WS 217-2008 急性出血性结膜炎诊断标准(卫生).pdf

ICS 11.020 cS9 23218-2008 ws 中华人民共和国卫生行业标准2 ws 217-2008 代替ws217-2001 急性出血性结膜炎诊断标准Diagnostic criteria for acute hemorrhagic conjunctivitis 2008-02-28发布号字2008-09-01实施叶F川、!:.主乓菲日OO主主仨音P发布ws 217-2008 前言J 根据中华人民共和国传染病防治法制定本标准。本标准代替WS217-2001(急性出血性结膜炎诊断标准及处理原则.自本标准实施之日起，WS217-2001废止.本标准与WS2172001相比主要变化如下:增加了病原学、流行病学、病毒微量中和实验鉴定技术、病毒快速鉴定技术(间接免疫荧光实验)、鉴别诊断及参考文献.删除了处理原则和治疗方法。本标准的附录A是资料性附录，附录B是规范性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出.本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准起草单位:首都医科大学附属北京同仁医院、北京市疾病预防控制中心。本标准主要起草人张风、金秀英、孙旭光、张文华、丁丽新.本标准所代替的历次版本为:WS 217- 2001. ws 217-2008 急性出血性结膜炎诊断标准J 1 范围本标准规定了急性出血性结膜炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断.本标准适用于全国各级医疗卫生机构及其工作人员对急性出血性结膜炎的诊断、报告。2 诊断依据2.1 流行病学史2. 1. 1 本病易导致流行或暴发流行，以夏秋季常见，流行期间元季节性。2. 1. 2 患者多有明显的接触感染史，通过眼手、物、水眼的途径接触传染。2.2 临床表现2.2. 1 临床症状潜伏期短，起病急剧，自觉症状明显，双眼先后或同时患病;有剧烈的异物感、眼红、眼刺痛、畏光、流泪等刺激症状;早期分泌物为水性，重者带淡红色，继而为数液性(参见附录A)。2.2.2 体征脸红肿，险、球结膜中、高度充血，多伴结膜下点、片状出血。早期角膜上皮点状剥脱，荧光素染色后裂隙灯检查可见角膜弥漫敢在细小点状着染。2.3 实验室检测2.3. 1 结膜细胞学检查见单个核细胞反应为主.2.3.2 结膜拭子涂擦或结膜刮取物培养分离出病毒，并应用微量中和实验鉴定为EV70或CA24v(见B.l)。2.3.3 结膜细胞涂片或细胞培养物涂片间接免疫荧光技术检测，查见EV70或CA24v抗原(见B.2)02.3.4 双相血清学检查，患者恢复期血清:fJcEV70或抗CA24v抗体比急性期血清抗体滴度升高注4倍(见B.3)。3 诊断原则根据流行病学史、临床症状、体征，结合结膜细胞学检查作出临床诊断。|临床诊断结合病原学检查或血清学检查作出确诊。4诊断4. 1 疑似病例同时符合2.1.2.2者;4.2 临床诊断病例同时符合2.1.2.2和2.3.1项者，4.3 确诊病例同时符合2.1 、2.2以及2.3. 2、2.3.3，2.3.4中任何一项者。5 鉴别诊断本病尚需与流行性角结膜炎、急性卡他性结膜炎、衣原体性结膜炎相鉴别(参见A.4)。1 ws 217-2008 - 附录A(资料性附录)急性出血性结膜炎的临床诊断A.1 病原学A. 1. 1 肠道病毒70型(enterovirustype 70, EV70 l和柯萨奇病毒(Coxsackievirusl A组24型变种(CA24v)是急性出血性结膜炎的病原体。A. 1.2 EV70属微小核糖核酸病毒呈球形，直径敏感细胞胞浆内繁殖。同流行养，易分离。A.3.3 A. 3. 4 自然病程7日10日，的理化及生物学特性。，为本病的主出血，出血最早多出现状剥脱，少见上皮下浸A. 3. 5少数患者可发生前葡萄膜炎，一吉野时曾叫嘿者可出现上呼吸道翩翩。极个别患者可出现神经系统症状，如下肢弛缓性麻痹、面神经麻痹等。