生物大分子药物研究前沿演示课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物大分子药物,研究开发前沿,1,内 容,第一部分：生物大分子药物,及其研发现状,第二部分：生物大分子药物,传递系统研究进展,2,第五讲,复习思考题,生物技术药物的研发关键环节有哪些？,生物技术药物的翻译后修饰方法有哪几种？,蛋白质、多肽药物载体型传递系统有哪些？,疫苗载体型传递系统有哪些？,3,第一部分：生物大分子药物及其研发现状,4,生物大分子药物及其现状,生物药物：肽、蛋白质、抗体、核酸（基因）、疫苗、糖治疗剂、基于,细胞,或,组织,的治疗剂,已批准的生物药物,:,超过,250,个，包括重组蛋白质、血液产品、单克隆抗体和重组疫苗,药物应用最多的为重组蛋白质和抗体,主要用于治疗癌症、艾滋病、冠心病、糖尿病和一些罕见的遗传疾病等。,5,年销售额,40,亿美元的基因工程药物,至,2010,年底，,FDA,共批准,250,种生物技术药物上市,2007,年销售额超过,40,亿美元的药物有,16,种，基因工程药物占据,7,种：,1.,治疗非霍奇金淋巴瘤的,anti-CD20,抗体,Rituxan,2.,治疗乳腺癌的,anti-EGFR II,抗体,Herceptin,3.,治疗肿瘤放化疗后出现的白细胞减少的,G-CSF,4.,治疗肺癌、乳腺癌和结直肠癌的,anti-VEGF,抗体,Avastin,5.,治疗类风湿关节炎的,anti-TNF,抗体,Enbrel,、,Remicade,6,7,生物制药发展迅速,1982-2008,年美国,FDA,批准的新生物产品,按适应症分类,9,重组生物药物的研发过程,各种天然存在的治疗蛋白质,E.coli,等微生物表达,药效更强的蛋白质工程产品,多种表达体系开发应用,突变技术,融合蛋白质表达,定向进化,基因渗入,基因敲除,活性提高,稳定性增加,半衰期增加,免疫原性减少,真核哺乳动物细胞为主,一、生物技术药物的研发过程及关键环节,10,药物的设计,药物的靶点及药物设计,药物的生产,表达体系和质量控制,药物的评估,药效和毒副作用,11,（一）药物设计,-,药物靶点研究,探讨致病分子机理，寻找合适的药物治疗新靶点,单个靶点的多种生物学功能及精细调控,单个靶点的多种存在形式,:,亚型,个体化治疗，针对特异人群的靶向诊断试剂和治疗药物,多个信号途径的相互作用：网络病理学,从老药中寻找治疗疾病的新靶点：不明确靶点的老药有,17%,发现老药的新型治疗用途,12,13,（二）生物药物的生产,高效表达系统,生产工艺质量控制,14,生物制药的生产,表达系统,原核表达,真核表达,表达系统,大肠杆菌,枯草杆菌,青枯病产碱杆菌,假单胞菌,NPro,自身蛋白酶融合技术，,NAFT,(,山德士公司，新微生物表达系统,),酵母,丝状真菌,昆虫,/,杆状病毒表达系统,植物,哺乳动物细胞表达系统,转基因动物生物反应器,15,FDA,批准的生物药物表达系统,细菌,酵母,哺乳动物,16,原核表达系统,大肠杆菌,E.coli,安全、经典的标准化表达系统,成本低廉、工艺成熟、表达量高,简单蛋白质药物生产不可或缺的表达系统,2000,年后，在欧美新药的研究中比例减少,2005,年至今美国,FDA,批准的重组蛋白质药物都是真核表达,缺点,：,容易形成包涵体（,寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构,），须变复性处理，易造成活性下降或丧失；,提取时需破碎细胞，往往会造成核酸、热原、内毒素或脂多糖的释放；,不存在翻译后修饰作用，蛋白质产物不能糖基化；,目的蛋白质的,N,端常多余一个甲硫氨酸残基，容易引起免疫反应,17,真核表达系统,-,酵母,酿酒酵母,Saccharomyces