儿,HIV,感染的抗体检测,适用于：,HIV,感染产妇所生婴幼儿；,母亲,HIV,感染状态不详，儿童出现,HIV,相关临床表现，临床怀疑,HIV,感染的儿童。,婴儿,12,个月,时进行,HIV,抗体检测,阴性排除感染,，纳入正常儿童保健；,阳性者继续追踪随访,，至,18,个月再次进行,HIV,抗体检测，结果阴性排除感染。,结果报告,筛查报告,HIV,抗体筛查试验报告使用附表,1,（,HIV,抗体筛查检测报告）。筛查试验无反应报告为“,HIV,抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“,HIV,抗体阴性”，,结果报告,复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“,HIV,感染待确定”，不能出具阳性报告。,HIV,抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。,结果报告,确证报告,符合,HIV-1,抗体阳性判断标准，报告“,HIV-1,抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。,符合,HIV-2,抗体阳性判断标准，报告“,HIV-2,抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。,结果报告,符合,HIV,抗体阴性判断标准，报告“,HIV,抗体阴性”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做,HIV,核酸检测或,2-4,周后随访，尽早明确诊断。,符合,HIV,抗体不确定判断标准，报告“,HIV,抗体不确定”，在备注中应注明“,2-4,周后复检”或尽快做核酸检测。,HIV,抗体确证检测报告应在收到样品后的,7,个工作日内发出。,质量控制,酶免或发光法抗体检测的室内质量控制,试剂盒内部对照,室内质控品,Levey-Jennings,质控图,室内质控其他方式“即刻法”质控,质量控制,快速法抗体检测质控,试剂内对照,室内质控品对照,开展抗体相关检测的实验室须参加有资质机构组织的能力验证，或室间比对。,艾滋病抗体快速检测质量控制,依据艾滋病病毒抗体快速检测技术手册,（,2011,年版）第,8,章,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测前质控,：,1.,样品要求唯一编号，检测前应仔细核对。,2.,检测点的环境温湿度应符合检测试剂盒说明书的要求，并做好相关的记录。,3.,保证试剂在有效期内使用。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测过程质控,：,1.,做好实验过程中相关信息的记录：样品、检测试剂、操作者等。,2.,保存在冰箱的试剂需在室温平衡后再使用；剩余的试剂条应立即封存冷藏；室温性下保存的试剂也应避免高温。,3.,按照试剂厂家提供的说明书严格操作。（时间）,4.,判定结果时，质控带必须出现，实验才能成立，否则需要重做并查找原因。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测后质控,：,1.,判读结果时应保证光线充足。对难以判读的条带建议又两人判读。,2.,复核样品编号后填写实验结果。,3.,清洁并处理实验废弃物。,4.,发放规范的检测报告，整理实验过程中的各项记录存档。,试剂,-1,有反应,无反应,试剂,1,双份或双孔检测或两种试剂,均有反应,一有反应,一无反应,均无反应,补充实验,报告,HIV,抗体阴性,图,2,使用抗体检测试剂的检测流程,阳性,免疫印迹试验,（,WB/RIBA,）,阴性,不确定,核酸试验或,2-4,周后随访,出现,HIV-2,指示带,根据情况进一步,检测,HIV-2,报告,HIV-1,抗体阴性,报告,HIV-1,抗体阳性,图,5,免疫印迹试剂（,WB/RIBA,）试验流程,HIV1/2,抗体或抗原抗体联合检测试验,无反应,有反应,方案,1,相同样本相同试验双孔复试,方案,2,复试结果无,反应,-,-,复试结果有反应,-,+,；,+,+,阴性,报告血液检测合格,反应性 报告血液检测不合格。如需进一步检测，参照临床诊断检测策略,图,9,血液抗原抗体筛查试验流程,无反应,不确定,有反应,无反应,有反应,有反应,无反应,有反应,有反应,无反应,无反应,艾滋病感染孕妇所生儿童,12,个月进行,HIV,抗体筛查试验,用另一种筛查试剂再次检测,18,个月时再进行,HIV,抗体筛查试验,试剂,1,双份或双孔检测，或原有试剂加另一种试剂,抗体补充试验,报告,HIV,抗体阴性,报告,HIV,抗体阳性,提供咨询，继续随访，进行核酸检测等补充试验,图,12,艾滋病感染产妇所生儿童,HIV,抗体检测流程,谢谢！,