免疫室作业指导书.doc

免疫室作业指导书
文件编号：ABCD-3-MY-01~52
第A版
编制：
审核：
批准：
生效日期：2006年8月8日
ABCD人民医院检验科
225 / 226
目 录
序号
主 题 内 容
代 号
页 号
1
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测
ABCD-3-MY-01
6
2
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测
ABCD-3-MY-02
9
3
血清乙型肝炎病毒e抗原检测
ABCD-3-MY-03
12
4
血清乙型肝炎病毒e抗体检测
ABCD-3-MY-04
15
5
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测
ABCD-3-MY-05
18
6
甲型肝炎病毒--IgM检测
ABCD-3-MY-06
21
7
血清丙型肝炎病毒抗体检测
ABCD-3-MY-07
24
8
血清麻疹IgM抗体试验
ABCD-3-MY-08
28
9
人类免疫缺陷病毒抗体检测
ABCD-3-MY-09
31
10
梅毒甲苯胺红不加热血清试验
ABCD-3-MY-10
34
11
梅毒螺旋体特异性抗体检测
ABCD-3-MY-11
36
12
免疫球蛋白A（IgA）测定
ABCD-3-MY-12
39
13
免疫球蛋白M（IgM）测定
ABCD-3-MY-13
42
14
免疫球蛋白G（IgG）测定
ABCD-3-MY-14
45
15
补体C3测定（免疫比浊法）
ABCD-3-MY-15
48
16
补体C4测定（免疫比浊法）
ABCD-3-MY-16
51
17
类风湿因子（RF）测定
ABCD-3-MY-17
54
18
抗链球菌溶血素O（ASO）测定
ABCD-3-MY-18
56
19
C反应蛋白（CRP）测定
ABCD-3-MY-19
58
20
C反应蛋白（CRP）定量测定
ABCD-3-MY-20
60
21
支原体肺炎血清学试验
ABCD-3-MY-21
63
22
D二聚体检测（胶乳凝集法）
ABCD-3-MY-22
65
23
甲胎蛋白（AFP）定量测定
ABCD-3-MY-23
68
24
癌胚抗原（CEA）定量测定
ABCD-3-MY-24
72
25
糖链抗原125（CA125）定量测定
ABCD-3-MY-25
76
26
CA153定量测定
ABCD-3-MY-26
80
27
糖链抗原199（CA199）定量测定
ABCD-3-MY-27
84
28
F-PSA定量测定
ABCD-3-MY-28
88
29
T-PSA定量测定
ABCD-3-MY-29
92
30
B12定量测定
ABCD-3-MY-30
96
31
铁蛋白定量测定
ABCD-3-MY-31
100
32
叶酸（Folate）定量测定
ABCD-3-MY-32
104
33
人绒毛膜促性腺激素定量测定
ABCD-3-MY-33
108
34
血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定
ABCD-3-MY-34
112
35
肌红蛋白定量测定
ABCD-3-MY-35
116
36
肌钙蛋白-I定量测定
ABCD-3-MY-36
120
37
CK-MB定量测定
ABCD-3-MY-37
124
38
HBsAg半定量测定
ABCD-3-MY-38
128
39
HBsAb定量测定
ABCD-3-MY-39
131
40
HBeAg半定量测定
ABCD-3-MY-40
135
41
HBeAb半定量测定
ABCD-3-MY-41
138
42
HBcAb半定量测定
ABCD-3-MY-42
141
43
HBcAb-IgM半定量测定
ABCD-3-MY-43
144
44
CMV-IGM半定量测定
ABCD-3-MY-44
147
45
RUBELLA-IGM半定量测定
ABCD-3-MY-45
150
46
微量加样器的质控
ABCD-3-MY-46
154
47
酶标分析仪操作维护规程
ABCD-3-MY-47
157
48
全自动酶标洗板机操作维护规程
ABCD-3-MY-48
159
49
特种蛋白测定仪操作维护规程
ABCD-3-MY-49
160
50
AxSYM免疫分析仪操作维护规程
ABCD-3-MY-50
165
51
免疫学室内质量控制操作程序
ABCD-3-MY-51
169
52
免疫学检验室间质量评价（EQA）
ABCD-3-MY-52
174

修 订 页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
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血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。
8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性
10. 质量控制
每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11. 参考范围：阴性
12. 临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
13. 操作性能：灵敏度为ng/ml，特异性高。
14. 方法局限性
14.1. 对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。
14.2. 如出现跳孔现象可能造成假阳性。
14.3. 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15. 注意事项
15.1. 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2. 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3. 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4. 所有样品都应按传染源处理。
15.5. 封口膜使用说明
15.5.1. 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2. 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6. 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。
8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性
样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性
10. 质量控制
每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11. 参考范围
阴性或阳性
12. 临床意义
HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。
13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。
14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗原检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100C
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。
8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记
录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBeAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBeAg阴性
10. 质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11. 参考范围：阴性或阳性
12. 临床意义：HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。
13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。
14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存
以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：血清或血浆。
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过24小时，-20℃不应超过3个月，
-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100C
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。
8.6 中和：分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50ml，轻拍混匀。
8.7 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.10 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.11 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性
10. 质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11. 参考范围：阴性
12. 临床意义：HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。
13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。
14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：血清或血浆。
2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
HBcAb微孔板，HBcAb酶标记抗原，HBcAb阳性对照血清，HBcAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100C
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：每测定孔加入50ml样品。对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml。作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS；作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。
8.5 加酶：每孔加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。
8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：
临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O<=1者为HBcAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBcAb阴性
10. 质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBcAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11. 参考范围：阴性
12. 临床意义：高效价阳性表示现实感染，低效价阳性表示既往感染。
13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。
14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）413页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
甲型肝炎病毒--IgM检测(ELISA法)
1. 原理
本法是用抗人μ链捕获待测血清中特异性IgM，然后用HAV与特异性—IgM抗体反应，再加酶标记抗M抗体，最后加底物显色。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2 标本种类：血清或血浆。
2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：抗HAV—IgM检测ELISA试剂盒
6.2 试剂生产厂家：郑州博赛生物技术研究所
6.3 包装规格：48Test/Kit
6.4 试剂盒组成：
包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100C
8 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100ml，空下四孔准备加对照。
8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各5ml分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
8.6 加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100ml，标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
8.7 温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育20分钟。
8.8 洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100ml，轻拍混匀。
8.10 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。
8.11 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.12 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37℃暗处10分钟。
8.13 终止：每孔加终止液50ml，混匀。
8.14 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9. 结果判断与分析
9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值＝阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2 结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为阳性
样品OD值S/C.O<1者为阴性
10. 质量控制：每次均应有阴阳对照，其OD值应在要求范围内。
11. 参考值范围：阴性
12. 临床意义：血清中抗HAV-IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，已被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。
13. 操作性能：特异性强，灵敏度高，重复性好。
14. 方法局限性
15. 注意事项
15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4 所有样品都应按传染源处理。
15.5 封口膜使用说明
15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410页。
18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清丙型肝炎病毒抗体检测（ELISA）
1. 原理
在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。
2. 标本采集
2.1 采集前病人准备：受检者应空腹
2.2 标本种类：血清或血浆
2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6. 试剂
6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒
6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit
6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
7. 仪器设备
7.1 仪器名称：自动酶标仪
7.2 仪器厂家：Rayto
7.3 仪器型号：RT-2100C
8. 操作步骤
8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微