微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第1页,主要试验内容：,显微镜下细菌细胞,大小,测定,血球计数板测定微生物细胞,数量,（显微镜下直接计数）,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第2页,一 显微镜下细菌细胞,大小,测定,1 试验目标,2 试验原理,3 试验材料,试验方法步骤,5 试验汇报,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第3页,1 试验目标,学习用镜台测微尺校正目镜测微尺方法,学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小,方法,巩固显微镜油镜使用方法,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第4页,2 试验原理,测定微生物细胞大小是在显微镜下利用,测微尺,进行。测微尺可分为,目镜测微尺,和,镜台测微尺,。,目镜测微尺,是特制圆形玻片，中央有一刻度尺（,100等分,），可放入目镜镜筒内，用于测定细胞大小。,镜台测微尺,为一载玻片，上贴有圆形盖片，中央有总长度为1,mm(100,等分)，每小格长,0.01,mm,(10um)。,目镜测微尺每小格大小随显微镜放大倍数不一样而改变，,使用目镜测微尺进行测量之前必须用镜台测微尺标定,，以求出在某一放大倍数下目镜测微尺每小格所代表长度，然后用标定好目镜测微尺进行测量。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第5页,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第6页,3 试验材料,枯草杆菌标本片,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第7页,4 试验方法步骤,（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。,（2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第8页,（1）用镜台测微尺标定目镜测微尺。,放置目尺,：取出目镜，旋开接目镜，将目尺放在目镜镜筒中间隔板上（有刻度一面朝下），旋上接目镜，并插入镜筒。,放置台尺,：将台尺放置于显微镜载物台上，使刻度面朝上。,标定目尺,：先用低倍镜观察，找到台尺刻度，转动目镜使目尺与台尺刻度轴线相平行，移动台尺使目尺与台尺某一区间两对刻度线完全重合，然后计数出两重合线间各自所占格数，经过以下公式计算：,目尺每小格长度（,um）=,两对重合刻度线之间台尺所占格数10,两对重合刻度线之间目尺所占格数,标定低倍镜目尺每小格所代表实际长度,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第9页,（2）用目镜测微尺测定枯草杆菌大小,取下台尺，将染色片放在载物台上，先用低倍镜观察，后换油镜观察，计量细菌,长和宽,所占小格数，将测得格数乘以已标定目尺每小格长，即得菌体实际大小。测定20个菌体求出平均值。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第10页,5 试验汇报,（1）目镜测微尺标定结果统计,物镜,物镜放大倍数,目镜测微尺格数,镜台测微尺格数,目镜测微尺每格代表长度（,um）,低倍镜,油镜,100,0.5,um,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第11页,（2）在油镜下测量枯草杆菌大小结果统计,菌体编号,宽,长,菌体大小,（平均值）,宽 长（,um）,目尺格数,菌体宽（,um）,平均值,目尺格数,菌体长（,um）,平均值,1,2,3,4,5,20,.,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第12页,二 血球计数板测定微生物细胞,数量,1 试验目标,2 试验原理,3 试验材料,4 试验方法步骤,5 试验汇报,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第13页,1 试验目标,掌握血球计数板测定微生物细胞数量原理。,学习用血球计数板测定微生物细胞数量方法。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第14页,2 试验原理,利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可依据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物总数量。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第15页,血球计数板结构,它是特制厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两个别，每一个别都有一个方格网，每一方格网可分为九个大方格，,中央大方格就是计数室,。,大,方格分为,16个中,方格，每个,中,方格又可分为,25个小,方格。每个大方格共含有400个小方格。计数室大方格边长为1,mm，,底面积为1,mm,2,，,高0.1,mm,所以每个计数室固定容积为0.1,mm,3,。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第16页,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第17页,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第18页,计数方法,在计数时，用含16个中方格计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（100个小方格）所含有菌数；由此可计算得出每个小方格所含有菌数平均值，,计数室每个小方格容积为：,0.110,-3,4001410,-6,(,ml),计算公式：,每,ml,菌液含菌数=,N K d,(N：,每个小方格含菌数平均值；,d：,菌液稀释倍数；,K=410,6,),微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第19页,3 试验材料,稀释,100倍,酵母菌菌悬液,即,d=100,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第20页,试验方法步骤,1 镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计数。,2 加样液：,先,在血球计数板两个计数室部位,加盖玻片,，再用无菌,玻棒,或滴管沾取待测,菌悬液稀释液,（已摇匀），从盖玻片,边缘滴加,，使菌液沿缝隙靠,毛细作用,自行进入计数室内。,静置5,min,。,3,显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用,低倍镜,观察，后换,高倍镜,观察计数。位于格线上菌体只计,上边线和左边线上,，假如,出芽酵母芽体大小到达母细胞二分之一时，可计作两个菌体。,选择,五个视野,，在每个视野内任意选择,五个小方格,计数，,求出每个小方格菌体数量平均值,。,4,依据公式计算每,ml,菌液含菌数。,5,测量完成后，取下盖玻片用水冲洗血球计数板（,禁止用硬物刷洗,），晾干，放入盒内保留。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第21页,注意事项,（,1）取待测稀释菌悬液向血球计数板加样前，须将菌悬液充分摇匀。,（2）加样过程中，应防止将菌液滴在盖玻片,（3）因为菌体在计数室中处于不一样空间位置，须在不一样焦距下才能观察到，故观察时须不停调整微调，计数菌液中全部菌体，尽可能防止遗漏。,微生物细胞大小测定及显微镜下细胞数量测定,第22页,