cerevisiae,应用最多,限制：,糖基化修饰中糖链结构和组成与天然糖蛋白相差甚远，,不适用糖链极大影响生物活性的蛋白质,(EPO,、治疗性抗体等,),18,哺乳动物细胞表达系统,具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子；,具有重组基因的高效扩增和表达能力，外源蛋白整合稳定；,具有,产物胞外分泌,功能，便于下游产物分离纯化；,能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养，可以大规模生产,美国,FDA,倾向在,21,世纪都采用真核表达系统生产蛋白质药物,19,欧美生物制药哺乳动物细胞表达产品,Expresssion systems and transformed hosts,Number,Mammalian cells,nonprimate,hamster,Chinese ovary(CHO),仓鼠,50,murine myeloma cells,鼠科骨瘤,11,murine cells other,1,Mammalian cells,primate,灵长类,monkey cells,diploid,kidney,or fetal lung,4,Human cells,human cells,transformed with Epstein-Barr virus transformed,1,human cells,gene activation by TKT2,2,human kidney cells,embryonic,胚胎样,1,human cells,unspecified,1,现有的利用哺乳动物细胞表达的药物中有,70%,是以,CHO,表达生产的,Ronald A.Rader.Expression Systems for Process and Product Improvement.BioProcess International JUNE 2008,20,构建的重组,CHO,细胞生产效率低，产物浓度亦低,某些糖基化表达产物不稳定，不易纯化,上游构建与下游分离纯化脱节,重组细胞培养费用昂贵，自动化水平低下,缺点：,研究方向,：,发展新的强启动子和合适的增强子,提高基因剂量的新途径,选择载体,-,宿主的最优组合,装配适合于,cDNA,高效表达的必要元件,大规模培养条件和无血清及无蛋白培养条件的探索,CHO,细胞表达系统的不足和改进,21,表达系统发展方向,研发可表达复杂的真核基因的真核微生物系统或改造的原核微生物系统,真核表达系统中糖基化系统的重构,用作生物反应器的转基因动物系统,动物乳腺生物反应器,利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基因动物的总称。,2006,年,6,月，世界上第一个利用乳腺生物反应器生产的基因工程蛋白药物,重组人抗凝血酶,(ATryn),的上市许可申请获得了欧洲医药评价署人用医药产品委员会批准，,2009,年获得美国,FDA,批准上市。