A.4 鉴别诊断A. 4.1 流行性角结膜炎常由腺病毒8、19、37等亚型感染引起。潜伏期5日12日，接触传染，传染性强，可暴发或小范围流行，常年均可见散发病例。可先有上呼吸道感染、发热史。结膜明显充血、水肿，滤泡增生，少数可引起不同程度的结膜下出血。水样分泌物，常伴假膜形成。耳前淋巴结肿大。起病7日1O日内，出现浅层点状角膜炎，2周左右角膜中央出现数目不等的上皮下圆形浸润斑点，影响视力。角膜损害可持续2 ws 217-2008 数月或数年后消失或遗留云载。.- A. 4. 2 急性卡他性结膜炎由细菌感染引起，潜伏期l日2日，常见的致病菌为肺炎链球菌、Koch-Weeks杆菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌等。属接触传染，表现为结膜充血、水肿，毅液脉性分泌物，一般不波及角膜。如由Koch-Weeks杆菌或肺炎链球菌感染，结膜可出现小点状出血。A. 4. 3 衣原体性结膜炎由衣原体感染引起的急性滤泡性结膜炎，潜伏期3日4日.表现为眼险红肿、结膜高度充血、乳头增生、穹隆部布满滤泡。另外也可通过成人衣原体性生殖泌尿系感染的分泌物或污染的游泳池水引起。病程持续数周至数月。3 ws 217-2008 附录B(规范性附录r急性出血性结膜炎的实验室检测B.1 病毒的分离与鉴定B. 1. 1 标本的采集、运送和保存B. 1. 1. 1 患眼结膜囊泪液、分泌物是分离EV70、CA24v的主要标本。标本采集应在起病1日3日以内。B. 1. 1.2 用灭菌棉拭子涂擦翻转的上、下险结膜并拭取泪液立即投入装有灭菌生理盐水或Eagle液或0.5%水解乳蛋白Hanks液2mL的小试管巾.贴好标签.宣冰壶内携至实验室或低温(20C 70C)冻存。B. 1. 2 病毒分离B. 1. 2. 1 取出标本，无菌条件下揉洗棉拭子，压挤出标本液，加10%青霉素、链霉素(原浓度青霉素、链霉素各1万U/mL)，置4 C作用4小时后用作病毒分离。B. 1. 2. 2 细胞培养用生长单层的HeLa细胞或人胚肺二倍体细胞或其他敏感细胞.生长液为10%牛血泊Eagle液，含青霉素100U/mL，链霉素100U/mL，pH7. 27. 4。B. 1. 2. 3 倾去细胞管内生长液。每细胞管接种标本液0.2mLI吸附10分钟。每份标本液接种4个细胞管。加维持液(含2%牛JfiJ.青的Eagle液，pH7. 27. 4)0. 8mL/管。余标本液宜200C或700C冻存。细胞对照管4管，每管加维持液1.0mL370C温箱静宜培养。每日光学显微镜下观察细胞病变。3日4日更换维持液一次，连续观察7日。B. 1. 2. 4 细胞管出现细胞病变，表现为细胞圆缩、分散、胞浆内颗粒增加，最后细胞自管壁脱落，为分离阳性结果。细胞病变达十十十+时，将细胞收留冻存于20C或一70C，备TClD501滴定及病毒鉴定.第1代培养见可疑细胞病变时继续传代，待细胞病变稳定出现后20C或700C冻存。第l代培养培养7日不出现细胞病变时连续盲传2代，如仍无细胞病变则为分离阴性结果.B. 1. 3 病毒TCIDsoi商定B. 1. 3. 1 阳性细胞管冻融3次。2OOOr/min离心10分钟，吸取上清，加Eagle液10倍系列稀释为10-1至10-8病毒液，各加入细胞板内，每孔25L，每稀释度4孔细胞。B. 1. 3. 2 每孔加细胞，忌液25L，同时设细胞对照(25L稀释液十251L细胞悬液)，370C培养7日，观察细胞病变。B. 1. 3. 3 按Reed-Muench法计算出分离病毒株的TCID500B. 1. 4 病毒鉴定(微量中和实验)B. 1. 4. 1 将EV70或CA24v的标准血清稀释至20个单位(例如:血清效价为1: 160时，进行1: 8 稀释)。B. 1. 4.2 在96孔细胞培养板中每孔加入20个单位的标准抗血清25L和100个TCID50病毒25L，37C作用1小时，最后加入HeLa或其他敏感细胞悬液25L。同时设以下对照B. 1.4.2. 1 病毒滴度核实对照:第一孔加100个TCI乌。