,22,（三）生物药物的质量控制,新的蛋白质纯度检测指标,:,化学修饰类型：脱氨基,二硫键错配,氧化,存在状态,:,降解片段,二聚体,多聚体,糖基化,蛋白质错误折叠,23,二、生物药物的药效和副作用改善,基因工程改造：现有上市重组药物中基因改造率达,30%,以上,翻译后修饰,24,（一）生物药物的基因工程改造,原则：,改变蛋白结构，在不弱化其生物功能及产生新的抗原性基础上优化其药代动力学,实例,：,Lispro,:,重组人胰岛素,B28,、,B29,之间颠换,聚体的可能性降低,1/300,，起速效作用,ReFacto,:,重组凝血因子,VIII,为缺失突变体,血友病有较好的疗效,注意,：,基因工程改变序列应非常谨慎，一些很小的变化可能导致蛋白构象的较大变化，诱发免疫反应,25,（二）生物技术药物的翻译后修饰,PEG,修饰,:,聚乙二醇,(polyethylene,PEG),共价修饰蛋白质,糖基化修饰,脂肪酸、白蛋白修饰,融合蛋白,:,不同蛋白的不同功能域通过基因工程手段构建成一个蛋白，具有双功能或新的功能,26,I,、,生物药物的,PEG,修饰,增加蛋白质的分子量，减少小分子蛋白药物被肾小管直接过滤清除作用,作为屏障挡住蛋白质分子表面的抗原决定簇，减少免疫原性，减少体内清除率,保护蛋白质不易被蛋白酶水解,提高溶解性、流动性，延长药物作用，减少毒副作用,均有利于延长蛋白药物的半衰期,27,已上市的,PEG,化蛋白药物,PEG,修饰前后体内半衰期比较,28,II,、,生物药物的,糖基化修饰,蛋白糖基化是真核生物常见的蛋白质翻译后修饰过程,三种形式,:,N-,糖苷,(N-glycan),、,O-,糖苷,(O-gly2can),、,糖基磷脂酰肌醇,(glycosyl phosphatidylinositol,GPI),。,蛋白质经糖基化修饰后产生数千种具有独特生物活性,糖蛋白,参与机体生命活动。,29,蛋白质的溶解性；,生物活性；,稳定性；,免疫原性；,蛋白药物的动力学作用,有效改善,在蛋白药物表面,增加侧链长度,增加蛋白质稳定性，阻碍蛋白酶对蛋白药物的降解,使蛋白药物,分子量增大,减少了肾小球滤过率,定点突变增加生物药物的糖基化水平,30,糖基化提高生物药物稳定性,糖基化,-,干扰素：热变性的敏感性降低,糖基化,-,白细胞介素,-5,(IL-5),：热稳定性增加,糖基化,-rhEPO:,在盐酸胍、加热和,pH,变化中比去糖基化,rhEPO,稳定,糖基化,-rhEPO,:,免受氧自由基损伤,31,糖基化增加蛋白质药物的生物活性、减少免疫原性,rhEPO,糖基化修饰产物,:,血浆中的半衰期显著延长，体内活性大大增强，单次注射小鼠时，相当于,30,40,倍的非糖基化,rhEPO,活性,瘦素加成糖类似物,:,治疗糖尿病小鼠疗效增加,10,倍，时间维持更长,mpl,配体加成,N-,连接糖类似物,:,明显改善小鼠中血小板生成量和持续时间,IgG1,糖基化,:,极大消弱抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒性,R05072759(GA101),:,第一个进入临床试验的人源化和糖基化,CD20,单抗，体内外研究疗效优于利妥昔单抗,32,糖基化提高蛋白类药物的血浆半衰期,EPO,的,33,位和,88,位糖基化修饰,:,体内半衰期是未糖基化修饰的,3,倍（,Amgen,公司研制已上市）,突变体,TK-tPA,:,糖基化,tPA-T103Q-296-299,四等位基因替换,-,延长了体内清除时间，同时保持正常的凝血活性,糖基化,-IL-3,:,聚集在细胞外基质中,-,血浆半衰期提高了,2,倍,33,糖基化提高蛋白质药物的靶向治疗作用,葡萄糖脑苷脂酶,(GBA)-,甘露糖结合,:,靶向肝中的巨噬细胞,唾液酸糖蛋白受体与含有末端半乳糖或氮乙酰半乳糖胺的糖蛋白结合,:,可作为组织特异性蛋白质靶向,带有特异性靶向病毒复制位点糖基化干扰素,:,有可能减小其毒性,34,III,、脂肪酸、白蛋白修饰延长半衰期,SOD-,白蛋白,：半衰期由,5min,提高至,6h;,超氧化物歧化酶,(Superoxide Dismutase,SOD,),，,白蛋白,-GH,：半衰期由,5min,提高至,2,3h,；,生长激素,insulin detemir,：脂肪酸修饰后的长效胰岛素类似物，,Novo Nordisk,公司研发，,2004,年,5,月在瑞士首次上市,干扰素,-2b-,白蛋白,(,Interferon alfa-2b-albumin,修饰的人白蛋白,-,干扰素，丙肝用药,),：能延长干扰素的半衰期。,35,IV,、融合蛋白,Enbrel(Amgen),：,TNF,受体和,IgG,的,Fc,片段的融合蛋白，含,934,个氨基酸残基，适应症为,风湿性关节,，,1998,年批准；,Ontak Ligand,：缺失细胞结合域的白喉毒素与,IL-2,的,N,端,133,个氨基酸残基的融合蛋白，适应症为,皮肤,T,细胞淋巴瘤,，,1999,年上市；,Amevive Biogen Idec,LEF-3,的,CD2,与,IgG,的,Fc,片段的融合蛋白，适应症牛皮癣，,2003,年上市,36,1.,抗体药物具有,高度特异性,，是靶向治疗的基础,2.,目前批准上市,27,种抗体药物，,临床转化率以及批准成功率都较高,3.,抗体药物生产条件复杂，,不易受仿制的威胁,4.,已上市的抗体药物具有很高的,市场回报率,，大大刺激了投资,抗体药物是大分子糖蛋白，结构复杂，不利储存，不能口服，,进入体内,5-7,天才能到达靶位置,;,2.,抗体药物研发费用较高，达,10-18,亿美元,抗体药物单剂用量大，质量标准高，生产成本高昂，价格昂贵,Avastin:,单个病人年度费用高达,4-6,万美元,三、抗体药物研发,缺点,:,37,抗体自身的抗原性,抗体靶抗原的不确定性,针对不同表位可能产生完全相反的生物学效应,抗体治疗的脱靶,抗体药物临床存在问题,38,使用剂量大,:,1,克,/,人,/,年,抗体生产厂商的年生产规模在几十至几百公斤,/,年；,固定资产投入大,:,建造年产抗体,300,500,公斤的工厂，需要,4,亿,5,亿美元投资,生产成本高,:,一般在,2000,5000,美元,/,克抗体,抗体药物的剂量大多在,2,6,克,/,人,/,年，病人的抗体药费负担在,1-4,万美元,/,人,/,年,销售单价低,:,治疗肿瘤或类风湿关节炎的抗体药物的价格约,3000,8000,美元,/,克,CHO,表达的,EPO,，其销售单价约,200,万美元,/,克,抗体类药物是价格最接近生产成本的一类生物技术药物,抗体药物的生产瓶颈,-,生产成本过高,39,解决方法,抗体药物 靶向药物,抗 体,核 酸,小分子,.,40,第二部分：生物大分子药物传递系统的研究,41,蛋白质、多肽,药物载体型传递系统研究进展,42,蛋白质、多肽药物,的特点：,结构复杂，理化性质不稳定,口服给药易受胃肠道,pH,、菌群及酶系统破坏,稳定性差,分子量大,生物膜穿透性差,吸收难,生物利用度低,药理活性高,生物半衰期短,体内清除率高,43,市场上的,多肽、蛋白,药物制剂及存在的问题,肠溶片和肠溶胶囊,优点：患者顺应性好,缺点：多肽、蛋白生物利用度低,溶液剂和冻干粉针剂,优点：疗效确切,缺点：稳定性较差,多肽、蛋白半衰期短,多次注射给药,患者顺应性差,靶向性问题，在体内只与特定的受体结合起作,用，受体在组织的分布影响多肽的药效,44,80,年代开始国外主要研制的新剂型：,非注射途径,给药及长效注射剂。,非注射途径给药,:,口服、鼻腔、肺部、颊含、直肠,、透皮、眼部、阴道等。,非注射途径给药的主要屏障是致密的肠上皮细胞,膜、胃酸和各种消化酶，,即生物膜及酶屏障,。,45,研究,多肽、蛋白,非注射途径给药制剂的重点,:,提高其对生物膜的通透性和抵抗酶的降解作。