病毒25L，从第二孔开始进行倍比稀释病毒最后每孔加稀释液25L及细胞悬液25L;B. 1. 4. 2. 2 阳性对照:加100个TCID50病毒25L、稀释液25L和细胞悬液25L;B. 1. 4. 2. 3 阴性对照加稀释液50L和细胞悬液251L;B.1.4.2. 4 阴性血泊对照:每孔加100个TCID50病毒25L、不含特异性抗体的血泊25L和细胞悬液25L;4 ws 217-2008 B. 1. 4. 2. 5 将细胞板轻轻摇匀，37C、5%CO，温箱培养7日.B. 1. 4. 3观察细胞病变，以完全病变为判断标准.不发生细胞病变的证明其病毒能被标准血清所中和，以此鉴定病毒.B.2 间接免疫荧光试验法B.2.1 眼结膜细胞涂片B. 2. 1. 1 用棉拭子取结膜细胞，涂于清洁的玻片上，室温干燥，冷丙酣于4C固定10分钟.B.2. 1.2 -个患者标本作两个涂片，分别用抗EV70及抗CA24v单克隆抗体作间接免疫荧光试验，检查结膜细胞中的病毒抗原。B. 2. 2 细胞培养物涂片B. 2. 2. 1 拭子标本接种于细胞培养管中，出现可疑细胞病变时.取其中一管用毛细吸管吹打下细胞，经PBS洗涤做细胞涂片，室温干燥，冷丙嗣固定.B.2.2.2 分别用抗EV70及抗CA24v单克隆抗体作间接免疫荧光试验检查病毒抗原，既可以确定分离是否为阳性，又可以及时鉴定出病毒型别。B.2.3 间接免疫荧光试验法B. 2. 3.1 上述结膜细胞涂片或病毒分离涂片，分别加适当稀释的抗EV70及抗CA24v单克隆抗体，将玻片置于37C湿盒内30分钟。B. 2. 3. 2 取玻片用pH7.2-7.4的PBS洗涤3次，每次3分钟-5分钟。B. 2. 3. 3 如l适当稀释的抗鼠IgG荧光索结合物，置于37C湿盒内30分钟。B. 2. 3. 4 取出玻片，同上法用P.B.S洗涤3次，加50%中性甘汕P.B. S封片镜检，在荧光显微镜下细胞浆内见黄绿色荧光为阳性。B. 2. 3. 5 在实验中设阴性或阳性对照。B. 3 血清学检查B. 3. 1 发病1日-3日内采取患者急性期血清，发病后2周-4周采取恢复期血清，分别20CIAi存备检，B.3.2 双份血清15稀释，56C，30分钟灭活。B.3.3 在96孔细胞培养板上将上述血清从1: 5开始倍比稀释至1280，每孔量为25L。B. 3. 4 每孔加100个TCID50病毒25L，37C作用l小时，加细胞悬液25L.置37C、5%CO，温箱培养7日。以完全病变为判断标准，与哪型病毒中和fl判断为该型病毒感染。B.3.5 光学显微镜下观察细胞病变，以不产生细胞病变的血清最高稀释度的倒数为终点效价。5 ws 217-2008 P 参考文献1.金秀英.眼科微生物学f李凤鸣.眼科全书.北京:人民卫生出版社，1996 492-493 2.吴欣怡.角结膜疾病学.济南山东科学技术出版社，200296 3.徐锦堂，孙秉基，方海洲.眼表疾病的基础理论与l临床.天津天津科学技术出版社，2002 288 4.张文华.急性出血性结膜炎f杜平，651-653 5金秀英.in India. Emerg 7. Ghazali 0, Chua (11) , 154 10.张文华，应用6 .人民军医出版社，1991 due to enterovrus 70 in Melaka, ,1990 DON-hFN民华人Lj仁和卫生行业标准急性出血性结膜炎诊断标准国? r Pslt: 0.75 2009年1月第l版第1次印刷WS 217 -2008 出版发行人民卫生出版祖(中继线。10-67616688)地址北京市丰台区方庄芳群因3区3号楼邮编100078网址http:/E-mail: pmphpmph. com 购书热线。10-67605754010-65264830 印刷:北京新丰印刷厂经销新华书店开本8日JX 1230 字蚊22千字版;欠29年1月第1版书号.14117.206 定价.9.00元版权所有，侵权必究，打击盗版举报电话.[phone] (凡属印装质量问题请与本社销售部联系退换并1/16 111111111