,主要方法有：,化学修饰,吸收促进剂,脂质体,固体微粒,46,微粒,穿过胃肠道上皮的,3,种可能吸收和转运途径,(I)paracellular uptake,(II)endocytotic uptake by enterocytes and,(III)M cells.,47,载体型传递系统思路,用适当的,载体材料包裹,，以减少药物与胃肠道中的酶类的直接接触，避免降解,载体材料应具有,生物黏附性,，以利定位释放，提高局部的药物浓度，促进吸收,考虑使用,吸收促进方法,来增加药物对胃肠道上皮细胞的透过性。口服生物大分子药物可通过肠多肽转运系统及,Peyers patches,等吸收。,48,载体实现药物传输之关键,49,生物可降解材料有,PLA,，,PLGA,等,保护蛋白药物不受降解，延长释放时间，或脉冲释放,上市药物：,亮丙瑞林,(Leuprolide acetate)PLGA,微球,那法瑞林,缓释微球注射剂,重组人生长因子,缓释微球注射剂,生物可降解微球,50,氨化明胶微球,(AGMS),鼻腔给药系统：,动物试验表明，干粉状,AGMS,能够显著提高,大鼠鼻腔,胰岛素,的吸收。,药物和微球之间的静电作用,被认为是影响药物释放行为的主要因素。,pH,敏感微球,:,一种,pH,敏感结肠定位微球提高了降钙素（,CT,，,Calcitonin,）的口服生物利用度,IL-2-PLGA,微球：,现有给药方法受剂量依赖的毒性和副作用限制。局部给药的,PLGA-IL-2,微球实现了,IL-2,的缓释。,51,原位微球：,将药物与可生物降解的聚合物溶解在特定的溶剂中形成注射剂，当注入体内后，聚合物随着溶剂的扩散而固化，从而形成微球，达到控制释药的目的。与常规的注射微球和皮下埋植剂相比，原位微球具有制备工艺简单，控释可靠及使用方便的优点。,最近，,FDA,批准了,Atrix Lab,公司生产的,亮丙瑞林,(leuprolide),缓释注射液,(,商品名,Eligard),，经小口径针头皮下注射后在体内形成微球，释放出亮丙瑞林，已用于,晚期前列腺癌,的姑息治疗。,52,53,聚合物修饰,PEG,修饰（,PEGylation,）,54,55,脂质体（,Liposome,）,56,肺部给药胰岛素脂质体,肺脏,表面积大,粘膜层薄,血管丛丰富,为蛋白类药物的吸收的好途径。但人体气道的复杂性和呼吸运动的影响使得肺部给药问题重重。,Huang,等研制的载,胰岛素脂质体气雾剂,，包封率达,40,，粒径约,1,m,有效增加药物在肺部滞留时间,提高疗效。,胰岛素脂质体在小鼠肺泡内均匀分布,57,DepoFoam,IGF-1,DepoTech,公司开发了,缓释多囊脂质体,制剂技术,(DepoFoam),它是一种脂质体多囊颗粒,每个颗粒内部有含水的药室，能溶解水溶性药物如蛋白质或多肽，室外由脂薄膜包裹。其中，,Depo l(,胰岛素样生长因子,-1,IGF-1,),可以在体内连续,10d,释放药物,半衰期达,142 h,而未包囊的,IGF-1,仅为,4h,。,58,胶束,有的肿瘤血管开口较小而脂质体体积过大，故难以通过,EPR,效应在肿瘤内部产生有效聚集。因此，一些体,积较小的传递,系统将更有效，,如蛋白聚合,物结合物及载,药胶束。,59,2.5,纳米粒,纳米粒,体内分布有一定靶向性,缓释特性,生物利用度提高,药物透皮吸收与细胞内药效发挥,60,举例：,供口服和皮下注射,INS,聚氰基丙烯酸酯纳米粒体内试验表明降皮下注射,INS,纳米粒降血糖效果能持续,6-72h,，而口服,INS,纳米粒的效果也显著好于未包裹的胰岛素。,International Journal of Pharmaceutics,288(2005)289293,CaCO,3,-,纳米粒作为胰岛素动物试验结果表明，这一透皮给药系统能显著降低正常和糖尿病大鼠的血糖水平，为开发胰岛素纳米透皮给药系统提供了有力支持,Diabetes Technol Ther 2006 Jun;Vol.8(3),pp.369-74,61,偶联单抗,OX26,的壳聚糖,PEG,纳米粒的,脑靶向研究,Z-DEVD-FMK,是一种特异性抑制,Caspase,酶的多肽，能够减少神经细胞的衰亡，但这一分子无法跨越血脑屏障（,BBB,）。利用,亲和素生物素复合物技术（,ABC,）设计,CS-PEG-OX26,纳米粒,，其能通过转铁蛋白受体介导的跨膜转运穿过,BBB,。,62,其他载体,无痛微针,Microneedle,透皮给药,胰岛素，寡核苷酸，,蛋白疫苗，,DNA,疫苗，,63,细胞穿透多肽,Cell penetrating peptide,Gros,等发现,Pep-1,能有效传递不少多肽、蛋白质药物进入细胞内，而无须进行化学交连。,Pep-1,在生理条件下稳定,毒性低，对血清不敏感等优点，故可以运用于蛋白多肽类药物传递系统的研究。,其可能的机制似乎并不涉及内吞途径，而是一,种直接的跨膜行为。,64,可能的跨膜机制,反向胶束,反向胶束转运,直接渗透转运,吞饮转运,65,3,待解决的问题,如何实现体内药物传输？,如何延长药物体内驻留时间，改变蛋白质体内药物动力学和体内分布性质？,如何维持制剂过程中的蛋白质结构完整性？,如何开发新剂型和新技术？,是否适于大生产，成本的问题？,66,疫苗载体型传递系统的,研究进展,67,疫苗免疫是控制微生物传播性疾病的有效手段，甚至被寄予治疗癌症的厚望。,传统疫苗存在很多问题：多次免疫,不稳定性,细胞免疫应答差,现代疫苗同样存在问题：免疫原性低,使用载体传递系统是解决方法之一。,68,微粒载体传递系统,微球,可生物降解微球一直是疫苗传递系统研究的重点。,将疫苗包裹于微球之中具有很多优势：,保护抗原,增加抗原递呈细胞（,APCs,）的摄取,缓释作用,69,近年来的研究热点,提高载体材料的亲水性,:,减缓降解速率以延长药物的释放时间,寻找适合的内水相,:,提高载药量 如复乳法,提高疫苗在制备或释放过程中的稳定性,表面吸附载药,:,用带负电的载体材料,制成微球后表面吸附带正电的,HIV-1 Tat,疫苗，免疫效果较好,如何提高微球穿过粘膜屏障的能力,:,扩散屏障（肠腔,Peyer,氏节,肠系膜淋巴结）对于所产生的抗体强度有很大的影响，,70,纳米粒载体传递系统,与非包裹疫苗相比具有以下优势：,保护抗原,抗原递呈细胞的限制性分布,高载药量,缓释作用,靶向传递作用,与微球比较具有以下优势：,在粘膜相关的淋巴组织（,MALT,）的吸收,提高,几倍到,100,多倍，且,粒径越小则吸收越好,。,有可能通过小肠上皮细胞的细胞旁路吸收。,71,近年来的研究热点：,粒径及电荷的影响,细胞模型研究,经皮给药,72,生物黏附载体给药系统,生物可降解微粒在粘膜给药中的吸收效率较低，通过使用,生物黏附材料,，,增加微粒在粘膜表面的滞留时间，,可以进一步提高微粒的吸收效率。,73,壳聚糖,缺点：,a.,中性及碱性条件下,水溶性差,b.,在生理,pH,条件下不,带电，因此失去增,加细胞旁路转运的,能力,优势：,a.,有较好黏附作用,b.,可促进细胞旁路转运,c.,微粒制备条件温和,d.,高载药量,壳聚糖衍生物,主要解决壳聚糖的,水溶性,问题，同时,增加黏附力,，,增加所带电荷密度等特征。,三甲基壳聚糖（,TMC,）,74,pH,敏感疫苗传递系统,对于口服给药系统来说，引起口服免疫失败的最大原因仍然是,胃内的低,pH,值以及消化道内的蛋白水解酶对疫苗的降解作用,。,使用,pH,敏感材料包裹疫苗或对微粒进行包衣，可以使疫苗在较高的,pH,环境下或,定位释放,，以减少由于疫苗过早释放所带来的不必要的损失。,75,脂质体及脂质体相关的给药系统,脂质体是具有双层磷脂膜结构的微囊，,抗原可以于脂质体相结合或连接到脂,质体的表面,。,由于脂质体的免疫佐剂活性不强，因,此可将,佐剂和抗原,共同包裹或结合到,脂质体的表面以提高免疫效力。,76,脂质体相关的给药系统,融合脂质体,（,Fusogenic liposomes,）,通过融合靶细胞促进包裹药物的细胞内传递,囊泡体,（,Fusogenic vesosomes,）,用融合脂质体膜包裹阳离子融合脂质体制成囊泡体（,Fusogenic vesosomes,），将包裹的脂质体直接释放进入抗原递呈细胞的包浆，减少了单纯使用阳离子融合脂质体时，抗原在进入细胞前的释放,胆盐体,（,bilosomes,）,在胃酸中可有效保护脂质体,胆盐是具有穿透效应的天然脂质，还可增加了脂质体的粘膜穿透效力和生物相容性,77,脂质体鱼精蛋白,DNA,复合物,病毒小体（,Virosomes,）,是包含病毒膜蛋白的脂质体复合物。,已在欧洲通过审查，将作为对抗,A,型肝炎病毒和流行感冒的免疫制剂用于鼻腔给药。,类病毒颗粒（,Virus-like particles,）,是自组装的、保留有病毒天然免疫原性的、无复制功能人造微粒，常由不具被膜的病毒体外制备。载有异种抗原的类病毒颗粒因为保留有天然的免疫原性，因此也被视为具有内在佐剂活性的载体。,78,M,细胞靶向给药系统,M,细胞分布在黏膜相关淋巴组织（,MALT,）的上皮细胞中，其功能是专门负责摄取粒径,10m,以下的病毒、细菌、毒素及微粒。,M,细胞表面具有,特异性的受体,，以这些受体为,靶点,设计靶向,M,细胞的传递系统，可为进一步提高粘膜给药系统的吸收效率提供新的途径。,79,免疫刺激复合物（,ISCOMs,）,由,磷脂，胆固醇，皂苷和蛋白质抗原通过疏水性相互作用聚集而成的胶体颗粒。,制备,ISCOMs,时，仅胆固醇和皂苷两种物质是必须的，其他物质都可以替换，如抗原、靶向装置、免疫调节分子，只要其具有疏水性，都可引入到,ISCOMs,的结构中，从而为其提供各种不同的性质。,皂苷使,ISCOMs,具有极强的佐剂活性。,既可用于系统免疫也可引发局部粘膜免疫。,80,缺陷：,ISCOMs,的强疏水性，只有疏水性蛋白和两性蛋白才能进入到其脂质结构中,解决方法：,蛋白变性暴露疏水性基团,蛋白修饰获得亲脂性,81,其他一些研究较多的给药系统,温敏凝胶,:,PluronicF,127,制成的温敏凝胶可与佐剂协同作用,纳米诱饵系统,（,Nanodecoy system,）,羟基磷灰石为核,、,亲水性聚羟基低聚物膜、,生物相容且可生物降解的纳米载体,。与活病毒极为相似。,与其他佐剂的区别在于，由于其表面存在聚羟基寡聚物使其不会形成聚集物，因此可以保持纳米级的结构，可保护蛋白质的空间构象，这一点对于其产生体液和细胞免疫应答的能力至关重要。,DNA,疫苗的病毒载体,:,腺病毒载体鼻腔给药可成功引起较强的体液和细胞免疫应答。载疫苗,DNA,的灭活痘苗病毒载体已进行人体临床实验，没有发现剧烈副作用。,82,存在的问题及未来的研究方向,粘膜给药系统中，粘膜吸收效率低仍然是最大问题,给药系统被抗原递呈细胞摄取及递呈的机理仍然不明,细胞模型缺乏,动物模型单一，临床实验少，,83,近期的研究重点,制备和释放过程中更有效的保护抗原,提高抗原的生物利用度，即增加抗原递呈细胞对抗原或给药系统的摄取,提高给药系统的免疫佐剂活性以提高免疫应答的强度,粘膜给药（鼻腔，口服，阴道）,84,谢 谢！,85,